油菜蜂花粉ACE抑制活性水解物的制备及分离

采用4种蛋白酶水解油菜蜂花粉蛋白制备ACE抑制活性物质,高效液相色谱法测定油菜蜂花粉蛋白水解物对ACE的抑制率。结果表明:油菜蜂花粉蛋白酶水解物具有ACE抑制活性,水解物对ACE的抑制活性差异显著(P<0.05),其中碱性蛋白酶>中性蛋白酶>木瓜蛋白酶>酸性蛋白酶,碱性蛋白酶水解物的IC50为0.35mg/mL。4种蛋白酶水解物经BioP-2凝胶分离后,ACE抑制活性较强的组分主要集中在保留时间70～120min,在此区间碱性蛋白酶水解物分离组分对ACE的抑制率达到90%以上,分子质量在376.4～1355D之间。

油菜蜂花粉蛋白水解度测定方法比较

采用Alcalase2.4LFG水解油菜蜂花粉蛋白,比较pHstat法、OPA法和TNBS法测定蜂花粉蛋白水解度的差异。水解118min后,pHstat法、OPA法和TNBS法测得的水解度分别为24.7%﹑13.4%﹑6.6%。由于OPA试剂和甘氨酸﹑半胱氨酸﹑赖氨酸反应生成的化合物在340nm波长处的吸光度较低,致使OPA法测得的水解度低。TNBS试剂和ε-NH2的作用不稳定,也可能是由于TNBS试剂产生的发光物使测定结果降低。在水解度较低的情况下,α-NH2平均解离度的变化可以忽略,pHstat法测得的水解度比较准确。

油菜蜂花粉水溶性蛋白的分离及其抗氧化活性

采用饱和硫酸铵法对油菜蜂花粉中的水溶性蛋白进行逐级分离提取,发现20%～40%浓度的硫酸铵对蜂花粉水溶性蛋白的分离效果最好,得率和回收率分别为711.54μg/g和29.91%;同时,对不同硫酸铵浓度(0%～20%、20%～40%、40%～60%、60%～80%和80%～100%)得到的水溶性蛋白的体外抗氧化活性进行测定,发现20%～40%浓度硫酸铵盐析得到的蛋白对DPPH和·OH自由基的清除能力最强;相同浓度下,各级水溶性蛋白对·OH自由基的清除能力均强于DPPH自由基。结合SDS-PAGE图谱分析表明,分子质量约为39.0 ku和约为58.0 ku的2种蛋白有可能在油菜蜂花粉水溶性蛋白的抗氧化反应中发挥着重要的作用。

反相液相色谱-串联质谱法鉴定油菜蜂花粉中的蛋白质及活性肽

基于鸟枪法蛋白质组学分析方法,使用反相液相色谱-串联质谱(RPLC-MS/MS)系统分析油菜蜂花粉蛋白质的胰蛋白酶酶解产物,结合数据库检索,共鉴定到353条肽段。鉴定到的肽段所归属的蛋白质中有239个蛋白质可检索到其分子生物学功能,主要功能为结合活性、酶活性、运输活性、抑制活性等。根据血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽活性与多肽构效之间的关系,从鉴定到的肽段中筛选并适当修饰后得到5条可能具有ACE抑制活性的肽段,化学合成肽段后进行了活性验证。结果表明5条肽段均具有良好的活性,其中肽段AELDIVLALF和LAVNLIPFP表现出较高的ACE抑制活性,半数抑制浓度(IC50)分别为(10.65±0.50)μmol/L和(23.66±1.08)μmol/L。该方法速度快,成本低,大大缩短了鉴定周期,达到了高通量筛选生物活性肽的目的。

破壁对西藏高原油菜蜂花粉胃肠道消化吸收特性的影响

实验以西藏高原油菜蜂花粉为原料,以破壁率为筛选指标,得出油菜蜂花粉在株磨仪中的最适添加量为4~8 g,此条件下的油菜蜂花粉的破壁率接近100%。以内容物浸出率、可溶性蛋白和多糖为检测指标,以4 g油菜蜂花粉添加量为基准,研究株磨仪研磨破碎前后油菜蜂花粉在模拟胃液、肠液和胃肠液中消化吸收特性。实验结果表明:油菜蜂花粉无需破壁就可以通过萌发孔释放内容物和其中的营养物质,即油菜蜂花粉无需破壁,就可以直接食用。