经癌胚抗原重组痘苗病毒转染的树突状细胞体外诱导特异性T细胞免疫

目的研究人癌胚抗原重组痘苗病毒(rV-CEA)转染外周血树突状细胞(DC)后能否在体外诱导CEA特异性细胞毒性T淋巴细胞免疫。方法将rV-CEA转染外周血单核细胞来源的DC后用于激发同源的T细胞,检测其对T细胞的增殖作用以及对CEA分泌性肿瘤细胞的杀伤活性,并与未经rV-CEA转染的DC激发的T细胞进行比较。结果经rV-CEA转染的DC激活的T细胞对CEA分泌性肿瘤细胞具特异性杀伤作用。结论rV-CEA转染的DC可以诱导CEA特异性T细胞活性。

CEA-重组痘苗病毒预防CEA阳性肿瘤的动物实验研究

目的：探讨 Ｃ Ｅ Ａ重组痘苗病毒对 Ｃ Ｅ Ａ 阳性肿瘤的预防作用。方法：构建 Ｃ Ｅ Ａ 阳性小鼠 Ｈｅｐａ 肝癌细胞模型（ Ｈｅｐａ Ｃ Ｅ Ａ＋ ） 。将实验鼠分为４ 组，先分别皮下接种痘苗病毒（ 野生型 Ｗ Ｖ Ｖ 或重组型 Ｃ Ｅ Ａｒ Ｖ）３ 次，再分别颈背部皮下注射 Ｃ Ｅ Ａ 阳性或 Ｃ Ｅ Ａ 阴性同源鼠 Ｈｅｐａ 肝癌细胞。观察动物反应并在接种癌细胞后每周测量一次肿瘤大小。结果：３ 个对照组各鼠颈背部皮下均可见有瘤块形成，并且以相近速率快速增长，３ 组之间无统计学上的显著差异，而接种 Ｃ Ｅ Ａｒ Ｖ／ Ｈｅｐａ Ｃ Ｅ Ａ＋ 组各鼠在观察期限内均无肿瘤形成。整个实验过程中实验鼠未表现有毒副反应。结论： Ｃ Ｅ Ａｒ Ｖ 通过诱导机体的免疫系统产生 Ｃ Ｅ Ａ 特异性的细胞和体液免疫应答反应，能有效预防小鼠移植性 Ｃ Ｅ Ａ 阳性肿瘤的形成。

CEA-rV治疗CEA阳性肿瘤的实验和应用研究

目的:探讨CEA重组基因痘苗病毒(CEA-rV)对实验动物CEA阳性肿瘤的预防和治疗作用。方法:1)预防组:将实验鼠分为4组,先皮下接种痘苗病毒(1、2组野生型W-VV,3、4组CEA-rV)3次,再分别皮下注射同源鼠肝癌细胞(1、3组Hepa-CEA-,2、4组Hepa-CEA+)。2)治疗组:同样4组,先皮下注射肝癌细胞(1、3组Hepa-CEA-,2、4组Hepa-CEA+),7d后再分别皮下接种痘苗病毒(1、2组W-VV,3、4组CEA-rV)。以后每周测量一次肿瘤大小,并观察动物反应。结果:1)预防组:接种CEA-rV/Hepa-CEA+组各鼠在观察期限内无肿瘤形成,而3个对照组各鼠皮下均有肿瘤形成,并且以相近速度快速增长(肿瘤体积平均3.5cm3)。2)治疗组,接种Hepa-CEA+/CEA-rV组小鼠皮下肿瘤生长缓慢,瘤块较小(平均1cm3),而3个对照组肿瘤生长迅速,瘤块较大(平均5cm3)。无论预防组和对照组小鼠在整个实验过程中均未表现有毒副反应。结论:CEA-rV对实验性阳性肿瘤具有良好的预防和治疗作用,而且预防作用更佳。

