缓慢牵伸肢体延长周围神经损害自然修复过程的组织学研究

目的 :观察缓慢牵伸肢体延长后周围神经损伤的自然修复过程及结局。方法 :5 2只日本大耳白兔胫骨延长至 40 %后停止延长再分别继续观察 2周、4周、8周 ,观察各时相延长区胫后神经组织学改变。结果 :延长 40 %时 ,可见广泛的节段性脱髓鞘 ,朗飞氏结区增宽 ,且主要发生于大的有髓神经纤维。电镜下可见髓鞘呈双环状 ,空泡状改变及环形小体形成压迫轴突。并可见新形成的髓鞘。停止延长后随着时间的延长 ,这种改变逐渐修复。至 8周时基本恢复正常。结论 :缓慢牵伸下肢延长过程中周围神经的损害是可逆的 ,并可在短期内修复。

同种异体半月板联合骨软骨移植的实验研究

目的:探讨新鲜同种异体半月板骨软骨联合移植治疗胫骨平台毁损伤后骨关节炎的疗效。方法:成年新西兰大白兔36只,随机分为A、B、C3组,各12只。A组行右膝内侧半月板连同胫骨平台骨软骨移植,克氏针交叉固定骨块。B组行右膝内侧半月板移植,左膝内侧半月板取出制备新鲜冷冻半月板。C组行左膝内侧新鲜冷冻半月板移植。术后4、8、12周分批取材行大体观察、组织学检查和胫骨平台软骨氨基己糖(GAG)测定。结果:12周时A组移植胫骨平台软骨与B、C组半月板移植术后的内侧胫骨平台软骨氨基己糖含量差异无统计学意义;A、B组移植的半月板纤维软骨细胞数差异无统计学意义;A组半月板移植的纤维软骨细胞数多于C组。结论:新鲜同种异体半月板骨软骨联合移植能修复胫骨平台毁损伤。

缓慢牵伸肢体延长周围神经亚临床损害修复过程的观察

目的 探讨肢体缓慢牵伸延长周围神经亚临床损伤的自然修复过程。方法 6 2只日本大耳白兔胫骨延长至 40 % ,停止延长后 2周、4周、8周时观察胫神经损伤自然修复的组织学及感觉诱发电位 (CSEP)的改变。结果 延长 40 %时 ,可见广泛的节段性脱髓鞘 ,朗飞氏结区增宽 ,且主要发生于大的有髓神经纤维 ;电镜下可见髓鞘呈双环状 ,空泡状改变及环形小体形成压迫轴突 ;并可见新形成的髓鞘 ;停止延长后随着时间的延长 ,这种改变逐渐修复 ;至 8周时基本恢复正常。肢体延长造成了胫后神经明显的电生理损害 ,且随着延长幅度的增加而加剧。停止延长后 2周 ,CSEP的潜伏期恢复约 5 0 %。停止延长 4周恢复约 6 5 % ,峰值、面积亦恢复约 5 0 %。停止延长 8周 ,各项指标均恢复 95 %以上。结论 缓慢牵伸下肢延长过程中周围神经的损害是可逆的 。

胫骨平台骨折兔模型骨折愈合过程中的生物力学研究

目的观察胫骨平台骨折兔模型愈合过程中带钢板螺丝钉固定与去钢板螺丝钉所承受的最大载荷及最大点能量变化。方法采用70只新西兰大白兔,制作胫骨平台骨折模型,术中行钢板螺丝钉内固定骨折的胫骨平台,分别于术后当天,1、2、3、4、6、8周取材胫骨标本,7个时间点各取10只大白兔、共70个兔胫骨标本,在万能力学试验机上进行胫骨内侧髁垂直压缩试验,分别测量带钢板螺丝钉固定及去除钢板螺丝钉后标本所能承受的最大载荷、最大点能量。另取10只健康大白兔的胫骨标本,测量相应数据作为对照组。结果模型组最大载荷及吸收能量术后随时间延长逐渐上升,于3周时达到最大,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05),随后开始逐渐降低,在8周时又降至正常水平。两组测量值的变化趋势一致。结论在胫骨平台骨折兔模型愈合的早期过程中,骨折愈合强度呈由低至高然后逐渐下降的曲线变化,钢板螺丝钉内固定可有效促进胫骨平台骨折的愈合。

