糖化酶生产菌种CICC2462的5.8SrRNA分子生物学鉴定

CICC2 4 6 2是我国酶制剂企业普遍采用的生产菌种 ,由于其不产孢子的特点 ,对该菌种的鉴定目前尚无定论。文中利用分子生物学技术对该菌种进行鉴定 :经菌丝体DNA提取、PCR扩增和序列测定 ,得到ITS1 5 8S ITS2序列 (约 6 0 0bp)。利用BIOEDIT ,TREEVIEW ,CLUSTALX等序列分析软件对该序列进行处理和分析 ,并将序列提交NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation) ,进行核酸序列同源性比较。经分析认为CICC2 4 6 2为黑曲霉变种 (Aspergillusnigervar )。

腐食性食蚜蝇分子生物学种类鉴定

对长沙市内采集到的四种腐食性食蚜蝇进行种类鉴定,确定是否为目的食蚜蝇。通过形态学方法检索食蚜蝇的形态特征,并同时提取4种食蚜蝇基因组DNA,对线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因片段进行PCR扩增和测序,测序结果在Gen Bank中进行比对,采用邻接法构建系统进化树。结果表明,采获的四种食蚜蝇的形态等与目的食蚜蝇特征相符,分别为羽芒宽盾蚜蝇、棕腿斑眼蚜蝇、灰带管蚜蝇和长尾管蚜蝇,其COⅠ基因序列在Gen Bank中进行比对,序列相似度都极高,基于COⅠ序列的系统发育进化树显示,灰带管蚜蝇和长尾管蚜蝇为同一分支。本研究结果为食蚜蝇的后续研究提供了理论依据。

喀什地区某牛场环形泰勒虫的分子生物学鉴定及分析

试验旨在鉴定喀什地区某牛养殖场的西门塔尔牛的病因,对疑似感染泰勒虫的病牛血液进行PCR检测。运用PCR方法对泰勒虫18S rRNA基因进行扩增、测序,通过MEGA 7.0软件构建系统进化树,同时进行遗传进化分析。结果显示,18S rRNA基因序列与环形泰勒虫中国新疆分离株(OM438135.1)同源性为100.0%,表明该场病牛为环形泰勒虫感染;系统进化树分析结果显示,该虫株与中国和巴基斯坦分离株亲缘关系比较近。研究表明,导致喀什某牛场西门塔尔牛患病的病原体是环形泰勒虫。

基于“传统+分子生物学”联用技术鉴定云南华宁产四数九里香药材

目的:鉴定民族药四数九里香药材。方法:采用“传统+分子生物学”联用技术:即在传统鉴定评价的基础之上,再采用DNA试剂盒提取样本DNA,结合九里香属植物ITS2基因序列设计引物,对样本进行PCR扩增,对所得产物进行双向测序,测序结果与GenBank中的九里香属植物ITS2基因序列进行比对,采用Mega 6.0软件计算序列间的遗传距离K2P,采用邻接法构建系统进化树,进一步对样本进行鉴别。结果:检测样本与九里香属植物K2P遗传距离介于0.017~0.048之间,其中与四数九里香(Murraya tetramera)K2P遗传距离最小为0.017,采用邻接法构建的系统树显示九里香属植物具有较好的单系性,均分别独立聚为1个分支,可以显著区分九里香属植物,检测样本与四数九里香(Murraya tetramera)聚为一支。结论:ITS2基因序列分析结果与传统评价结果相互佐证鉴定四数九里香,将为云南华宁产四数九里香的分类学研究提供科学线索。

