新型抗菌药物敏感性检测方法研究进展

抗菌药物敏感试验(antimicrobial susceptibility testing,AST)可指导临床合理选择抗菌药物,使患者获得良好预后,并减少耐药菌株产生。然而,传统AST费时费力,导致临床医生获取药敏结果不及时,仅凭借菌种和流行病学数据等经验用药,这可能是耐药菌株数量不断增加的原因之一。近年来,研究者致力于研发快速简便的AST检测手段,并取得相关研究进展。本文就基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱、微流控芯片系统、分子生物学技术、免疫学检测、流式细胞术等新型AST技术展开综述,以期为提高临床微生物实验室AST检测效率提供借鉴。

直接靶板微滴法快速检测肺炎克雷伯菌替加环素和多黏菌素的敏感性

目的探究直接靶板微滴法(DOT-MGA)快速检测替加环素和多黏菌素敏感性。方法共收集了67株肺炎克雷伯菌进行DOT-MGA测试,将有或没有替加环素、多黏菌素(药物终浓度为2μg/ml)的6μl微滴一式三份加在靶板上,设置了3、4、6、8 h四个孵育时间点。Bruker Biotyper软件将测试结果判定为敏感(评分<1.7分)或非敏感(评分≥1.7分)。结果孵育4 h后,替加环素和多黏菌素的生长有效率、特异度、阳性预测值均为100.00%,分类一致率分别为98.15%、96.15%,灵敏度分别为96.30%、92.31%,阴性预测值分别为96.45%、92.86%。结论DOT-MGA可以快速准确鉴别对替加环素和多黏菌素的耐药表型,与微量肉汤稀释法比较具有良好的一致性。

基于微流控芯片的尿路感染细菌鉴定及抗生素敏感性测试

发展了一种微流控芯片纸基细菌分析技术,用于多重细菌鉴定与抗生素敏感性测试。制备了阵列培养池芯片,以滤纸作为衬底固定显色培养基和抗生素。利用PVDF疏水薄膜止流阀,将尿液样品引入芯片并分隔于不同培养池。借助于培养池阵列的空间分辨力,实现多重细菌分析。根据特异性显色结果实现细菌鉴定,通过实时显色强度分析实现细菌定量,依据抑制显色反应的最低抗生素浓度确定抗生素敏感性。以3种泌尿系统感染常见病原菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和粪肠球菌)为模拟测试对象进行分析,结果表明,芯片方法可以在18 h内实现对3种细菌的同时鉴定及6种抗生素敏感性测试。对照实验显示,芯片法与传统方法细菌鉴定和抗生素敏感性测试结果一致性分别为94.1%和93.9%。本研究建立的微流控芯片细菌分析方法简便快速,非常适合于医疗资源匮乏条件下的细菌分析。

基于拉曼光谱的快速细菌诊断

致病菌一直被认为是对公共卫生最严重的威胁之一。随着抗生素耐药性在全球范围的出现和蔓延,耐药致病菌的健康威胁进一步加剧。对致病菌的快速识别及其抗生素药物敏感性的快速检测,对高效诊断和治疗相关疾病至关重要。拉曼光谱可以提供致病菌的指纹图谱信息,是一种非常有前景的细菌快速鉴定及抗生素药敏检测工具。本文综述了基于单细胞拉曼光谱和表面增强拉曼光谱进行致病菌快速诊断的最新研究进展,包括细菌快速鉴定、细菌药敏性快速检测、临床样品前处理与细菌分离方法、谱图分析的化学计量学方法等,并对该领域未来的发展进行了展望。

血培养阳性标本直接药敏试验的评估

目的评价血培养阳性标本快速直接药敏试验的准确可行性。方法我院2007年1月至2008年8月期间200份阳性血液标本，进行直接药敏试验，然后与常规标准药敏试验进行比较。结果200份阳性血液标本，革兰阳性球菌107株，革兰阴性杆菌89株。比较直接药敏试验和常规标准药敏试验，其中葡萄球菌属的平均符合率为96．0％，革兰阴性杆菌平均符合率为96．2％，但是链球菌属平均符合率为71．7％，出现了28．3％的误差。结论血培养阳性标本除链球菌属外，直接药敏试验能为临床提供了准确快速的结果。

鲍曼不动杆菌快速表型药敏检测方法的建立和初步应用

目的利用表面活性剂-叠氮溴化丙锭(propidium monoazide, PMAxx)-qPCR反应体系对鲍曼不动杆菌进行快速表型药敏预测。方法依次对加入反应体系中表面活性剂的种类和最适浓度、叠氮溴化丙锭曝光时间和浓度进行优化;采用qPCR检测鲍曼不动杆菌特异性鉴别基因(blaOXA-51)拷贝数;采用抗菌药物-细菌共反应体系测定鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性。结果当表面活性剂月桂酰基甘氨酸钠浓度为0.2%,叠氮溴化丙锭最佳曝光时间和浓度为5 min和20μmol/L时,能有效抑制死细胞DNA扩增,且不影响活细胞。基于此建立的表型药敏预测模型能快速(2 h内)和准确地预测鲍曼不动杆菌对多西环素及左氧氟沙星的敏感性(P<0.01),对头孢哌酮/舒巴坦的敏感性更可靠的预测需超过2 h。结论基于月桂酰基甘氨酸钠-PMAxx-qPCR体系的快速表型药敏预测新方法可在短时间内为鲍曼不动杆菌感染的治疗提供药敏依据,以指导其临床精准用药。

细菌对抗菌药物敏感性检测方法研究进展

药敏试验(antibiotic susceptibility testing,AST)为兽医提供临床菌株对抗菌药物的敏感性等信息。然而,临床上为快速治疗患病动物,又碍于传统药敏试验的"漫长"的过程,兽医常以经验为导向诊断后直接开具处方,这成为细菌对抗菌药物产生耐药性的重要原因之一。随着耐药性的不断加剧,并危及公共卫生健康,缩短药敏试验的检测时长就显示出越来越重要的意义。现简要介绍稀释法、扩散法、E-test法等传统药敏试验检测方法,着重阐述新兴的快速药敏试验技术的原理、优缺点等,最后进行展望。