唑来膦酸对兔胫骨骨折愈合的影响

目的观察注射用唑来膦酸对兔胫骨骨折愈合的影响。方法 30只新西兰大白兔制成胫骨中段骨折、钢板螺钉内固定骨折模型,随后随机分为实验组和对照组。实验组在术后注射唑来膦酸0.1 mg/kg,对照组注射同样剂量的生理盐水。在骨折模型建立后的第1、2、3、4、6周,通过X线观察骨折愈合情况,并测定血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tartrate resistant acid phosphatase-5b,TRAP-5b)水平。在建模后的第2、3、4、6周,测定骨折端骨密度。结果实验组血清ALP水平均高于对照组;第3、4周,实验组外骨痂平均面积较对照组大,但差异均无统计学意义(P>0.05)。同阶段对比,实验组TRAP-5b水平均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组骨密度多数观察时间高于对照组,第4周时两组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论注射用唑来膦酸对稳定固定的兔胫骨横断骨折的愈合可能具有一定的促进作用。

祛瘀接骨丸对实验性兔胫骨骨折愈合作用的影响

目的验证祛瘀接骨丸促进骨折愈合的疗效,探讨其作用机理。方法采用家兔36只,制成双侧胫骨中1/3标准骨折模型,按随机原则分为对照组和实验组,分别予生理盐水、祛瘀接骨丸灌胃,动物定期处死,标本做X线检查、抗折力测试和骨痂干重称重。结果实验组的胫骨标本抗折力和骨痂干重与对照组比较有明显差异。结论祛瘀接骨丸能增加骨量,增强骨的抗折力,促进骨折愈合,明显提高骨折愈合质量。

齿接触半环抱钢板对骨折处皮质骨血供的影响

【目的】研究齿接触半环抱钢板对骨折局部钢板下皮质骨血供的影响。【方法】成年新西兰大白兔30只,体质量2.8～3.5 kg。双侧胫骨中段横形截骨,右侧用齿接触半环抱钢板内固定(实验组),左侧用同等型号的AO传统钢板内固定(对照组)。术后2、4、6周各10只处死后行墨汁灌注微血管造影术。而后获取骨标本,用手术显微镜观察钢板下皮质骨内微血管的形态,并进行钢板下全层皮质骨纵向照片,每批照片随机抽取30张,用全自动图像数字分析系统(video image digital analysis system,VIDAS)分析钢板下皮质骨内微血管面积分数。【结果】①钢板下皮质骨内微血管形态观察:术后2周,对照组钢板下皮质骨出现大面积缺血区,并持续到术后6周;术后2周,实验组钢板下出现较小范围的缺血区,但微血管走行及分布紊乱,到术后6周,缺血区基本消失,微血管走行基本恢复正常。②钢板下皮质骨内微血管面积分数分析:术后2、4、6周,实验组分别为对照组的1.42、1.96和2.43倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。【结论】齿接触半环抱钢板能够保护钢板下皮质骨血供,有利于骨折愈合。

兔胫骨火器伤骨缺损模型的建立

目的建立新西兰大白兔胫骨火器伤骨缺损动物模型。方法 32只新西兰大白兔,利用多功能生物撞击机二级投射装置系统,根据钢珠质量和氮气压力值分为4组。激光测速仪测量弹丸速度并计算致伤能量,观察局部伤情,测量贯通伤出入口平均面积、空腔体积,并影像学评价骨缺损长度。统计各组伤情并分析变异系数(CV),以评价模型伤情稳定性。结果所有动物均造成后肢贯通伤并胫腓骨开放性粉碎骨折。D组致伤能量最大,B、C组次之,A组致伤能量最小。B、C组贯通伤伤道出、入口面积和伤道容积等局部伤情指标稳定性优于A、D两组,骨缺损长度B组伤情稳定性优于其他3组。最终确立用4 mm0.24 g钢珠、氮气气压1.4 MPa、钢珠弹丸速度(776.9±19.7)m/s,造成胫骨骨缺损(1.62±0.16)cm,动物在伤后清创抗感染治疗后可长期存活。结论采用本方法模型制作简单,动物伤情稳定,可建立有效的兔胫骨火器伤骨缺损动物模型。