西部喙缘蝽的形态和分子生物学鉴定

西部喙缘蝽为山东省黑松上的新记录种。为明确山东省威海市和青岛市黑松上发现的一种缘蝽科昆虫的类别,采用形态学和分子生物学方法[线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)和核糖体小亚基18S rRNA基因序列进行系统发育关系分析]对该昆虫进行鉴定。结果显示:(1)该昆虫体长15~20 mm,体宽5~7 mm,红棕色;前胸背板棕色;后足腿节膨大,胫节极度膨大;前翅中部具横向“之”字形白纹。(2)基于COⅠ基因和18S rRNA基因的系统发育树显示该虫与西部喙缘蝽(Leptoglossus occidentalis Heidemann, 1910)在同一分支上。基于形态学和分子生物学鉴定该昆虫为西部喙缘蝽。研究结果为西部喙缘蝽属昆虫的分类和鉴定提供参考。

3株野生羊肚菌的分子生物学鉴定与MAT基因研究

以贵阳市森林公园采集的3株野生羊肚菌样本为试验材料,采用5个片段(ITS、LSU、EF1-a、RPB1、RPB2)联合的方法对其进行了分子生物学鉴定,并进行了MAT基因研究。结果表明,3份样本分别属于Morchella sp.Mel-21、六妹羊肚菌(Morchella sextelata)和Morchella sp.Mes-15,经组织分离获得的3株羊肚菌菌株均能同时扩增出MAT1-1-1和MAT1-2-1基因片段。经单孢分离获得的180株菌株中,仅有16株菌株可同时扩增出MAT1-1-1和MAT1-2-1基因片段,证明3个羊肚菌样本的单孢菌株群体中存在一定比例的异核菌株;在仅含1种MAT基因的单孢菌株中,MAT1-1-1和MAT1-2-1基因的总体分布比率接近于1。

猪源不动杆菌分子生物学鉴定及致病性研究

猪源不动杆菌是一种常见致病菌,可以引发猪的肠道炎症甚至造成其腹泻。近年来,随着生猪养殖产业的快速发展,不动杆菌感染对养猪业造成了严重威胁。因此研究猪源不动杆菌的致病因子和毒力机制,对于探索其致病机制、预防和控制感染具有重要意义。对此,文章采用分子生物学技术,对猪源不动杆菌进行生物学鉴定,并对其致病性机制展开详细研究,以期为有效控制我国的猪源不动杆菌感染提供参考。

三种牛虻的形态学及分子生物学鉴定

为了准确鉴定采自黑龙江省大庆市的三种牛虻,采用形态学和分子生物学两种方法进行鉴定。形态学方法主要依据形态特征,如头部基胛和触角的形状;背板和翅膀的花纹等。分子生物学方法依据线粒体细胞色素氧化酶I序列(COX 1),首次扩增这三种牛虻的COX 1序列并分析。结果表明:形态学鉴定结果三种牛虻分别为雁虻(Tabanus pleskei)、广斑虻(Chrysops vanderwulpi)和土耳其麻虻(Haematopota turkestanica)。分子生物学结果显示,三种牛虻COX 1序列的长度分别为1 506 bp、1 500 bp和1 506 bp。序列比对结果分别与分与Tabanus chrysurus(NC 062705.1)的同源性最高为96.5%、与Chrysops niger(NC 067608.1)的同源性最高为90.1%、与Haematopota pluvialis(MT 584146.1)的同源性最高为91.1%。进化分析显示分别与相应的种属在同一个进化分子上。说明三种牛虻分别为雁虻、广斑虻和土耳其麻虻,为进一步虻携带病原的研究奠定基础。

分子生物学技术在药品微生物鉴定溯源中的应用

目的:为满足基于风险评估的微生物控制体系及药品质量全过程控制的要求,建立更加完善的药品微生物鉴定溯源标准化分子生物学技术体系。方法:总结各国药典中分子生物学标准体系的构成,并分析《中国药典》中收载的分子生物学技术及该技术在药品微生物鉴定溯源中的应用。结果与结论:分子生物学技术是进行药品微生物鉴定溯源的重要标准,不同的分子生物学鉴定方法都有其优势和局限性,需要根据需求选择最合适的方法,以期达到最佳效果。

