鼠疫耶尔森氏菌rV270抗原的克隆、表达及其免疫保护作用评价

目的:为研制鼠疫亚单位疫苗,克隆、表达并纯化去除产生免疫抑制作用序列后的鼠疫耶尔森氏菌LcrV抗原(rV270)。方法:依据已知的LcrV的核苷酸序列,避开其产生免疫抑制作用的区段设计引物,扩增rV270基因并克隆到pET24a载体中,在大肠杆菌BL21中表达His-rV270融合蛋白;表达产物先后经Co2+亲和层析和Sephacryl S-200 HR凝胶柱纯化,并在纯化过程中应用凝血酶切除His标签;氢氧化铝佐剂吸附重组抗原后免疫BALB/c小鼠,初次免疫后第21天加强免疫1次,第5周使用104CFU鼠疫菌141强毒株攻毒,测定其免疫保护作用。结果:rV270以可溶性方式表达;应用Co2+亲和层析柱和Sephacryl S-200 HR凝胶柱结合凝血蛋白酶切除His标签的方法可得到不含标签的较高纯度的重组蛋白;攻毒实验中实验组小鼠全部存活,而对照组全部死亡。结论:获得了具有良好免疫保护作用的rV270蛋白,可用于鼠疫亚单位疫苗的研究。

基于rV270抗原的鼠疫多孔微球疫苗的制备及其免疫保护作用评价

目的:评价生物可降解高分子材料多孔微球作为鼠疫亚单位疫苗佐剂的可行性。方法:制备可生物降解的高分子材料多孔微球,将rV270抗原蛋白吸附到多孔微球中制备微球疫苗,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,初次免疫后21d加强免疫1次,于初次免疫后第10周用600LD50鼠疫耶尔森氏菌攻毒,攻毒后观察14d。结果:攻毒后,微球疫苗免疫的小鼠全部存活,且健康状况良好,对照组小鼠几乎全部死亡。结论:生物可降解多孔微球可作为免疫佐剂用于鼠疫亚单位疫苗研制。