湖南省1日龄雏鸡肌胃腺胃炎流行病学调查及其致病因素研究

为探究湖南省1日龄雏鸡肌胃腺胃炎的流行情况及其致病原因,本研究于2023年对湖南省11个不同种鸡场进行了15次1日龄雏鸡的肌胃腺胃炎流行病学调查及肌胃腺胃样品采集,进行病理剖检、病理评分、病理切片观察、炎症因子基因表达测定和霉菌毒素含量测定,并收集血清测定免疫球蛋白含量。结果表明,15次流行病学调查肌胃腺胃炎患病率为62.1%,病理剖检和病理切片观察发现患病雏鸡肌胃腺胃都出现了比较明显的溃疡和病灶以及黏膜层破损溃烂、炎性细胞浸润和肌层肌纤维疏松。患病雏鸡肌胃腺胃内炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-ɑ)基因表达和肌胃腺胃组织内玉米赤霉烯酮和T-2毒素的含量均显著高于正常雏鸡(P<0.05),血清中IgA、IgM和IgG含量均显著低于正常雏鸡(P<0.05)。综上所述,湖南省内1日龄雏鸡肌胃腺胃炎流行程度较为严重,种蛋中的霉菌毒素对肌胃腺胃的毒性作用及其所导致的鸡胚免疫能力下降可能是导致1日龄雏鸡肌胃腺胃炎的重要因素。

肝细胞癌PD-1免疫治疗敏感性的靶基因分析

目的探究肝细胞癌(HCC)患者程序性死亡受体1(PD-1)免疫治疗敏感性的特征基因。方法通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)及差异性分析筛选与PD-1免疫治疗敏感性相关数据集GSE202069及ERP117672中共同差异基因,将上述共同差异基因通过Lasso回归筛选PD-1免疫治疗敏感性的特征基因;通过GEPIA及Ualcan数据库预测特征基因在HCC的表达水平,通过实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹(WB)及免疫组织化学染色(IHC)实验验证其表达。构建过表达3-羟基丁酸脱氢酶1(BDH1)细胞系,通过肿瘤功能学实验细胞计数试剂盒8(CCK-8)、平板克隆、EdU染色、细胞划痕、Transwell实验探究其对肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果通过WGCNA及差异性分析筛选出两项数据集共有118个共同差异基因,Lasso回归筛选出共同差异基因中与PD-1免疫治疗敏感性特征基因(含黄素二甲基苯胺单加氧酶3(FMO3),过氧化物酶体反式-2-烯酰辅酶A还原酶(PECR),BDH1,溶质载体家族7成员1(SLC7A1),细胞色素b5 A型(CYB5A)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PCK1));生存分析表明BDH1与HCC最为相关(总体生存率:P<0.001;复发:P=0.007)。GEPIA及Ualcan数据库分析显示BDH1在HCC组织中低表达,通过RT-qPCR、WB及IHC对本中心收集的HCC样本进一步证实BDH1在HCC中低表达。CCK-8、平板克隆、EdU染色、细胞划痕、Transwell实验结果显示,与Hep3B pCDH组相比,过表达BDH1使得HCC细胞吸光度降低(t=4.766,P<0.01),克隆形成数目减少(t=16.02,P<0.0001),增殖细胞比例下降(t=23.13,P<0.0001),细胞迁移率减慢(t=25.28,P<0.0001),穿过小室数目减少(t=10.78,P=0.004)。结论BDH1是观察HCC患者PD-1免疫治疗敏感性的特征基因;BDH1具有抑制HCC细胞增殖、迁移和侵袭的能力。

黄曲霉毒素M1免疫学检测方法研究进展

黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1,AFM1）是黄曲霉毒素的一种,是在动物摄入含有黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的饲料后,AFB1在体内经羟基化所形成的代谢物。AFM1主要存在于动物的乳汁中,在肝肾、肉、蛋以及尿液也有存在。随着人们生活水平的提高,乳及乳制品以其较高的营养价值深受消费者的喜爱。

