荧光定量PCR技术在猪病防治中的应用

生猪感染疾病时会直接对养殖场或养殖户的经济造成巨大损失,因此,做好生猪疾病预防工作显得尤其重要。利用实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR技术)能有效利用微量的DNA进行扩增,提高检测精度,对猪病诊治和防治具有重要作用。一、猪病的诊断和防治现状猪病预防成效能直接影响养殖效益,在我国农村有大量的个体户进行生猪养殖,但个体农户往往缺乏足够的养殖经验,文化水平普遍偏低.

用16S rRNA荧光定量PCR技术分析低出生体重儿肠道菌群变化及影响因素

目的监测低出生体重儿肠道细菌分布情况,并分析影响低出生体重儿肠道微生态平衡的因素。方法以低出生体重儿(1 500g≤体重<2 500g)为研究对象,采用16SrRNA荧光定量PCR技术检测新生儿出生后第1天、3天、7天粪便中双歧杆菌、乳杆菌、大肠埃希菌和肠球菌4种细菌的含量,比较正常新生儿与低出生体重儿肠道菌群构建的差异;分析不同胎龄、体重、喂养方式、疾病状态等因素对低出生体重儿肠道微生态平衡的影响。结果 (1)低出生体重儿组和健康新生儿组粪便中大肠埃希菌、肠球菌、乳杆菌和双歧杆菌含量与婴儿日龄呈明显正相关关系,且低出生体重儿组婴儿粪便4种细菌含量均明显低于健康对照组(P<0.05)。(2)2 000g≤体重<2 500g组低出生体重儿大肠埃希菌和肠球菌含量在各日龄明显高于体重<2 000g组新生儿(P<0.05),双歧杆菌和乳杆菌含量在3日龄和7日龄阶段明显高于体重<2 000g组(P<0.05),而1日龄阶段差异无统计学意义(P>0.05)。(3)母乳喂养组在3日龄和7日龄阶段双歧杆菌和乳杆菌含量明显高于乳制品喂养组(P<0.05)。(4)无并发症患儿组在3日龄和7日龄阶段乳杆菌和双歧杆菌含量明显高于有并发症组(P<0.05)。结论低出生体重儿肠道菌群构建规律异于正常新生儿,尤其是乳杆菌和双歧杆菌的定植差异更为突出;低出生体重儿的出生体重与肠道乳杆菌和双歧杆菌的含量呈正相关;母乳喂养对低出生体重儿肠道中益生菌的定植有明显的优势;新生儿相关疾病直接影响低出生体重儿肠道微生态的构建,可导致其胃肠道生态系统的异常;16S rRNA荧光定量PCR技术适用于评价婴幼儿肠道微生态状况。

应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术快速检测青海省海西州鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌耐链霉素基因

目的 应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术快速检测青海省海西州鼠疫自然疫源地鼠疫菌耐链霉素基因,为今后该地区突发人间鼠疫的精准临床用药提供理论依据。方法 分离培养海西地区1957—2009年间取自鼠疫患者、媒介昆虫及中间宿主的代表性鼠疫菌110株,提取其DNA,针对我国链霉素耐药基因rpsl基因设计引物P-F和P-R和TaqMan-MGB探针Probe1 [FAM]和Probe2[VIC],利用荧光定量PCR技术,进行耐药rpsl基因筛查。结果 110株被试菌株中FAM检测均为阳性(RFU峰值>2000);VIC阳性的为0株(RFU峰值<200)。阳性对照和空白对照成立。结论 实时荧光定量PCR结果显示,该地区未检测出耐链霉素菌株。

“一锅法”等温核酸扩增策略联合荧光定量侧流层析技术对多种细菌16S rRNA的超灵敏检测

致病菌对人类健康构成了极大的威胁,因此及时、灵敏地检测病原体是确诊感染源、预防疾病传播和改善患者治疗的关键。最近的研究表明,细菌的16S rRNA包含了种间差异信息,而典型的细菌则拥有约10000个16S rRNA拷贝。因此,使用16S rRNA作为检测模板对于低浓度病原体的即时检测(POCT)具有重大意义。

基于多重实时荧光定量PCR技术检测高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA的临床研究

目的 研究基于多重实时荧光定量PCR技术检测高危型人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA的价值。方法 选择2022年1月至2022年7月我院进行宫颈癌筛查的患者60例,分别采取多重实时荧光定量PCR技术测定高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA情况,并将病理学检查结果作为金标准,分析基于多重实时荧光定量PCR技术检测高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA的价值。结果 HPV 16、18、31、33等九类型的最低检测为10 copies/μL,但HPV 51、52、56、58等五类型最低检测是100 copies/μL。另外通过多重实时荧光定量PCR检测高危HPV E6/E7 mRNA和生殖道内常见病原菌例如大肠埃希菌、取淋病奈瑟菌、梅毒螺旋体、金黄色葡萄球菌等,其结果均显示阴性,且检测结果的特异性良好。薄层液基细胞学的检查结果与病理学检查并无差别(P>0.05)。多重实时荧光定量PCR技术的符合率91.67%(55/60),灵敏度83.33%(15/18),特异度95.24%(40/42)。结论 基于多重实时荧光定量PCR技术在HPV E6/E7 mRNA检测中意义重大,存在较高的灵敏度及特异度,可成为宫颈病变筛查的主要方式。

