奶牛瘤胃需氧及兼性厌氧菌的PCR-16S rDNA鉴定及日粮的影响

设计9个精料梯度的日粮饲喂干乳期成年荷斯坦奶牛,并对其瘤胃液中的部分细菌进行了分离,PCR-16SrDNA鉴定和动态检测。结果显示,以瘤胃液为原料,采用人工培养基共分离到56株细菌,并对7株具代表性的细菌进行了PCR扩增,经序列同源性比较,最终把细菌鉴定为牛链球菌(A0625、A1212、0131)、蜡样芽孢杆菌(0113)、地衣芽孢杆菌(0091)、短小芽孢杆菌(0083)和嗜热链球菌(0123)。同时还发现随精料浓度的增加,牛链球菌、芽孢杆菌及嗜热链球菌的数量均呈不同程度的上升趋势。结果表明不同精料浓度的日粮对奶牛瘤胃需氧及兼性厌氧菌有着不同程度的影响,其中对牛链球菌影响最大,从系统发育分析可知所分离细菌虽未形成新的细菌进化枝,但牛链球菌和嗜热链球菌的核苷酸序列仍发生了多处碱基突变。

采用16S rDNA鉴定甜瓜细菌性叶斑病菌

从甘肃河西、新疆阿勒泰甜瓜上分离获得的2株致病细菌,通过16S rDNA序列测定以及序列同源性比较,结合病原菌落培养性状、菌体形态观察和革兰氏染色反应等,初步确定当地甜瓜细菌性叶斑病菌为丁香假单胞杆菌[Pseudomonas syringae pv.lachrymans (Smith et Bryan) Younget al.]

獭兔源金黄色葡萄球菌16S rDNA鉴定与耐药性分析

金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌,多引发不同程度感染。2017年7月初,山西省某獭兔场出现大量死亡,病兔主要表现为呼吸系统症状。采集病兔呼吸系统各器官,通过实验室无菌培养,得到疑似病原菌优势菌株,对该菌株进行染色镜检并通过16S rDNA检测方法,与NCBI数据库进行比对,确定为金黄色葡萄球菌,其对小鼠有致病性,对分离到的菌株通过K-B纸片法进行药物敏感性测定。结果显示,对庆大霉素、链霉素、多黏菌素B、卡那霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、痢特灵耐药;对头孢氨苄、四环素、头孢克罗中敏;对阿米卡星、阿莫西林、头孢曲松、头孢哌酮敏感。

一株微生物采油菌的16S rDNA鉴定和绿色荧光蛋白分子标记

筛选到一株高效生产多糖的YX菌,油田先导试验证明该菌可以用于微生物调剖提高原油采收率(Microbial Enhanced Oil Recovery,MEOR).经16SrDNA分析鉴定,YX菌属于肠内杆菌属(Enterobacter.),为跟踪监测其动态信息,构建表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组质粒pET-30a(+)-EGFP,利用CaCl2法将其转化至YX菌,利用荧光显微镜可以观察到重组YX(GFP)工程菌的绿色荧光.结果表明YX菌可以被绿色荧光蛋白基因标记,用于微生物采油研究.

耐高浓度As(Ⅲ)菌株的16S rDNA鉴定及对其As(Ⅲ)氧化酶性质的研究

对从某研究所含砷废水中分离筛选得到的一株耐高浓度As(Ⅲ)且能氧化As(Ⅲ)的菌株(AS-01)进行16 S-rDNA基因序列相似性分析,将该菌株鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。该菌28 h内对As(Ⅲ)的氧化率达29.8%。对该菌亚砷酸盐氧化酶的酶学性质初步研究表明,该氧化酶的最适宜作用温度为30℃,最适宜pH为6.0,且为亚砷酸盐诱导型酶。

小飞蓬耐铅内生细菌的分离及其16S rDNA鉴定

通过生理鉴定和分子鉴定的方法,对经不同铅溶液处理的小飞蓬根、茎、叶的内生菌进行分离纯化。经分离纯化培养得到了31个小飞蓬内生细菌菌落,对菌落的培养特征、革兰氏染色等生理生化结果进行分析,并提取内生细菌的DNA,通过PCR得到其16S r DNA序列,由BLAST比对分析,并利用MEGA软件建立发育树等分子鉴定手段初步推断可知,所分离得到的内生细菌CC2、CC6、CC16和CC23是短芽孢杆菌属,CC14是节杆菌属。