甲型H1N1流感患者的免疫学特征分析

目的研究甲型H1N1流感患者免疫学特征的变化。方法应用流式细胞技术检测甲型H1N1流感患者CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的绝对值。结果甲型H1N1流感患者中CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞绝对计数降低的患者比例分别为80.95%、85.71%和61.90%,血沉和C反应蛋白升高的患者比例分别为5/17和7/21;甲型H1N1流感患者在发病初期CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的绝对值有不同程度下降,但到恢复期均恢复至正常范围,不同时期CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞绝对值比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论甲型H1N1病毒感染可能降低T淋巴细胞数量,但这种降低是可逆的。

IL-1 ra治疗角膜碱烧伤的免疫学机制研究

目的 研究白介素-1受体拮抗剂（IL—1ra）治疗角膜碱烧伤的免疫学机制。方法Wistar大鼠角膜碱烧伤模型，每组30只。Ⅰ组为阴性对照组，Ⅱ-Ⅳ组为IL-1ra结膜下注射治疗组（1000、500、200μg／ml，2次／d）。在烧伤后不同时间段（3、7、21d）收集角膜，行苏木精一伊红染色，CD3、CD4、CD8阳性细胞计数。结果IL—1ra治疗组角膜水肿程度轻，CD3＋、CD4＋、CD8＋细胞计数在各个时间点均少于对照组（P〈0．05）。7d、21d时1000μg／ml和500μg／ml组之间细胞计数无统计学差异（P〉0．05），但均少于200μg／ml组（P〈0．05）。结论 IL-1ra可剂量依赖性地抑制淋巴细胞在角膜的聚集和活化．下调角膜碱烧伤后免疫应激水平。

IL-12对小鼠肥大细胞瘤基因疫苗的免疫学作用

目的 研究小鼠肥大细胞瘤P815基因疫苗和鼠IL 12对该疫苗的免疫学作用。方法 将小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原基因P1A克隆到真核表达质粒pCI neo中 ;用P815细胞对DBA/ 2小鼠右腹侧皮下注射 ,构建P815小鼠肿瘤模型 ;以重组基因疫苗单独或与鼠IL 12真核表达质粒一起肌肉注射 ,观察肿瘤的消长、特异细胞毒T淋巴细胞激活和抗体的生成情况。结果 重组基因疫苗在体外有很好的表达 ,注射后CTL的杀伤效率为 4 0 % ,IL 12共注射的CTL杀伤效率达到 6 0 %。免疫后 ,30 %小鼠的肿瘤出现消退 ;同IL 12共注射则有 5 0 %的小鼠的肿瘤出现消退。 2种情况下都不能检测到任何特异抗体的产生。结论 重组P1A肿瘤疫苗能有效激活机体的肿瘤特异免疫应答 ;基因疫苗对小鼠P815肿瘤的治疗作用主要归因于细胞免疫 ;IL 12有增强这种免疫应答的作用。

新甲型H1N1流感轻症患者血清免疫学特征分析及临床意义研究

目的探讨新甲型H1N1流感轻症患者血清免疫学特征,指导临床治疗。方法选择新甲型H1N1流感轻症患者26例,取外周血清2 ml,采用ELISA方法进行单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、白介素10(IL-10)的检测。同时选取普通感冒患者32例,取外周血清2 ml,做对照研究。结果两组患者外周血清中IL-8水平差异有统计学意义(t=6.12,P<0.05),而MCP-1、IL-6和IL-10水平差异无统计学意义(t=0.56～1.52,P>0.05)。结论新甲型H1N1流感轻症患者和普通感冒患者外周血清免疫学特征基本相似,临床治疗方案也基本一致。