荧光定量PCR技术与酶联免疫法在手足口病肠道病毒检测中的应用价值比较

目的探讨荧光定量PCR技术(FQ-PCR)与酶联免疫法(ELISA)在手足口病肠道病毒检测中的应用价值。方法选取2021年1月至2022年12月就诊于广东省江门市妇幼保健院的疑似238例手足口病患儿,均行FQ-PCR检测与ELISA检测,统计FQ-PCR与ELISA病毒阳性检出率,以病毒分离培养及临床表现、血清实验室综合诊断结果为金标准,对比FQ-PCR与ELISA检测敏感度与特异度、准确度及检测窗口期。结果238例患儿中137例(57.56%)最终确诊为手足口病。FQ-PCR检测敏感度与特异度、准确度均高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05);FQ-PCR病毒阳性检出率较ELISA高,差异有统计学意义(P<0.05);FQ-PCR对通用型肠道病毒、Cox A16、EV71检测窗口期均短于ELISA检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与ELISA相比,FQ-PCR在手足口病肠道病毒检测中具有更高的特异度、敏感度,可提高阳性检出率,且检测窗口期更短,利于临床早期实施治疗。

实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的实践分析

当前,随着我国科技的不断发展,科研领域创新不断增加,使我国食品工程技术进入到了一个新的阶段,在当前时代背景下,食品工程科技创新催生了转基因工程等一系列高精尖技术体系,使我国食品产业发展规模不断壮大。随着近几年我国转基因食品种植面积不断扩大,食品质量控制难度也明显提高,如果不能实现对转基因食品具体质量情况的有效检测,会对人体健康产生较为负面的影响。而实时荧光定量PCR技术则是当前我国转基因食品检测过程中经常应用的技术,因此,想要实现对转基因食品质量的有效确定,应该灵活应用此项检测技术。基于此,本文对实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的应用进行了分析。

基层非洲猪瘟荧光定量PCR检测技术研究

随着现代化养猪业的快速发展,非洲猪瘟已成为全球养猪业最大的威胁之一。我国将非洲猪瘟列为重点防范的一类动物疫病,实行严格的防控措施,包括加强检测和监测、加强动物隔离和消毒、实行扑杀等紧急措施。在基层工作中,为了更快速、准确地检测非洲猪瘟病毒,多采用荧光定量PCR的检测方法。本文将围绕这个主题进行论述。

实时荧光定量PCR技术在肉及肉制品中的运用

文章首先介绍了实时荧光定量PCR的技术原理,随后选取83份肉及肉制品的样品,设计了对照试验。对照组采用常规的细菌培养法,实验组采用了实时荧光定量PCR技术,测定样品中沙门菌、金黄色葡萄球菌等4种致病细菌的数量。结果表明,实验组检测出沙门菌17株,阳性率为20.48%,明显高于对照组(阳性率7.23%);其他3种细菌方面,实验组的检出率也明显超过了对照组,说明实时荧光定量PCR技术在肉及肉制品的污染物检测中有着更高的特异性和灵敏度。在应用这一技术时,还要注意做好肉及肉制品的前处理,以及正确选用Real-time Q-PCR检测试剂盒,才能保证检测结果的可靠性。

用细菌16S rRNA荧光定量PCR法检测肠道菌群的变化

目的应用细菌的16S rRNA序列设计双歧杆菌、大肠埃希菌及乳酸杆菌的引物并对肠道的3种细菌进行定量测定。方法收集轮状病毒肠炎患儿及正常对照组的粪便标本提取DNA。取准确定量的3种细菌经系列稀释后抽提细菌的DNA做荧光定量PCR,制作出标准曲线,待测样品同时进行PCR反应并和标准曲线进行比较,获得各样品中3种细菌的量。结果患儿肠道中双歧杆菌和乳酸杆菌的数量较正常儿童明显减低,而大肠埃希菌的数量差异无显著性。与其他文献报道的用细菌培养的方法所得结果一致。结论荧光定量PCR是一种特异性高、敏感性强的定量方法。可正确定量肠道中的细菌数量。

实时荧光定量PCR技术在转基因玉米检测中的应用研究

采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对玉米中的内源基因Invertase和转基因玉米Mon810、Event 176中的外源基因进行了定量检测 ,建立了商业化转基因玉米Mon 810 (YieldGard)和Event 176 (Maximizer)的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度小于 0 .0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10

实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立

采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度 <0 0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10

实时荧光定量PCR技术

荧光定量PCR技术是一种目前国内外应用较为广泛的定量PCR技术,是通过始点定量和荧光检测系统实时监测累积荧光强度而实现的,具有灵敏度高、特异性强、线性关系好、操作简单等优点,不但能够用于基因定量检测,还能准确定量疾病相关基因的表达,现已广泛应用于人类和动物疾病的快速检测、定量分析、早期诊断、基因分型等方面。它可以采用绝对定量和相对定量2种方式实现定量检测,但都有各自的优缺点,需根据具体的试验选择合适的定量方式,从而得到更准确的试验结果。提高荧光定量PCR技术的特异性和灵敏度需从多方面着手,主要指特异性探针及引物的设计,选择合适的Mg2+浓度、引物和探针浓度、循环数等。