CEA-rv诱导特异性CIK细胞对Lovo细胞株杀伤作用的研究

目的探讨癌胚抗原重组基因痘苗(CEA-rv)负荷脐血来源树突状细胞(DCs)诱导特异性CIK细胞对结肠癌细胞株Lovo杀伤活性的影响作用。方法取制备好的CEA-rv,用脐血单个核细胞(CBMC)分别制备DCs和CIK细胞;用负荷CEA-rv的DCs和CIK细胞共培养,诱导CEA-rv-DC-CIK细胞。用流式细胞术检测DC免疫表型,MTT法检测CBMC、CIK、Ag-CIK、Ag-DC-CIK和CEA-rv-DC-CIK对Lovo肿瘤细胞株的杀伤活性。结果脐血DCs高表达CD86、CD40,中度表达CD83和CD80。实验组细胞(CEA-rv-DC-CIK)对Lovo细胞的杀伤能力(62%)明显高于对照组(P<0.01)。结论 CEA-rv负荷的DCs能增强CIK细胞对Lovo细胞的杀伤活性,为CEA阳性肿瘤的免疫治疗提供了新的思路。

荷CEA-rV的DC增强CD3AK对CEA阳性肿瘤特异杀伤作用的研究

目的 观察荷CEA-rV的DC增强CD3AK细胞对CEA阳性肿瘤细胞的特异性杀伤功能。方法 用脐血制备脐血单个核细胞（UBMC），培养3h后，收集悬浮细胞制备CD3AK，重悬贴壁细胞制备DC。DC培养3d时加入CEA-rV，制备CEA-vV＋DC；在CD3AK培养8d时，加入CEA-rV＋DC混合培养，制备CEA-rV＋DC＋CD3AK。用MTT法测效应细胞UBMC，CD3AK，DC＋CD3AK，CEA-rV＋DC＋CD3AK，分别对CEA阳性靶细胞：LOVO，A549和CEA阴性靶细胞：肝癌细胞株BEL-7402，红白血病细胞株K652的杀伤活性。结果 ①用CEA兔抗人单克隆抗体对四种靶细胞株的鉴定结果表明，LOVO和A549确是CEA阳性细胞株，BEL．7402和K562确是CEA阴性细胞株。②培养10d的DC流式细胞仪检测结果示：高表达MHCI，Ⅱ类分子CD86（82．7％），CD80（51．1％），CD83（57．5％），CD40（69.4％），低表达CD123分子，光学和电子显微镜观察，DC细胞呈不规则形，有大量突起和伪足，成熟DC直径15-20um，胞浆线粒体，内质网丰富。证明为成熟DC。③CD3AK细胞和单纯UBMC细胞的流式细胞仪的免疫分子表型结果是，无论CD3，CD4，CD8和CD28，在CD3AK细胞组中的比率都是UBMC组的二倍以上。说明CD3AK组中成熟T淋巴细胞量明显高于UBMC细胞组。④三种效应细胞CEA-rV＋DC＋CD3AK，DC＋CD3AK和CD3AK对四种靶细胞的杀伤率均比单纯UBMC组明显提高（P〈0.01），而且CEA-rV＋DC＋CD，AK组〉DC＋CD3AK组〉CD3AK组〉UBMC组。说明细胞因子，DC和CEA-rV都有进一步提高UBMC广谱的杀伤肿瘤细胞活性的作用。⑤CEA-rV＋DC＋CD3AK和CD，AK相比较，对CEA阳性细胞LOVO和A549的杀伤活性提高的显著性（P〈0．01）明显优于对CEA阴性细胞K562和BEL-7402显著性（P〈0．05）。说明CEA-rV＋DC能显著提高CD3AK细胞对CEA阳性肿瘤的特异杀伤活性。CEA-rV＋DC＋CD3AK组和DC＋CD3AK组相比，对CEA阴性细胞株的杀伤活性无显著差异（P〉0．05），而对CEA阳性细胞株的杀伤活性确能明显提高（P〈0．01）。进一步证实了CEA-rV能明显提高CD3AK对CEA阳性肿瘤的特异杀伤作用。结论 CEA-rV＋DC能明显提高CD3AK细胞对CEA阳性细胞株杀伤作用，单纯DC对提高CD3AK杀伤CEA阳性细胞的作用不显著，结果表明CEA-rV在提高CD3AK对CEA阳性肿瘤的特异杀伤作用中起着关键作用。