兔胫骨骨折的有限元模型

背景:医学生物力学有限元分析的原始资料多为人体CT数据,大范围的CT扫描势必会对人体造成一定的射线伤害。目的:建立兔胫骨骨折三维有限元生物力学模型。方法:选取雄性1年龄新西兰大白兔1只,开放锯断左侧胫骨中段,MIMICS10.01软件直接读取以层厚0.625mm对左侧胫腓骨不间断扫描得到以DICOM3.0格式刻盘保存的CT图片135张,经过定位图像、组织图片、内插值处理以及表面光滑化处理建立面网格模型,导入ANSYS10.0软件构建体并划分体网格,在MIMICS10.01中赋材质。结果与结论:建立了外形和几何结构逼真、生物材料接近正常组织的胫骨中段骨折有限元模型,经加载分析模型真实有效。可见应用MIMICS10.01和ANSYS10.0软件能快速建立兔胫骨骨折三维有限元生物力学模型,为进一步进行实验兔骨折愈合生物力学分析奠定基础。

兔胫骨骨膜细胞膜片的体外构建

目的体外采用维生素C构建兔胫骨骨膜细胞膜片并检测其基本生物学特性。方法培养兔胫骨骨膜细胞,采用维生素C诱导构建兔胫骨骨膜细胞膜片。采用显微镜对膜片进行观察,苏木精-伊红(H-E)及Masson染色检测膜片的结构及胞外基质;细胞活死荧光染色观察膜片的活力。结果体外成功分离培养兔胫骨骨膜细胞,CCK-8检测结果显示骨膜细胞增殖曲线呈S型增长,结晶紫染色显示其具有克隆形成能力,并具有多向分化能力。采用维生素C连续诱导14 d,可获得半透明乳白色膜样结构。H-E及Masson染色显示膜片由多层细胞及胞外基质构成,细胞活死荧光染色显示膜片由大量绿染的活细胞构成。结论维生素C可成功诱导兔胫骨骨膜细胞膜片,有望应用于骨缺损再生修复。

保留胫骨止点半腱肌重建兔前交叉韧带腱骨愈合实验分析

目的观察保留胫骨止点半腱肌重建兔前交叉韧带术后1年内腱骨愈合过程。方法取新西兰大白兔半腱肌并保留胫骨止点重建前交叉韧带,于术后2周、4周、8周、3月、6月、12月分别采取标本。采用HE和甲苯胺蓝染色观察骨隧道内腱骨愈合的过程。结果术后2周移植的肌腱与骨隧道壁连接紧密可见大量的成纤维细胞,胶原排列不整齐。术后4周移植的肌腱与骨隧道壁的腱骨间形成纤维连接并有少量纤维软骨形成。术后8周移植的肌腱与骨隧道壁的腱骨间的组织出现分层,隐约可见4层结构并隐约可见潮线。术后3个月形成类似直接止点的4层结构,潮线较前明显。术后6个月形成直接止点的4层结构,潮线较前更明显。术后12个月形成了成熟的直接止点的结构,潮线清晰可见。结论保留胫骨止点兔自体半腱肌重建前交叉韧带骨隧道内腱骨愈合是由间接的固定点逐渐转化为直接止点的过程。