复制缺陷型重组腺病毒rvAdG1VP7免疫学效果的研究

目的 对 1株可表达A组轮状病毒主要结构抗原VP7的重组腺病毒rvAdG1VP7的体内免疫学效果进行研究。方法 通过灌胃和滴鼻 2种途径对BALB/c小鼠进行免疫 ,并对免疫后小鼠体液和黏膜免疫进行分析。结果 初次免疫后 ,2组小鼠均有应答 ,但血清IgG抗体滴度及阳转率不同。再次免疫后 ,显示出明显的加强效果。除了血清IgG外 ,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA。滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到SIgA ,灌胃组仅在肠道检测到SIgA。滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。对滴鼻组小鼠肺灌洗液IgG/SIgA的阳转率进行了比较 ,发现IgG的应答水平明显高于SIgA。免疫后小鼠血清中IgG的动态观察表明 ,抗体可长期持续至少半年以上。 结论 重组腺病毒载体rvAdG1VP7所取得的良好免疫学效果 ,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的进一步研制奠定了基础。

EspA-Stx2A1融合蛋白的表达、纯化及其免疫学活性

目的在原核表达系统中表达肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHECO157∶H7)Ⅲ型分泌蛋白EspA与Stx2毒素A1亚单位(Stx2A1)的融合蛋白,并对表达蛋白进行纯化及免疫学活性检测。方法PCR扩增espA和stx2A1全长基因,利用重叠延伸PCR技术获得espA-stx2A1融合基因,T-A克隆后插入表达载体pET-28a(+),构建原核表达质粒pET-28a(+)-espA-stx2A1,转化大肠杆菌BL21(DE3),分别在37℃和25℃用IPTG诱导表达。以EspA单克隆抗体亲和层析柱纯化目的蛋白,免疫小鼠,检测其免疫原性及抗血清的反应原性,并以天然Stx2毒素攻击,观察保护效果。通过细胞毒试验检测免疫小鼠抗血清的体外中和作用。结果重叠延伸PCR方法扩增出1319bp的融合基因片段,重组表达质粒构建正确;目的蛋白在25℃时的表达量明显高于37℃,约占菌体总蛋白的40%。两种温度下,目的蛋白均主要以包涵体形式存在;纯化后蛋白纯度可达90%。Western blot结果证实,融合蛋白与EspA单克隆抗体和Stx2A1单克隆抗体均发生特异性反应。融合蛋白免疫小鼠制备的抗血清能分别与O157∶H7的EspA、Stx2A发生特异性免疫反应。融合蛋白免疫小鼠能够抵御致死剂量天然Stx2毒素的攻击,保护率达95%。免疫小鼠血清可以中和天然Stx2毒素对HeLa细胞的毒性作用。结论已成功表达了EspA-Stx2A1融合蛋白,纯化的蛋白显示出较好的免疫保护效果,为研制EHECO157∶H7基因工程多亚单位疫苗奠定了基础。

联合免疫治疗对肝移植大鼠移植肝组织学和外周血Th1/Th2细胞因子的影响

目的用抗CD-40L单抗加小剂量CsA联合免疫治疗肝移植大鼠受体,观察其生存时间?移植肝组织学和Th1/Th2细胞因子谱的变化。方法建立大鼠肝移植模型后,将动物随机分为4组。A组为同基因移植组,SD→SD;B组为同种异体移植组,SD→Wistar,不用任何免疫抑制治疗措施;C组,SD→Wistar,采用CsA处理;D组,SD→Wistar,采用CsA加抗CD-40L(CD-154)单抗处理。观察各组肝移植受体生存期和移植肝病理变化;用ELISA法检测外周血细胞因子水平。结果A,D组均可长期存活,B,C组生存时间分别为(13.8±2.4)d,(29.8±4.1)d;B,C组病理组织切片见中/重度急性排斥反应,D组移植肝组织损伤程度显著减轻,A组基本无排斥反应。B组血清IL-2和IFN-γ高于其余各组(P<0.05),C,D组IL-4,IL-10水平较B组有所升高(但P>0.05),尤其D组IL-10表达水平显著高于B组(P<0.05)。结论联合免疫治疗可有效抑制其急性排斥反应,延长大鼠肝移植受体的生存时间。Th2类细胞因子IL-4和IL-10的高水平表达与诱导移植耐受、抑制排斥反应有重要关系,它有助于大鼠肝移植受体和移植肝的长期存活。

