11份蜜环菌种质rDNA-IGS序列分析及液体培养基优化

为比较蜜环菌rDNA-IGS序列差异,筛选液体培养优势菌株及优化其培养基,采用引物5SA/CNL12进行rDNA-IGS扩增及测序,利用DNAMAN构建同源树并分析其序列特征。在相同的液体培养条件下培养11份蜜环菌种质,通过比较菌球的个数、直径、鲜(干)重以及折干率等指标,筛选出优良蜜环菌菌株,并采用正交试验对其液体培养基进行优化。结果表明:11份蜜环菌种质可分为两类,Ⅰ类包括M-01—M-05,M-08—M-10,Ⅱ类包括M-06、M-07、M-11;Ⅰ类中有7个位点存在变异,共有序列长度为861 bp,Ⅱ类中有17个位点存在变异,共有序列长度为804 bp,且嘌呤(A+G)均大于嘧啶(T+C)。两类蜜环菌种质的相似度为72.61%,共有序列长度为632 bp,其中碱基A、C、G、T所占比例分别为33.9%、24.8%、16.6%、24.7%。M-09液体培养表现较优,优化培养基为玉米淀粉8.0 g/L,黄豆粉8.0 g/L,葡萄糖20.0 g/L,蛋白胨6.0 g/L,酵母浸膏2.0 g/L,磷酸二氢钾2.5 g/L,七水硫酸镁0.5 g/L,维生素B11.0 g/L。以此培养基培养蜜环菌,最终菌球收率可达1.766 g/150 mL。

青藏高原黄绿蜜环菌纯培养菌种的分离培养及分子鉴定

首次从采自青藏高原、与高原牧草嵩草属Kobresia草本植物形成外生菌根的黄绿蜜环菌Armillarialuteo-virens子实体中分离获得一组织分离菌株,运用rDNA-ITS和rDNA-IGS-1测序技术对该组织分离菌株是否为黄绿蜜环菌的纯培养菌种进行分子鉴定,并基于黄绿蜜环菌的5.8S/ITS和IGS-1序列进行核酸序列数据库GenBank同源性检索比对、构建系统发育树。结果表明,本研究获得的黄绿蜜环菌子实体组织分离菌株即为其纯培养菌种。基于ITS的系统发育分析表明黄绿蜜环菌与口蘑科内其它属间物种的系统发育关系较远;基于IGS-1的系统发育分析表明黄绿蜜环菌与蜜环菌属内的其它种序列差异较大,系统发育关系较远,而与Lepiota属内的部分种具有较近的系统发育关系。本研究首次基于分子手段对我国青藏高原的黄绿蜜环菌种进行了分离培养、分子鉴定和系统发育分析,为黄绿蜜环菌的科学分类提供了分子依据。

不同地区荷花腐败病菌生物学特性及IGS序列分析

荷花腐败病发生普遍,对荷花生产危害巨大,已成为制约中国荷花产业持续发展的重要障碍。为明确中国荷花腐败病菌(Fusarium commune)的生物学特性及遗传分化情况,本文采用藕块接种法对采自广东、湖南、湖北3个不同地区的病原菌进行致病性测定,研究了不同温度、pH、碳氮源对病原菌菌丝生长的影响,同时利用rDNA IGS基因序列对采自不同地区的荷花腐败病菌株进行了系统发育分析。结果表明,荷花腐败病菌对温度、pH等适应范围广,温度在15~35℃,pH4~9均能生长,最适生长温度为25℃,最佳pH值为7,且能利用多种碳氮源。不同的碳源中,蔗糖和葡萄糖较适合该菌的生长;在供试氮源中,菌丝在蛋白胨的基础培养基上生长最快,在尿素的基础培养基上生长最慢;当温度为15、20、30或35℃时,湖北的菌株平均菌落直径最大;当pH值为4.0~5.0时,广东菌株的平均菌落直径较大,当pH值为7.0~9.0时,来自湖北的菌株菌落直径最大。不同地区的病原菌间致病力存在一定差异,基于rDNA IGS的系统发育分析表明,不同地区的病原菌株间存在一定的遗传分化,其中广东菌株与湖南菌株亲缘关系较近(同源性高达99.7%),遗传距离为0.003;而广东菌株与湖北菌株的亲缘关系较远(同源性为97.3%),遗传距离为0.027。