mpt64-卡介苗重组疫苗免疫原性研究

目的研究mpt64-卡介苗重组疫苗的免疫原性。方法以生理盐水、卡介苗、mpt64-卡介苗重组疫苗免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体,MTS法分析小鼠脾淋巴细胞增殖指数。结果mpt64-卡介苗重组疫苗组小鼠体重变化与对照组相比,无显著性差异。应用不同抗原检测各组小鼠不同时间采集的血清,mpt64-卡介苗重组疫苗组有MPT64特异性抗体产生,而卡介苗组无MPT64特异性抗体产生;卡介苗、mpt64-卡介苗重组疫苗免疫后15d,抗体水平已有升高,45d达到最高水平。用不同抗原刺激实验组及对照组小鼠脾淋巴细胞,平均刺激指数均达2.0以上。结论结核分枝杆菌mpt64基因在卡介苗中能够表达特异的蛋白,刺激小鼠产生特异性抗体。

卡介苗穿梭表达质粒pMS肿瘤坏死因子的构建与鉴定

目的 构建分泌性表达肿瘤坏死因子(TNF) α的重组卡介苗。方法 分别以卡介苗(BCG)和TNF αcDNA为模板,通过PCR扩增得到117bp的BCG Ag85B信号肽序列和70 2bp的TNF α基因序列。将BCG Ag85B信号肽序列插入大肠杆菌 卡介苗穿梭质粒pMV2 61,得到重组质粒pMS。再将TNF α基因序列克隆至pMS中,得到重组质粒pMSTNF。结果 质粒pMSTNF用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因BCG Ag85B和TNF α正确插入载体pMV2 61。结论 重组质粒pMSTNF可望在BCG中分泌性表达细胞因子TNF α,从而协同加强对肿瘤的杀伤作用,该质粒的成功构建为改造卡介苗。