日本血吸虫童虫cDNA文库免疫学筛选及H1基因的克隆

目的 获取可能编码新的血吸虫诊断和候选疫苗分子的 c DNA克隆。 方法 利用血吸虫病患者的血清筛选日本血吸虫童虫 c DNA文库 ,获得一批阳性克隆 ,并对 H1克隆插入片段的核苷酸进行序列测定。根据结果 ,一方面进行同源性分析 ;另一方面设计合成引物 ,应用 PCR法进行扩增 ,并将其克隆入 p GEM-T载体。 结果 用抗血清初筛约 7.2× 1 0 3个重组的噬菌体 ,得到 1 2个持续阳性反应克隆 ,其中 H1克隆的插入片段长度为 1 1 86bp,具有一个 5 91 bp的完整开放阅读框 ,与现有的基因无任何同源性。利用 PCR法成功地扩增了该基因 ,并克隆入载体 p GEM-T。 结论 从 c DNA文库中筛选的对血吸虫感染可能具有保护作用的分子克隆是可行的 ,为进一步研究提供了基础。

问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定

目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增候选T/B联合表位片段,采用噬菌体展示及SDS-PAGE等技术获得含不同T/B联合表位的重组P。分别以rLipL41/1和rLipL41/2抗血清、黄疸出血群赖型赖株全菌抗血清和钩体患者血清为一抗,采用Western Blot检测各抗血清与各重组P免疫杂交反应性。结果:根据预测结果选择了LipL41s中8个共有或差异T/B联合表位。经PCR扩增获得了上述T/B联合表位片段。各T/B联合表位片段均准确插入噬菌体P蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述8个T/B联合表位,但其WesternBlot杂交信号强度存在差异,其中共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233与不同抗血清的信号较强且稳定。结论:所选择的8个T/B联合表位均为LipL41的有效抗原表位。共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233可作为钩体MAP疫苗的首选抗原表位。差异T/B联合表位LipL41s-89和LipL41s-299与不同抗血清有免疫交叉现象。

BALB/c小鼠作为单纯疱疹病毒1型感染模型的免疫学分析

在单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)小鼠感染及其相关研究中,临床病理和免疫学指标对其分析具有重要技术意义。本研究观察了HSV-1在不同条件下感染BALB/c小鼠后的多个免疫学指标,包括外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)群体中树突细胞比例及功能、血清中和抗体水平、PBMC中HSV-1抗原特异性T细胞水平,以及潜伏感染期小鼠神经组织中CD8^+T细胞浸润情况。结果显示,HSV-1毒株Mckrae、17^+以角膜及滴鼻途径感染3周龄及6周龄BALB/c小鼠后,小鼠PBMC中树突细胞数量增加,并显示出刺激病毒抗原特异性T细胞增殖的能力。病毒感染后35d,小鼠PBMC中未检测到白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)^+抗原特异性T细胞,但能检测到低水平的γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)^+抗原特异性T细胞;小鼠血清中未检测到或仅能检测到低水平的中和抗体。HSV-1以皮下及足垫注射途径感染BALB/c小鼠90d后,足垫感染途径较皮下感染诱导出更高水平的血清中和抗体,PBMC中可检测到IL-4^+及IFN-γ^+抗原特异性T细胞,但不同毒株及小鼠周龄之间出现T细胞反应程度差异。组织病理学结果表明,各组小鼠三叉神经组织中均有CD8^+T细胞浸润。这些结果提示,不同HSV-1毒株以不同途径感染不同周龄BALB/c小鼠后,均可刺激树突细胞成熟及呈递病毒抗原,但血清中和抗体及PBMC中病毒抗原特异性T细胞水平在不同毒株、感染途径及小鼠周龄之间有差异。