乌鸡源多杀性巴氏杆菌杀禽亚种16S rDNA鉴定及药敏分析

2018年底某乌鸡场突然暴发一起急性死亡疫情,细菌分离纯化得到菌株JXPm01。该分离菌株经染色镜检、1 6S rDNA基因片段PCR扩增与测序分析,结果表明分离菌株JXPm01与多杀性巴氏杆菌同源性接近100%,其中与杀禽亚种同源性最高,达99.3%,初步判定分离菌株为多杀性巴氏杆菌杀禽亚种,该次疫情为禽霍乱。为防治该病提供参考,筛选敏感药物进行防治,笔者对分离菌株JXPm01进行了药物敏感试验,结果表明该分离菌株对氨苄西林、丁胺卡那、多西环素和恩诺沙星敏感,对头孢曲松、卡那霉素、氟苯尼考、红霉素、林可霉素和诺氟沙星耐药。

紫花苜蓿根瘤微生物组成及16S rDNA鉴定

目的;鉴定环青海湖地区紫花苜蓿根瘤内细菌组成的多样性。方法:试验以环青海湖地区紫花苜蓿根瘤作为供试材料,刚果红YMA培养基通过平板划线法进行细菌培养,进行分子鉴定。结果:共分离出14株菌株,分别属于苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain)、假单胞菌(Pseudomonas kilonesis)以及桃色欧文氏菌(Erwinia persicina)。结论:表明环青海湖地区紫花苜蓿根瘤内细菌具有多样性,本研究不仅拓展了紫花苜蓿根瘤内细菌多样性的研究方法,还为寄主植物根际促生菌的研究提供了分析思路。

木榄耐盐内生细菌分离及其16S rDNA鉴定

[目的]从木榄根茎叶中分离筛选鉴定耐盐碱菌株。[方法]以不同盐浓度的LB培养基分离筛选木榄根茎叶中耐盐内生细菌,对其进行生理生化分析和分子鉴定。[结果]从根茎叶中初步分离出耐盐的内生细菌24株,经革兰氏染色、过氧化氢试验、吲哚试验与甲基红试验均为阳性,淀粉水解酶有1株细菌为阴性。提取各菌株的DNA并扩增其16S rDNA序列,以HinfⅠ等4种酶进行酶切,选择不同类型酶切结果的代表菌株测序,BLAST比对分析并利用MEGA软件建立发育树,初步推断出,所分离的内生细菌分别为越南芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、白翎芽孢杆菌和巴氏葡萄球菌。[结论]该研究为培育耐盐农作物提供了行之有效的技术理论基础。

兔源魏氏梭菌16s rDNA鉴定与耐药性分析

魏氏梭菌病常引起兔急性腹胀、腹泻病,发病率和死亡率均较高。2018年11月初,山西省某兔养殖场出现大量急性死亡,病死兔以腹胀、腹泻为主要临床症状。采集病死兔胃内容物,在无菌条件下进行疑似病原微生物分离培养;对分离得到的疑似菌株进行革兰氏染色镜检并通过PCR扩增其16s rDNA序列,判定为魏氏梭菌;对判定为魏氏梭菌的菌株通过K-B纸片法进行体外敏感药物筛选试验,结果显示,对磺胺甲氧嘧啶的耐药率高达86.67%,对四环素的耐药率为80.0%,对泰乐菌素的耐药率为66.67%,均呈现高度耐药;对氧氟沙星、红霉素、氨苄西林、阿莫西林的耐药率分别为26.67%、20.0%、13.33%、13.33%,为中度耐药;对阿奇霉素和磷霉素不耐药。