18S rRNA/rDNA为主的分子生物学技术在瘤胃原虫分类鉴定中的应用

在反刍动物瘤胃微生物菌群中，瘤胃原虫占总微生物量的50％以上（Williams等，19921。但是由于其特殊的生长条件和复杂的形态，不能很好地研究其在瘤胃发酵中的作用。传统瘤胃原虫的分类鉴定主要以形态学为依据（Dogiel，1927；Ogimoto等，1981；Williams等，1992），但是由于在样品采集和处理过程中，

贝母的分子生物学鉴定方法的研究

AIM: In order to identify “Beimu” by molecular biology technology, the extraction method of genomic DNA and PCR amplification were studied. METHODS: The genomic DNA extraction methods by SDS, CTAB and DNA zol reagent were compared, so were DNAs from samples treated with different methods. The effects of DNA quality, annealing temperature and activity of Taq DNA polymerase on PCR products were studied also. RESULTS: The SDS method is simpler and cheaper. The fragment of genomic DNA extracted from fresh sample was longer and purer. The annealing temperature and activity of Taq DNA polymerase showed little effect on PCR amplification, while the quality of DNA affected the PCR amplification directly. CONCLUSION: By extracting genomic DNA from fresh sample and PCR amplification, a specific band was obtained.

牛泡沫病毒(BSV)3026毒株的分离及分子生物学鉴定

从一头牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）检测阳性的３０２６号牛外周血中，分离到一株病毒，即３０２６病毒株。体外细胞培养和反转录分析证明，此病毒是一反转录病毒，可在胎牛肺细胞中引起典型的泡沫样病变，形成合胞体。ＰＣＲ扩增和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交显示，此病毒的ｃＤＮＡ和ＰＣＲ产物均可与牛泡沫病毒（ＢＳＶ）阳性对照的ＨｉｒｔＤＮＡ杂交。３′ＬＴＲ上游一段３３０ｂｐ的ＰＣＲ产物序列分析表明，３０２６毒株与ＢＳＶ阳性对照相比发生了两个碱基的改变。所有这些表明，３０２６病毒是一株新发现的ＢＳＶ毒株。

分子生物学技术在酵母菌多相分类鉴定中的应用

随着分子生物学的发展和各项新技术的广泛应用,许多新的分子生物学技术被用来进行酵母菌的分类和鉴定。核酸杂交技术、限制性酶切片段长度多态性分析(RFLP)、随机扩增多态性DNA分析(RAPD)、脉冲电泳核型分析(PFGE)、rDNA序列分析、单链构象多态性分析(SSCP)等技术的应用为酵母菌的多相鉴定带来了突破性的进展,结合分子生物学技术的多相鉴定体系将成为酵母菌分类鉴定的最有效手段。

紫金山铜矿浸矿微生物中一株硫杆菌的分子生物学鉴定

对福建紫金山铜矿生物堆浸系统中的浸矿微生物进行分离纯化,对得到的纯化培养物采用了多相分类与系统发育分析方法,应用16S rRNA基因全序列分析技术,进行分子生物学鉴定、微生物形态性征与生理生化代谢特征鉴定。结果表明,该菌株归属于硫杆菌(Thiobacillus)属,可认定为Thiobacillus albertensis菌株。

转ScMV-CP基因甘蔗的分子生物学分析与鉴定

采用改良的CTAB方法提取转基因甘蔗幼苗的基因组DNA ,核酸蛋白测定仪分析及凝胶电泳结果表明 ,提取的DNA具有典型的DNA分子的标准紫外吸收光谱特点 ,DNA产量为 4 5～ 6 0 μg/ 10 0mg。同时根据质粒载体设计合成了 2对引物 ,分别扩增新霉素磷酸转移酶 (nptII)基因和甘蔗花叶病毒外壳蛋白(ScMV CP)基因。PCR检测结果表明 ,在 5 3株待检测的样品中有 2 4株同时含有这 2种转基因成分 ,其中 13株在Southern杂交中有杂交信号出现 ,其拷贝数为 1～ 3个。