狂犬病毒CTN-1v株毒种的不良反应与免疫学效果研究

目的 观察CTN - 1v株毒种的不良反应及免疫学效果。方法 选择 2 0例健康者接种应用CTN - 1v株毒种制备的狂犬病疫苗 ,观察接种者的不良反应进行中和抗体测定。结果 接种者的不良反应率为 35 % (7/ 2 0 ) ,中和抗体阳转率为 10 0 % ,免疫后 14天中和抗体水平平均为 13 0 8IU/ml(5 83～ 2 2 16IU/m1)。结论 CTN - 1v株毒种 ,不良反应轻微而且免疫原性良好 。

日本血吸虫磷酸丙糖异构酶Th1型表位的免疫学鉴定

目的筛选和鉴定日本血吸虫磷酸丙糖异构酶(SjTPI)的Th1型细胞表位,为构建短肽疫苗奠定基础。方法用BLAST比对并预测SjTPI的T细胞表位SjTPI-P18及其对照表位SjTPI-P9。设计并合成其编码DNA,重组入原核表达载体pET-32c(+)后进行表达,获得纯化的重组融合蛋白rSjTPI-P18和rSjTPI-P9。用rSjTPI、rSjTPI-P18及rSjT-PI-P9刺激经照射致弱尾蚴免疫、rSjTPI加强免疫的C57BL/6和C3H/HeJ小鼠淋巴细胞,3H-TdR掺入法检测淋巴细胞的增殖效果及细胞培养上清中IL-2水平;分别用重组rSjTPI-P18和合成SjTPI-P18刺激rSjTPI-P18、SjTPI-P18或PBS加弗氏佐剂两次免疫的C57BL/6小鼠淋巴细胞,并检测其细胞培养上清中IFN-γ及IL-4水平。结果参照曼氏血吸虫TPI T细胞表位预测的SjTPI-P18及SjTPI-P9,获得了与Trx融合表达的重组肽rSjTPI-P18及rSjTPI-P9。与rSjTPI-P9相比,rSjTPI及rSjTPI-P18均可刺激辐照致弱尾蚴免疫、rSjTPI加强免疫的C57BL/6或C3H/HeJ小鼠的淋巴细胞增殖且IL-2分泌量增加(P均<0.05);SjTPI-P18及rSjTPI-P18刺激经rSjTPI-P18或SjTPI-P18免疫两次的C57BL/6小鼠淋巴细胞分泌IFN-γ水平升高(P均<0.05),而IL-4水平较低。结论筛选和鉴定出的SjTPI-P18是C57BL/6小鼠特异的Th1型表位。

急性髓系白血病M_1的免疫学特征和预后分析

本研究探讨急性髓系细胞白血病M1(AMLM1)免疫学特征及其预后,同时探讨其与AMLM2以及急性淋巴细胞白血病(ALL)免疫学鉴别的要点。采用CD45/SSC双参数散点图设门,应用三色流式细胞术对47例M1的初诊患者骨髓标本进行免疫分型,并对其中17例进行核型分析;另外,选择同期51例M2的初诊患者及58例ALL初诊患者作为对照。结果表明:M1患者的CD33阳性率达到100%,且灵敏度高,但特异性低;M1患者的CD11b、CD15、MPO、CD117的阳性率均显著低于M2患者(p<0.05);Ly+AML的M1患者的T系抗原阳性率高于Ly+AMLM2患者(p<0.05);与ALLPro-B相比,AMLM1患者高表达HLA-DR,髓系抗原CD13、CD15、CD33、CD117、MPO,T系抗原CD4、CD7均显著高表达(p<0.05);与ALLPre-B相比,M1患者高表达HLA-DR、CD34;髓系抗原CD13、CD15、CD33、CD117、MPO,T系抗原CD4、CD5均显著高表达(p<0.05);与T-ALL相比,M1患者早期抗原HLA-DR、CD34,髓系抗原CD13、CD15、CD33、CD117、MPO均显著高表达(p<0.05);M1患者中CD7+患者CR率和CD7-患者CR率之间没有统计学差异(p>0.05),CD34+患者CR率和CD34-患者CR率之间没有统计学差异(p>0.05),M1患者CR率低于M2患者(p<0.05),其达到CR的时间长,高白细胞白血病的发生率高(p<0.05),高白细胞白血病的CR率低(p<0.05)。结论:M1患者的髓系抗原CD33、CD13均高表达,早期抗原HLA-DR也高表达,但髓系抗原CD11b、CD15、MPO、CD117表达不高,T系抗原CD4、CD7高表达;M1和M2免疫学方面没有明确的、特征性的标志可用来鉴别,但M1患者的CD11b、CD15、MPO、CD117的阳性率均显著低于M2患者,在鉴别M1与M2时可作为参考指标之一;形态学上不易分辨的AMLM1和ALLPro-B,ALLPre-B,T-ALL可以通过免疫学特征的分析得到鉴别;CD117主要表达于AML,对于AML和ALL的鉴别诊断有意义;M1患者的预后比M2患者差。