鸭疫里氏杆菌南昌分离株的16S rDNA鉴定与药敏分析

为了对从南昌某疑似鸭疫里氏杆菌病的病死雏鸭大脑、肝脏中分离得到的1株菌株进行16S rDNA鉴定,并筛选敏感药物,试验采用染色镜检、PCR扩增、测序与序列比对分析及药敏纸片扩散法等对分离株进行研究。结果表明:经染色镜检,分离菌呈革兰氏染色阴性,菌体为单个或成双排列的小杆菌,无芽孢,将其命名为NC-RA1;PCR扩增得到大小约为1 500 bp的条带;分离株NC-RA1与鸭疫里氏杆菌16S rDNA基因同源性高达99%;分离株NC-RA1对氟苯尼考、替卡西林-克拉维酸、头孢噻肟敏感,对四环素中度敏感,对庆大霉素、卡那霉素等药物耐药。说明该分离株为鸭疫里氏杆菌,并且可以用氟苯尼考、替卡西林-克拉维酸、头孢噻肟对其进行防治。

食源蜡样芽孢杆菌16SrDNA分子鉴定及其抑菌活性的研究

对食源中筛选的具有抑菌活性、初步鉴定为蜡样芽孢杆菌的4株菌,进行16SrDNA分子鉴定,采用PCR扩增技术,建立4株菌的系统发育进化树,进行序列同源性分析,并通过琼脂打孔扩散法测定4株菌发酵液的抑菌谱.实验结果表明,4株菌16SrDNA基因序列基本一致,为同源蜡样芽孢杆菌,命名为BC2345.4株菌的发酵液具有较宽的抑菌谱,对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和沙门氏菌等常见病原菌具有抑制作用.

硒砂瓜根际促生菌筛选鉴定及其促生效应研究

研究旨在筛选获得硒砂瓜根际促生菌,为硒砂瓜微生物肥料的开发利用提供土著菌种资源和理论基础。以宁夏地区特有经济作物硒砂瓜根际土壤为材料,采用稀释平板法分离土著细菌,对筛选到的50株菌进行溶磷、产铁载体、产吲哚乙酸(IAA)以及固氮能力评价,结合16S rDNA序列分析对优良促生菌进行鉴定,并选定9株优良促生菌,研究其对硒砂瓜幼苗的促生作用。结果显示,50株菌中有22株解磷菌株的溶磷量在7.12~64.54 mg·L^(-1)之间;有30株具有产铁载体能力的菌株,定量结果表明其中11株为高产铁载体菌株(A/A r<0.5);有18株具有分泌IAA能力的菌株,分泌量在3.70~58.94 mg·L^(-1)之间;有9株菌在阿须贝平板上经5次传代仍能正常生长,初步确定其具有固氮能力。筛选得到的20株优良促生菌分别隶属于芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、肠杆菌属(Enterobacter)、不动杆菌属(Acinetobacter)、变形杆菌属(Proteus),其中6株菌兼具以上4种促生活性,11株菌兼具解磷、产铁载体、分泌IAA促生功能。接种促生菌后,对硒砂瓜幼苗的胚根、胚轴、鲜质量及干质量等指标均有促进作用。

东祁连山线叶嵩草内生细菌X4的产吲哚乙酸、解磷、抗菌和耐盐特性研究及分子鉴定

线叶嵩草内生细菌X4分离自东祁连山高寒草地,对其产吲哚乙酸、解磷、抗菌和耐盐特性及其分子生物学特性研究结果表明,其在含色氨酸的金氏培养基中分泌吲哚乙酸的量为50.74mg/L,溶磷圈直径/菌落直径(D/d)值分别为3.23和4.31,对辣椒立枯丝核病菌、黄瓜枯萎病菌、油菜菌核病菌及番茄灰霉病菌都有抑制作用,且致菌丝生长畸形,菌落生长的酸碱度范围为7～10,耐NaCl溶液范围为<7%,菌体短杆状,革兰氏阴性,无芽孢,16SrDNA序列与普城沙雷氏菌(Serratia plymuthica)最为接近。该菌具有微生物杀菌剂、改良土壤等潜力。

