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基于重组酶聚合酶扩增技术的犬细小病毒快速检测方法的建立 被引量:9
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作者 姜一曈 王昭华 +4 位作者 鑫婷 贾红 郭晓宇 朱鸿飞 侯绍华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期926-929,共4页
为建立一种快速、简便检测犬细小病毒(CPV)的方法,本研究基于CPV VP2基因的保守序列,设计合成引物,通过对反应条件的优化,建立了CPV的重组酶聚合酶(RPA)检测方法。该方法在38℃恒温反应15 min即可快速、特异性的检测出CPV。特异性试验... 为建立一种快速、简便检测犬细小病毒(CPV)的方法,本研究基于CPV VP2基因的保守序列,设计合成引物,通过对反应条件的优化,建立了CPV的重组酶聚合酶(RPA)检测方法。该方法在38℃恒温反应15 min即可快速、特异性的检测出CPV。特异性试验结果显示,除CPV (BJ-2b株、BJ-2c株)外,犬瘟热病毒、犬冠状病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒等检测均为阴性;敏感性试验结果显示,以重组质粒pEASY-CPV-VP2为模板,RPA的检测下限为1×10~1拷贝/μL,其敏感度比普通PCR方法高10倍。利用建立的RPA方法对疑似CPV感染的临床样品的阳性检出率为88%,高于普通PCR的检出率(82%)和胶体金的检出率(76%)。本研究建立的CPV RPA检测方法操作简单,反应灵敏,结果确实可靠,适用于CPV的快速检测。 展开更多
关键词 犬细小病毒 重组酶聚合酶扩增技术 快速检测
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3种犬细小病毒感染诊断方法比较 被引量:19
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作者 宋永奇 李玉燕 +4 位作者 吕艳丽 韩博 李伊立 贾君影 付丽娟 《畜牧与兽医》 北大核心 2008年第6期31-35,共5页
本研究应用犬细小病毒抗原快速检测试剂盒、血凝/血凝抑制试验和PCR方法对120份具有腹泻/呕吐症状的患犬粪便样本进行了犬细小病毒检测。结果显示,3种方法检测阳性份数分别为60,49,68。犬细小病毒抗原快速检测试剂盒与血凝/血凝抑制(HA/... 本研究应用犬细小病毒抗原快速检测试剂盒、血凝/血凝抑制试验和PCR方法对120份具有腹泻/呕吐症状的患犬粪便样本进行了犬细小病毒检测。结果显示,3种方法检测阳性份数分别为60,49,68。犬细小病毒抗原快速检测试剂盒与血凝/血凝抑制(HA/HI)试验相比较,敏感性、特异性及总符合率分别为100.0%,84.5%,90.8%;与PCR法相比较,敏感性、特异性及总符合率分别为85.3%,96.2%,90.0%。从试验结果看,HA/HI法具有较高的特异性,但敏感性较低;PCR具有高度敏感性和特异性,但不适合临床推广;细小病毒抗原快速检测试剂盒,在正确操作下结果可靠,是临床诊断犬细小病毒感染的首选方法。 展开更多
关键词 犬细小病毒抗原快速检测试剂盒 PCR 血凝/血凝抑制(HA/HI)试验 犬细小病毒(CPV)
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犬瘟热病毒抗原表位T’TB和犬细小病毒VP2蛋白的共表达及免疫小鼠特异性抗体的测定 被引量:9
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作者 王亚君 华育平 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期204-209,共6页
应用PCR方法扩增犬细小病毒VP2基因,将其克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的转移载体pFastBacHTc上,命名为pFastBacHTc-VP2,将人工合成的犬瘟热病毒抗原表位基因T’TB克隆至VP2基因的上游,命名为pFastBacHTc-T’TB-VP2。进而转化含... 应用PCR方法扩增犬细小病毒VP2基因,将其克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的转移载体pFastBacHTc上,命名为pFastBacHTc-VP2,将人工合成的犬瘟热病毒抗原表位基因T’TB克隆至VP2基因的上游,命名为pFastBacHTc-T’TB-VP2。进而转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,获得携带犬瘟热病毒T’TB细胞表位和犬细小病毒VP2基因的重组转染质粒Bacmid-BacHT-T’TB-VP2,将其转染昆虫细胞Sf-9后获得融合重组T’TB-VP2蛋白,大小约为70ku。经Westernblot分析,结果显示:表达的蛋白具有良好的免疫原性。表达的重组蛋白在无佐剂参与的情况下,按确定的免疫程序免疫6~8周龄的BALB/c小鼠,检测小鼠的体液免疫学指标。结果表明:表达蛋白能诱导小鼠产生抗CDV和CPV的特异性中和抗体。本实验为重组犬瘟热与犬细小病毒新型亚单位疫苗的研制奠定了重要的物质基础。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒T’TB抗原表位 犬细小病毒VP2基因 杆状病毒表达系统 表达 抗体检测
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犬细小病毒病实验室诊断方法建立与分析 被引量:3
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作者 张磊 张爱国 +1 位作者 连辉霞 李四豪 《现代牧业》 2019年第1期56-60,共5页
