结核分枝杆菌rESAT6-CFP10和rPstS1-HspX融合蛋白的血清学诊断价值

目的 探讨结核分枝杆菌rESAT6-CFP10（rEC）和rPstS1-HspX（rPH）融合蛋白用于结核病血清学诊断的价值.方法 以rEC和rPH融合蛋白为抗原,用金标免疫渗滤法（DIGFA）检测370份血清中的抗结核抗体,其中肺结核患者血清131份,非结核肺病患者血清114份,健康人群血清125份.结果 rEC和rPH融合蛋白单一或联合检测肺结核患者血清抗结核抗体的的灵敏度分别为70.23％、71.76％和84.73％.联合检测的灵敏度显著高于rEC或rPH单一检测,且差异有统计学意义（x2=1.181,P＜0.01 ;x2=0.036,P＜0.05）.3种方法用于检测非结核肺病患者和健康人血清的特异性差异均无统计学意义（x2=0.527、0.097,P＞0.05）.结论 rEC和rPH融合蛋白均有较高的灵敏度和特异性,联合检测有助于进一步提高结核病血清学诊断的灵敏度.

重组融合蛋白CFP10-ESAT6在结核病血清学诊断中的初步应用

目的探讨结核分枝杆菌重组融合蛋白CFP 10-ESAT 6用于结核病血清学诊断的价值。方法分别用CFP 10-ESAT 6、ESAT 6和PPD检测220例确诊的结核病患者血清、30例非结核病呼吸系统疾病患者血清和50例健康人血清。结果rCFP 10-ESAT 6、rESAT 6和PPD检测的敏感性分别为45%、25%和57%;特异性分别为93%、95%和75%。rCFP 10-ESAT 6的敏感性高于rESAT 6,特异性高于PPD(P<0.05)。结论rCFP 10-ESAT 6应用于结核病血清学诊断具有较好的敏感性和很高的特异性,对于结核病的诊断有很好的应用价值。

重组结核分枝杆菌ESAT6-PPE68融合蛋白的制备

目的构建结核分支杆菌esat6-ppe68融合基因及其原核表达载体,在大肠杆菌中表达融合蛋白ESAT6-PPE68。方法用基因拼接(GeneSOEing)法扩增esat6-ppe68融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGesat6-ppe68。重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG(异丙基-β-D硫代半乳糖苷)诱导表达约69000带谷胱苷肽硫转移酶蛋白(GST)标签的rESAT6-PPE68融合蛋白,经谷胱苷肽-硫-转移酶融合蛋白纯化试剂盒得到纯化的融合蛋白,产物进行SDS-PAGE电泳、Western-blotting鉴定。结果重组质粒pGesat6-ppe68中目的基因测序结果与报道序列完全相同;在大肠杆菌中以可溶性非包涵体形式表达;表达量约占菌体总蛋白的40%,表达蛋白纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白;Westernblotting结果证实重组蛋白与确诊的结核病患者血清发生特异免疫反应。结论成功构建了原核表达载体pGesat6-ppe68,获得了rESAT6-PPE68融合蛋白,为rESAT6-PPE68融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础。