显微CT在兔胫骨骨髓炎建模过程中的应用

背景:显微CT(Micro-CT)是一种非破坏性的3D成像技术,可以在不破坏样本的情况下清楚地了解样本的内部显微结构,其分辨率极高,空间分辨率达到1-10μm,部分先进机型甚至达0.25μm,无论是数据分析还是图像处理,Micro-CT目前都已在骨组织工程研究中被广泛应用。目的:在兔胫骨骨髓炎建模过程中,以Micro-CT作为辅助观察工具,分析兔胫骨因炎症产生的结构变化以验证骨髓炎模型是否建立成功。方法:取新西兰大白兔20只,其中5只作为对照组,其余15只建立右侧胫骨骨髓炎模型,分别在2,4,6周进行影像学表征(n=5)。术后观察兔的进食、作息及伤口愈合情况;采用X射线活体成像检测兔胫骨骨髓炎模型形成过程中的骨组织变化;使用Micro-CT对建模后患肢进行逐层扫描,获得相应断层图像并对其进行三维重建,计算各组样本的骨体积、骨密度等参数。结果与结论:①大体观察:第4周起可见造模处周围有脓性液体及组织,并出现炎性反应;第6周可见大面积骨质增生;②X射线片观察:随时间推移可见模型组的肿胀程度和骨膜反应愈发严重,死骨形成变多;③Micro-CT分析:断层图像可见,前4周骨质逐渐出现疏松和增生现象;6周后建模成功的兔骨皮质明显被破坏且严重增生,炎症蔓延至骨髓腔;三维重建后可见6周骨髓炎建模兔骨窗周围有大量死骨形成且骨膜反应剧烈,整体明显肿胀,骨质增生严重;内部松质骨结构严重破坏变形,骨小梁大面积破损缺失,且炎症已蔓延至整根胫骨,骨内膜及骨关节面有显著损伤,皮质骨增生且出现空隙;对炎症与正常骨参数进行计算发现,炎症后骨体积均有所上升,皮质骨密度下降,松质骨密度上升;④结果表明,Micro-CT可行断面成像、三维重建及骨参数定量分析,其优势明显弥补了X射线片与大体观察的不足,为骨髓炎相关骨组织工程研究提供了实验依据及新思路。

槲皮素对胫骨平台骨折新西兰兔模型骨形态生成蛋白/Runt相关转录因子2信号通路的影响

目的:研究槲皮素对胫骨平台骨折新西兰兔模型骨形态生成蛋白(BMP)/Runt相关转录因子2(Runx2)信号通路的影响,探讨槲皮素的作用机制及促进骨折愈合的效果。方法:选取40只健康新西兰大白兔,10只作为正常组,其余30只建立胫骨平台骨折模型,并随机分为模型组、低剂量组和高剂量组。低剂量组、高剂量组新西兰兔分别给予槲皮素100、200 mg/kg灌胃,1日1次;正常组、模型组新西兰兔给予等体积0.9%氯化钠溶液干预,1日1次;各组均连续干预7 d。测量新西兰兔血清骨钙素浓度,观察骨痂组织病理形态,检测BMP/Runx2信号通路因子表达及炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1β和IL-10]变化。结果:与正常组相比,模型组、低剂量组和高剂量组新西兰兔血清骨钙素水平降低,TNF-α、IL-1β和IL-10水平升高;与模型组、低剂量组相比,高剂量组新西兰兔骨钙素水平较高,TNF-α、IL-1β和IL-10水平较低,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比,模型组、低剂量组和高剂量组新西兰兔BMP、Runx2表达升高;与模型组、低剂量组相比,高剂量组新西兰兔BMP、Runx2表达升高,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:对胫骨平台骨折新西兰兔给予槲皮素干预,可有效改善骨痂病理损伤,抑制炎症介质活性,有助于骨折愈合,其机制可能与激活BMP/Runx2信号通路相关,证实槲皮素可有效促进骨折愈合,效果显著。