荧光定量PCR技术在植物研究中的应用

荧光定量PCR技术是近年发展起来的一种用于基因定量分析的PCR方法,自问世以来在基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域应用较为广泛。在植物研究方面应用起步较晚,现已开始用于植物基因表达分析、外源基因基因鉴定等方面的研究。介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点和试验中潜在问题和条件的优化,并对其在植物研究中的应用及前景作了探讨。

荧光定量PCR技术检测石蜡包埋组织结核杆菌DNA的应用评价

目的探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测石蜡包埋组织结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)在结核病诊断中的应用价值。方法 233例石蜡包埋组织标本采用实时FQ-PCR技术检测TB-DNA,同时进行抗酸染色和组织病理学检查,以临床诊断结果为金标准,分别计算TB-DNA、抗酸染色和病理学检查的灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值。结果 129例临床诊断为结核病的组织标本中,TB-DNA阳性107例,TB-DNA阴性22例;104例非结核病的标本中,TB-DNA阳性2例,TB-DNA阴性102例。TB-DNA检测的灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为82.95%、98.08%、89.70%、98.17%、82.25%,均高于抗酸染色的63.57%、95.19%、77.68%、94.25%、67.80%和病理学检查的77.52%、96.15%、85.84%、96.15%、77.52%。结论 FQ-PCR技术检测石蜡包埋组织的TB-DNA用于各种结核病的诊断具有灵敏度高、特异性强的优点,与病理学检查相结合可以大大提高结核病的诊断率,适合于临床推广应用。

荧光定量PCR技术检测vgb基因在棉花中的表达

应用荧光定量PCR技术SYBR Green I荧光染料法,对透明颤菌血红蛋白基因vgb在转基因棉花中的表达水平进行相对定量分析,建立了快速检测转基因产品中基因表达量的方法。通过该方法检测出了vgb基因在转基因棉花不同株系里的相对表达量,且表达量有差异。该方法具有灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快等特点。

建立快速定量检测猪瘟兔化弱毒苗的荧光定量PCR技术

在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5挿潜嗦肭杓埔欢砸锖鸵惶跤馓秸?利用荧光定量PCR原理,结合LightCycler检测系统,首次建立了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。结果表明,该方法的灵敏度为102拷贝数,线性范围为107-102,达6个数量级;标准样品的变异系数为2.3%-5.1%(n=10),疫苗样品组内实验变异系数为0.85%-2.8%(n=5)、组间实验为2.5%-7.3%(n=5),对同一样品分5次RNA提取和逆转录,其变异系数为5.0%;对9份疫苗样品进行了检测,与兔体定型热反应方法相比较,有很好的相关性;整个检测过程仅需4h。该法可望取代传统的兔体定型热反应用于疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供了一种新的、简捷有效的工具。

荧光定量PCR技术在性病临床标本实验诊断中的应用

目的 探讨荧光定量PCR技术在性病标本实验诊断中的应用。方法 同时用荧光定量PCR法和常规PCR法检测 189例性病门诊患者和 3 0例健康体检者的淋球菌 (NG)、沙眼衣原体 (CT)和解脲支原体 (UU) ,并与培养法作比较。结果 189例患者标本中 ,荧光定量PCR法对NG、CT和UU的阳性检出例数 (分别为 91例、67例和 88例 )均高于常规PCR法 (分别为 82例、5 5例和 77例 ) ,亦高于培养法 (分别为 80例、5 5例和 77例 )。 3种方法检测 3 0例健康体检者标本 ,结果均为阴性。与培养法比较 ,荧光定量PCR法的灵敏度、特异性、阳性预期值和阴性预期值均高于常规PCR法。结论 荧光定量PCR技术具有高灵敏性、高特异性、高精确性、效率高和污染小等特点 ,是一种有效、快速和简便的检测方法 ,具有广泛应用价值。

实时荧光定量PCR技术的类型、特点与应用

实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为:SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用于畜牧兽医领域不同方面的科研工作中,以期得到最优的定量检测效率。

内标荧光定量PCR技术在乙型肝炎病毒定量中的应用

目的 建立内标荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒 (HBV)DNA ,以避免PCR扩增过程中可能出现的假阴性或部分抑制。方法 在TaqMan荧光探针杂交PCR技术检测HBV载量的基础上 ,结合内标参照的方法指示PCR的扩增效率。结果本检测方法具有很好的特异性、重复性 ,检测敏感度达到 1× 10 3 copies/ml。经过对 382例乙肝患者标本测定证实 ,标志物为HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清检出率为 10 0 % ,标志物为HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)的血清检出率为 72 .0 % ,与Roche试剂比较 ,两者的相关系数为 0 .987。结论 本法快速、简便、特异性好、能指示病毒感染程度。