宁夏各免疫政策阶段1~29岁人群乙型肝炎血清学调查结果分析

目的分析1992~2019年宁夏各免疫政策阶段1~29岁人群乙型肝炎血清学流行病学调查情况。方法采用描述性流行病学方法对调查资料进行统计分析。结果1992年、2006年、2014年、2019年4次乙肝血清学流行病学调查乙肝表面抗原(HBsAg)总阳性检出率分别为11.7%、4.0%、1.1%、0.5%,标准化后HBsAg标化阳性率随免疫规划政策调整呈现下降趋势,乙肝表面抗体(HBsAb)总阳性检出率分别为25.3%、62.3%、64.1%、76.3%,呈上升趋势。4次调查年份性别间HBsAg及HBsAb阳性检出率均无统计学差异。乙肝疫苗接种率高的人群HBsAg阳性检出率低,HBsAb阳性检出率高。结论随宁夏免疫规划政策调整,乙肝疫苗接种率不断提高,乙肝保护性抗体水平显著提升,维持高水平乙肝疫苗接种率,保证乙肝免疫保护屏障持续有效。

Zmu-1:DHP豚鼠免疫学功能研究

采用ELISA法和流式细胞法,测定经卵白蛋白(OVA)免疫豚鼠的球蛋白Ig和T淋巴细胞增殖率的变化规律,研究Zmu-1:DHP豚鼠对病毒易感性的免疫学基础。结果表明:①豚鼠最佳OVA免疫剂量为0.1 mg/只;②OVA刺激后,Zmu-1:DHP豚鼠产生的特异性IgG及其亚类抗体,与DHP豚鼠基本相同;③Zmu-1:DHP豚鼠经OVA刺激,T淋巴细胞的增殖率显著低于DHP豚鼠;④OVA刺激豚鼠很少产生IgE;⑤加与不加Al(OH)3免疫比较,IgG1含量变化较大。表明Zmu-1:DHP豚鼠的细胞免疫功能较低,体液免疫功能与其他豚鼠相同,初步认为T细胞免疫功能低下,可能是引起Zmu-1:DHP豚鼠对某些病毒较敏感的原因之一。豚鼠的变态性抗体IgE产量较小;Zmu-1:DHP豚鼠适合于制作感染模型、研究免疫学机制或免疫功能的动物模型。

儿童HIV-1感染免疫学研究现状

根据联合国艾滋病规划署最新统计数据，全球现有人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染者3300余万（3030万。3610万）例，其中儿童HIV一1感染者约200万（190万～230万）例，每年新发感染儿童60万例，仅2007年就有27万（25万～29万）儿童患者死于艾滋病（acquired immune deficiency syndrome，AIDS），约95％的HIV-1感染发生在医疗资源可及性差的发展中国家 。