自体脂肪基质细胞组织-脱细胞骨基质-壳聚糖支架对兔胫骨骨缺损修复作用

目的:探究自体脂肪基质细胞组织(SVF)联合脱细胞骨基质-壳聚糖支架修复兔胫骨缺损的效果。方法:取新西兰兔背部皮下脂肪制备获取SVF细胞、取股骨干制备获取脱细胞骨基质,将SVF细胞种植于脱细胞骨基质-壳聚糖支架上,于种植当日及种植第7天时,扫描电镜观察支架上SVF细胞生长情况,计算种植当日及种植第3天时的SVF细胞存活率;将20只兔胫骨缺损动物模型均分为研究组和对照组,研究组用SVF-脱细胞骨基质-壳聚糖支架修复,对照组用脱细胞骨基质-壳聚糖支架修复;于术后6及12周时检测2组胫骨缺损部位的骨密度,并进行X线拍照,于术后12周时检测2组骨缺损部位最大弯曲度负荷、抗弯钢度及破坏扰度的力学特征,检测缺损骨骨膜中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和表皮生长因子(EGF)水平。结果:电镜结果显示,SVF细胞种植第7天,支架上黏附大量的SVF细胞,并且SVF细胞在支架表面上生长、增殖;SVF种植当日的SVF细胞存活率为100.0%,种植第3天SVF细胞的存活率为(98.54±1.83)%,2者比较差异无统计学意义(P>0.05);术后第6及12周时,研究组新西兰兔骨缺损处的支架材料和周围骨组织之间的界限模糊,周围骨组织有骨茄形成;2组新西兰兔术后第12周时骨缺损部位骨密度均高于同组术后第6周,研究组术后同时点的骨缺损部位骨密度均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);术后第12周时,研究组新西兰兔最大弯曲度负荷和抗弯钢度大于对照组,破坏扰度低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);术后第12周时,研究组新西兰兔骨缺损部位骨膜中的VEGF和EGF蛋白水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SVF-脱细胞骨基质-壳聚糖支架可促进兔胫骨骨缺损修复,可能机制与SVF促进骨膜内的血管新生有关。

^（60）Co辐射异种神经移植后皮肤感觉神经末梢的再形成

于梨状肌下缘１０ｍｍ处切除成年Ｗｉｓｔａｒ大白鼠右侧的坐骨神经５ｍｍ，移植入８ｍｍ长、经２×１０￣６ｒａｄ￣（６０）Ｃｏ辐射的成年日本大耳兔胫神经。异种神经移植术后８、１２、１６、２０、３２周，取出鼠手术侧的爪皮入１０％福尔马林固定、冰冻切片，按Ｇｒｏｓｓ－Ｓｃｈｕｌｔｚｅ改良的Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ法染色显示皮肤感觉神经末稍。术后８周的爪皮皮下组织出现少量再生神经束，１２周后的各存活期真皮层内部分再生神经纤维可能与Ｍｅｉｓｓｎｅｒ小体和Ｍｅｒｋｅｌ触盘的形成有关。３２周的部分再生神经纤维穿行于表皮细胞之间形成游离感觉神经末稍。随着存活期的延长，皮肤感觉神经末稍的数量和种类逐渐增多。￣（６０）Ｃｏ辐射的异种神经移植后，宿主的再生神经纤维能向远段生长重新支配靶器官。

生物膜管桥接周围神经缺损的实验研究

目的：研究生物膜管桥接周围神经缺损的效果。方法：采用生物膜管、变性骨骼肌桥接家兔３０只的胫神经１０ｍｍ缺损，术后８～２４周进行肉眼、光镜、电镜和电生理检查。结果：生物膜管桥接组与变性骨骼肌桥接组相比，其损伤神经恢复快、运动功能恢复好，再生神经纤维数目多，髓鞘和雪旺细胞结构正常，神经运动传导速度快（Ｐ＜０．０１）。结论：生物膜管可以桥接周围神经缺损，其效果优于应用变性骨骼肌桥接法。