犬细小病毒感染是仅次犬瘟热的一种烈性传染病,发病迅速,对犬危害性极大,其高传染性、高发病率、高死亡率在犬各年龄段均可发病。本实验通过对临床40例疑似犬细小病毒感染样本分别用犬细小病毒抗原快速检测试剂盒、犬细小病毒抗原荧光... 犬细小病毒感染是仅次犬瘟热的一种烈性传染病,发病迅速,对犬危害性极大,其高传染性、高发病率、高死亡率在犬各年龄段均可发病。本实验通过对临床40例疑似犬细小病毒感染样本分别用犬细小病毒抗原快速检测试剂盒、犬细小病毒抗原荧光免疫定量分析仪和PCR方法进行检测与分析,实验结果表明:犬细小病毒抗原快速检测试剂盒是一种定性的检测方法,而且该试剂盒操作简单,结果显示快,易于判读,经济成本不高,但不能定量的测出病毒含量;犬细小病毒抗原荧光免疫定量分析仪是定量的检测方法,且敏感性、准确性要高于犬细小病毒抗原快速检测试剂盒。PCR法与前两者相比具有更高的敏感性,而且存在感染早期就能实现病毒的快速检测,但它需要昂贵的设备,而且反应时间长。 展开更多
关键词 犬细小病毒 犬细小病毒抗原快速检测试剂盒 犬细小病毒抗原荧光免疫定量分析仪 PCR
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Isolation and characterization of a new candidate human inactivated rotavirus vaccine strain from hospitalized children in Yunnan,China:2010-2013 被引量:1
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作者 Jin-Yuan Wu Yan Zhou +7 位作者 Guang-Ming Zhang Guo-Fa Mu Shan Yi Na Yin Yu-Ping Xie Xiao-Chen Lin Hong-Jun Li Mao-Sheng Sun 《World Journal of Clinical Cases》 SCIE 2018年第11期426-440,共15页
AIM To determine the distribution of rotavirus VP7 gene in hospitalized children in Yunnan, China. METHODS A total of 366 stool specimens were collected from hospitalized children in hospitals in Yunnan Province from ... AIM To determine the distribution of rotavirus VP7 gene in hospitalized children in Yunnan, China. METHODS A total of 366 stool specimens were collected from hospitalized children in hospitals in Yunnan Province from September 2010 to December 2013. The genomic RNA electropherotypes and the G genotypes of the rotaviruses were determined. A phylogenetic analysis of the VP7 gene was performed. Rotavirus isolation was performed, and characterized by plaque, minimum essential medium, and all genes sequence analysis. Quantification of antibodies for inactivated vaccine prepared with ZTR-68 was examined by enzyme-linked immunosorbent assay and microneutralization assay.RESULTS Group A human rotavirus was detected in 177 of 366(48.4%) stool samples using a colloidal gold device assay. The temporal distribution of rotavirus cases showed significant correlation with the mean air temperature. Rotaviruses were isolated from 13% of the rotavirus-positive samples. The predominant genotype was G1(43.5%), followed by G3(21.7%), G9(17.4%), G2(4.3%), G4(8.7%), and mixed(4.3%) among a total of 23 rotavirus isolates. A rotavirus strain was isolated from a rotavirus-positive stool sample of a 4-month-old child in The First People's Hospital of Zhaotong(2010) for use as a candidate human inactivated rotavirus vaccine strain and for further research, and was designated ZTR-68. The genotype of 11 gene segments of strain ZTR-68(RVA/Human-wt/CHN/ZTR-68/2010/G1P[8]) was characterized. The genotype constellation of strain ZTR-68 was identified as G1-P[8]-I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1. The VP7 and VP4 genotypes of strain ZTR-68 were similar to Wa-like strains.CONCLUSIONS A high prevalence of the G1, G2, and G3 genotypes was detected from 2010 to 2012. However, a dominant prevalence of the G9 genotype was identified as the cause of gastroenteritis in children in Yunnan, China, in 2013. A candidate human inactivated rotavirus vaccine strain, designated ZTR-68 was isolated, characterized, and showed immunogenicity. Our data will be useful for the future formulation and development of a vaccine in China. 展开更多