嗜盐性乳酸菌的生理与分子生物学鉴定

对从酱醅中分离筛选出的耐高渗嗜盐性乳酸细菌,进行了生理生化鉴定,结果如下:该菌革兰氏染色呈阳性,过氧化氢酶反应呈阴性,可以在pH5.0下生长,在18%或更高的NaCl浓度中能够正常生长代谢,从葡萄糖主要产L(+)乳酸,属于四联球菌属的嗜盐性乳酸球菌。进一步对该菌进行分子生物学鉴定,测得菌株的16SrRNA序列与GenBank登记号为FSB201的嗜盐四联球菌(Tetragenococcus halophilus)具有99%的同源性。再将该16SrRNA序列与乳酸菌分类中17个模式菌株的16SrRNA序列共同创建进化树,发现筛选菌与GenBank登记号为AB106344、AB106343的嗜盐四联球菌亲缘关系最近,证明筛选菌应属四联球菌属中嗜盐四联球菌中的一种。

番木瓜环斑病毒株系的分子生物学方法鉴定

以 PRSV株系特异性引物对 PRSV的 PRSV12 6 (PRSV日本分离物 )、Ys、Vb和 Sm等株系进行 RT- PCR方法鉴定 ,引物 PR2 1/ PR2 2能把 Ys从 Vb和 Sm中鉴定出来 ,PR30 0 / PR30 1则能把 Vb从 Ys、Sm和 PRSV12 6中鉴定出来 ;用限制性内切酶 Hae II、Sau3A I和 Hinf I对 PRSV的PRSV12 6、Ys、Vb和 Sm等株系进行单酶切 RT- PCR- RFLP分析 ,Hinf I能把 PRSV12 6与 Ys、Vb和Sm鉴别开来 ,Sau3A I能把 Ys与 Vb和 Sm鉴别开来 ,Hae II则能把 Ys与 PRSV12 6、Vb和 Sm鉴别开来 ;以 P1/ P2为引物 ,对 Vb、Ys和 Sm株系进行 RT- PCR- RFLP- SSCP分析 ,结果能一次把三者较好地区别开来。

普通小麦-大麦异附加系的分子生物学技术鉴定

用植物染色体C-分带和小麦种子HMW-GS电泳技术,对普通小麦-大麦异附加系进行了鉴定。结果表明,异附加系WB9905和WB9912含有大麦的5H染色体,异附加系WB9906含有大麦的2H染色体。小麦种子HMW-GS电泳结果表明,异附加系WB9905,WB9912和易位系WB9917含有大麦HMW-GS的特征带。

木霉菌形态学分类检索与分子生物学鉴定

木霉菌(Trichodermaspp.)为世界性分布,广泛存在与土壤、腐烂的木材及蔬菜基质中。某些菌株是重要的工业酶和抗生素的产生菌,并作为生防因子用于防治多种作物病害。近些年来,木霉的分类和鉴定主要参考形态学特征(Gams和Bissett)和核酸序列分析。本文就这两个方面进行了总结整理,以期对国内木霉菌的分类和鉴定工作提供便利和帮助。

水稻抗盐突变体的分子生物学鉴定

对经EMS诱变和盐胁迫,反复选择得到的已稳定了9代的粳稻耐盐突变体进行了分子生物学鉴定。沿着每条染色体,按照Mc Couch等提供的水稻RFLP连锁图,用130个标记作探针,对对照和突变体进行了RFLP分析,结果表明,在耐盐突变体第七对染色体上两个连锁位点RG711和RG4发生了突变。另外,对根和叶的可溶性蛋白的双向凝胶电泳分析表明,盐胁迫条件下,突变体基因组中有盐诱导的基因表达,产生了新的蛋白质。