组织隔离法与机械活动法在兔胫骨骨不连模型建立中的作用

目的评价组织隔离法与机械活动法在建立兔胫骨萎缩型与肥大型骨不连模型中的作用。方法将12只体重为3～4.5kg的新西兰大白兔随机分成A、B两组,A组于胫骨中段截骨,两断端套接1cm硅胶管,单侧外固定器固定,保持两断端间距2mm,8周取出硅胶管,观察组织隔离法构建萎缩型骨不连模型的效果。B组于胫骨中段截骨后采用2枚1mm克氏针行髓内松动固定,被动活动断端200次/天,持续1个月,观察机械活动法构建肥大型骨不连模型的效果。结果A组中所有动物在硅胶管取出后4周,无1例断端出现骨愈合表现,X线片显示良好萎缩型骨不连的复制。B组中所有动物在6周内截骨端出现延迟愈合,部分伴有畸形,骨断端有大量肥大骨痂形成。结论硅胶管组织隔离法是复制兔胫骨萎缩型骨不连模型的有效方法,而采用被动机械活动复制兔胫骨肥大型骨不连模型的方法尚需进一步研究。

周围神经在缓慢肢体延长中的形态学观察

[目的]观察兔缓慢肢体延长中周围神经损伤及其自然修复过程的组织形态和超微结构变化。[方法]35只日本大耳白兔,胫骨延长长度为1 cm后,分别于停止延长时,停止延长后1、2、4、8周取材,以光学显微镜和透射电镜观察各时相胫神经延长区组织形态及超微结构的变化。[结果]延长1 cm时,光镜下神经纤维排列紊乱,部分郎飞氏结区增宽,髓鞘肿胀,可见神经纤维扩展性脱髓鞘;电镜下神经纤维髓鞘板层结构疏松,可见空泡状髓鞘变性,肿胀压迫轴突。延长后7 d,光镜下神经纤维除明显损伤性病变外已出现轻度修复性变化;电镜下可见有新形成的髓鞘。以后随着时间的延长,神经损伤逐渐自我修复,至8周时基本恢复正常,但仍可见有新生的髓鞘。[结论]缓慢肢体延长过程中周围神经的亚临床损害是暂时的、可逆的,并且在神经损伤的同时其自然修复就已开始。

周围神经适应缓慢牵伸的机制研究——兔胫后神经血-神经屏障及束膜屏障观察

目的观察缓慢牵伸胫骨延长对兔胫后神经束膜屏障及毛细血管屏障的影响。方法取兔胫骨延长 10％、 20％、 30％及 40％的四组动物各 4只行胫后神经电镜观察，再各取 4只行束膜屏障及毛细血管屏障测试。结果随着肢体延长幅度增加，神经束膜变薄、平直，束膜内线粒体增多，并出现大量空泡，但束膜的连续性始终保持完整，束内毛细血管连接紧密，血－神经及束膜屏障完好。结论与急性牵伸不同，缓慢牵伸过程中，神经的屏障功能始终完整，为神经的再生修复提供了良好的微环境。

捆绑带束缚压力对兔胫骨骨折模型愈合影响的生物力学研究

目的探讨捆绑带应用于兔胫骨骨折动物模型,在不同束缚压力下骨折愈合的生物力学特点。方法 45只成年新西兰大白兔随机分为3组,建立兔胫骨干非负重骨折动物模型,髓内固定后,分别在骨折部位加用200、150、100 N束缚压力的捆绑带固定,术后2、4、6周测量标本的三点弯曲强度、拉伸强度、旋转强度,观察不同时期模型生物力学的变化及与骨折愈合过程变化的关系。结果术后2周测试3组的三点弯曲强度、拉伸强度、旋转强度,有明显统计学差异(P<0.05),其中200 N组最大,100 N组最小;术后4周测试3组的三点弯曲强度、拉伸强度、旋转强度,有明显统计学差异(P<0.05),150 N组最大,100 N组最小;术后6周测试3组的三点弯曲强度、拉伸强度、旋转强度,有明显统计学差异(P<0.05),150 N组最大,200 N组最小。结论适宜的捆绑带压力对骨折愈合的过程有帮助,通过增加断端的稳定性同时避免应力遮挡,能够促进骨折断端的愈合。