关键词 ROTAVIRUS GENOTYPE G G1P[8] INACTIVATED ROTAVIRUS vaccine GENOTYPE characterization rapid antigen detection kit PHYLOGENETIC analysis
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犬细小病毒可视化LAMP检测方法的建立与应用 被引量:1
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作者 潘珺 程敏姮 +7 位作者 张启龙 张玮 吴迪 宋彦军 刘晓冬 周德刚 王林 韦海涛 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第8期28-31,I0004,共5页
为建立一种快速简便、灵敏度高、准确性好的犬细小病毒环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法,本研究根据犬细小病毒(CPV)的VP2基因保守区域设计特异性引物,通过优化引物浓度、反应温度、反应时间,建立了犬细小病毒LAMP可视化快速检测方... 为建立一种快速简便、灵敏度高、准确性好的犬细小病毒环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法,本研究根据犬细小病毒(CPV)的VP2基因保守区域设计特异性引物,通过优化引物浓度、反应温度、反应时间,建立了犬细小病毒LAMP可视化快速检测方法。结果显示,该方法在63℃条件下恒温扩增60 min具有良好的敏感性和特异性,其最低检测限为10拷贝/μL,与犬瘟热病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒、犬流感病毒均无交叉反应。对200份临床样品进行检测,检出阳性样品21份,与实时荧光定量PCR检测结果符合率为100%。该方法无需特殊设备,肉眼即可直接观察检测结果,具有高效、简便、特异性好、灵敏度高等优点,适用于犬细小病毒现场快速诊断。 展开更多
关键词 犬细小病毒 环介导等温扩增 可视化 快速检测
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畜禽产品中重要违禁兽药残留快检技术研究 被引量:3
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作者 何方洋 郗日沫 +2 位作者 万宇平 罗晓琴 冯才伟 《科技创新导报》 2016年第2期165-166,共2页
随着社会经济的飞速发展和居民生活水平的逐步提高,人们对饮食安全的关注度也逐渐提高,其中畜禽产品的安全保障也越来越重要。该研究主要进行畜禽产品中激素类、硝基咪唑类及喹乙醇残留快速检测试剂盒及乳品中β-内酰胺类、β-内酰胺酶... 随着社会经济的飞速发展和居民生活水平的逐步提高,人们对饮食安全的关注度也逐渐提高,其中畜禽产品的安全保障也越来越重要。该研究主要进行畜禽产品中激素类、硝基咪唑类及喹乙醇残留快速检测试剂盒及乳品中β-内酰胺类、β-内酰胺酶的胶体金试纸条技术研究及相关产品的开发。已开发己烯雌酚、氢化可的松、地塞米松、雌二醇、19-去甲睾酮质、硝基咪唑类、喹乙醇代谢物的检测试剂盒产品7种以及氢化可的松、群勃龙、地塞米松、β-内酰胺类抗生素、β-内酰胺酶的检测试纸条产品5种。酶联免疫试剂盒的研发是采用将抗原抗体特异性免疫反应与酶联放大反应相结合的原理,具有特异针对性检测样本中残留的各种药物分子的特点。通过酶联放大原理,大大提高产品的灵敏度可至0.05~0.5μg/kg(L)之间,达到高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用检测法等精密分析仪器的限量标准;可对样本中的残留物质进行定性及半定量检测;检测时间由以往的仪器检测1天至几天等缩短至不超过2 h,大大提高了检测效率;可同时对几十至几百个样本快速检测,符合食品安全广泛、全面的检测需求;检测成本低,单个样本的检测仅为仪器检测方法的1/5~1/2;不需要配备大型的检测仪器,在基层的政府职能监管部门、中小型食品企业等日常监控检测工作中均可广泛应用。胶体金试纸条的开发是应用胶体金标记技术,以胶体金作为示踪物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫金标技术。主要优势包括:(1)操作简便,一步操作,检测一个样本只需一个试纸条,无需其他辅助材料,液质样本仅需稀释处理,不需配备大型检测仪器,可在基层现场进行;(2)样本一次性检测量大,在排查及大型食品工业企业上万个样本的日常检测中极为适用;(3)检测所需时间短,5~10 min之内即可显示检测结果;(4)结果直观,通过观察质控线和检测线的颜色对结果进行判断,即使非专业人员也能进行检测操作和残留定性结果的确定。鉴于其检测方便、快捷的技术性能,尤其适用于在我国基层检测实验室、政府部门的市场监控检测、临时抽检中广泛推广使用,实现了生物免疫检测技术在食品安全流通消费领域的方便、快速检测,对食品安全的监督监管创造了必备条件,保障人民群众身心健康,为我国出口食品提供安全保障,促进农产品出口。 展开更多
关键词 畜禽 快速检测 试剂盒 试纸条 抗原 抗体
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