甘肃番茄细菌性斑点病病原菌鉴定

采自发病番茄植株上分离获得的菌株,经致病性测定、培养特性、革兰氏染色反应、菌体形态、16S rDNA基因序列分析、生理生化以及寄主范围测定,结果表明:甘肃省张掖市番茄细菌性叶斑病菌为丁香假单胞杆菌番茄致病变种[Pseudomonas syringae pv.tomato(Okabe) Young,Dye&Wikie],为此病的综合防治提供了依据。

甘肃省嘉峪关市洋葱鳞茎软腐病病原鉴定

结合形态学与分子生物学特征对甘肃省嘉峪关市洋葱鳞茎软腐病病原种类进行了鉴定,在KB培养基上对两株典型菌株的菌落形态和培养特征进行了观察和描述,16SrDNA序列测定和同源性比对结果表明两菌株的16SrDNA序列分别与GenBank数据库已知胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种和格氏沙雷氏菌的序列同源性均达99%,其片段大小分别为1 386bp和1 379bp。致病性测定结果表明,2种菌均能引起洋葱鳞茎软腐病,且洋葱基部的发病程度高于顶部,其中胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种的致病力强于格氏沙雷氏菌。按柯赫氏法则初步确定甘肃省嘉峪关市洋葱鳞茎软腐病病原种类为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种和格氏沙雷氏菌2种,由格氏沙雷氏菌引起的洋葱鳞茎软腐病属首次报道。本研究将为洋葱软腐病的防治提供理论依据。

降烟碱细菌-烟草节杆菌K9的分离及鉴定

采用烟碱为唯一碳源的选择性培养基,对烟草、植烟土壤及烟草污水中的细菌进行选择性分离,共分离得到97株能够分解利用烟碱的细菌,其中菌株K9分解能力最强。经生理生化分析以及16SrDNA序列同源性分析,鉴定为烟草节杆菌(Arthrobacternicotianae)。为微生物降烟碱的研究及应用提供了理论依据。

产铁载体菌的筛选鉴定及活化镉的性能探究

从湘江流域某冶炼厂周边土壤中筛选出高抗镉微生物,在镉离子浓度为2 mmol/L的培养基中正常生长。通过改进的CAS平板上检测出2株具有铁载体产生能力的细菌H1和H2。H1产物具有较强的荧光性能,而且H1菌对重金属Cd有较强的活化能力。接种4 d后,土壤中可溶性镉的含量(21 mg/kg)是对照组(10.4 mg/kg)的2倍多。用扫描电子显微镜观察显示其形态与假单胞菌类似;其16S rDNA序列与Pseudomonas sp.序列相似度达99%。

甘肃省定西市当归“水烂病”病原鉴定及致病性测定

水烂病是甘肃省当归上发生的一种病害。本试验对水烂病病原菌的形态特征、培养特性、生理生化指标进行了测定,同时结合16SrDNA序列测定和相似性比对,发现该病原菌与GenBank数据库已知荧光假单胞杆菌第2生物型(Pseudomonas fluorescens生物型Ⅱ)的序列相似性达99%,其片段大小为1 445bp,编号为ZB1。致病性测定结果表明,该病原菌对‘岷归2号’(新繁品种)致病力最强,‘岷归1号’(主栽品种)次之,对‘朝鲜当归’(引进品种)的致病力最弱。本研究首次报道了荧光假单胞杆菌第2生物型能引起当归水烂病。

马铃薯贮藏期主要病害拮抗内生细菌的筛选、鉴定及功能评价

马铃薯坏疽病、炭疽病和枯萎病是甘肃省马铃薯贮藏期最主要的病害,为了获得马铃薯贮藏期病害防治的生防菌株,利用对峙培养法从东祁连山高寒草地线叶嵩草内生细菌中筛选获得高抗菌株263XY1,其对马铃薯枯萎病菌、马铃薯炭疽病菌和马铃薯坏疽病菌的抑菌率分别达到67.17%,86.17%和70.89%;该菌株在含有色氨酸和不含色氨酸的金氏培养基中分泌的IAA分别为3.31和1.52mg/L,在PKO含无机磷培养基中的有效磷增量为38.94mg/L,具有固氮能力。经16SrDNA序列分析,其与死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis,登录号:JQ547633.1)同源性达99%,初步鉴定为死谷芽孢杆菌。