大肠杆菌tRNA^(Leu)的提取、纯化及性质研究

采用高表达大肠杆菌ｔＲＮＡＬｅｕ菌株提取、纯化了亮氨酸等受体转移核糖核酸ｔＲＮＡＬｅｕ１和ｔＲＮＡＬｅｕ２．利用稳态动力学手段研究了ｔＲＮＡＬｅｕ１及脱镁ｔＲＮＡＬｅｕ１在不同稀土离子作用下与纯化亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶的氨酰化作用．ｔＲＮＡＬｅｕ１与亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶的结合及催化效率均受参与稀土离子的影响，表观Ｋｍ值有较明显的变化．结果表明，亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶催化的ｔＲＮＡＬｅｕ１氨酰化反应所需Ｍｇ２＋能够被稀土离子取代，但亲合性能不同．

稀土离子对大肠杆菌tRNA^(Leu)氨酰化反应的影响

金属离子不但对ｔＲＮＡ分子结构起稳定性作用，且为氨酰化反应所必需。稀土离子可以取代ｔＲＮＡ分子中与结构功能有关的固有的镁离子，较低浓度的稀土离子和镁离子一样参与氨酰化反应，金属离子浓度提高时稀土对氨酰化反应的激活作用不如镁，对于脱镁ｔＲＮＡ分子稀土离子的这种作用更为明显。稀土离子对氨酰化反应的影响可归因于其与ＡＴＰ及ｔＲＮＡ的强配位作用引起ＡＴＰ稳定性及ｔＲＮＡ分子构象发生某种改变所致。