FMRP通过激活RAS/MAPK信号通路抑制结直肠肿瘤细胞的铁死亡

目的探讨脆性X智力障碍蛋白(FMRP)调控结直肠肿瘤(CRC)细胞逃避铁死亡的作用机制。方法使用RT-qPCR和Western blotting方法验证FMRP在CRC细胞中的表达;利用TCGA数据库分析FMRP参与调控CRC进展的生物功能及信号通路;采用慢病毒表达系统和siRNA干扰技术,分别构建FMRP过表达载体(Lv-FMRP)和敲低载体(siFMRP-1、siFMRP-2、siFMRP-3),细胞实验设Control组、NC组、siFMRP-1组、siFMRP-2组、siFMRP-3组、Lv-NC组、Lv-FMRP组;采用CCK8和平板克隆实验检测细胞增殖;采用MDA/ROS/GSH/Fe^(2+)试剂盒检测细胞铁死亡水平;采用JC-1荧光染色法检测线粒体膜电位变化;采用Western blot检测铁死亡相关蛋白及RAS/MAPK信号通路相关蛋白表达;利用裸鼠皮下成瘤实验观察FMRP对肿瘤生长的影响。结果与正常肠粘膜上皮细胞NCM460相比,FMRP在CRC细胞中明显高表达(P<0.05);TCGA数据库联合生信分析显示FMRP与活性氧调控、氧化应激诱导细胞死亡、线粒体呼吸等生物过程相关,与谷胱甘肽代谢通路相关;体外实验结果显示,与Control组相比,FMRP敲低组细胞增殖能力降低,GSH含量降低,MDA和ROS含量升高,Fe^(2+)荧光强度增强(P<0.05),SLC7A11/GPX4蛋白表达降低,线粒体膜电位JC-1荧光强度升高,而FMRP过表达组与上述结果相反;体内实验结果显示,敲低FMRP抑制瘤体生长,抑制SLC7A11表达(P<0.01);进一步检测RAS/MAPK信号通路,发现敲低FMRP导致ERK、MEK、MAPK、RAS蛋白磷酸化水平降低,过表达FMRP上述蛋白磷酸化水平升高(P<0.05)。结论FMRP通过激活RAS/MAPK信号通路抑制细胞铁死亡促进CRC恶性进展。

miRNA-34a通过调控SOX4/RAS/MAPK信号通路对中枢神经系统淋巴瘤进展的影响

目的:探讨微小RNA-34a(miR-34a)在原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)中的作用及其潜在的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测PCNSL组织中miR-34a的表达。体外培养Raji细胞,将miR-34a模拟物(miR-34a mimic)、模拟物对照(NC mimic)、miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(NC inhibitor)、miR-34a mimic+空白质粒(Vector)、miR-34a mimic+SOX4过表达质粒(pcDNA-SOX4)分别转染至细胞中。RT-qPCR实验检测细胞中miR-34a的表达;CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞中SOX4蛋白和RAS/MAPK通路蛋白Ras、p-Raf-1、p-MEK的表达;生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-34a与SOX4的靶向关系。结果:PCNSL组织中miR-34a的表达显著降低(P<0.05)。与NC mimic组比较,miR-34a mimic组细胞中miR-34a的表达升高,细胞增殖能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-34a inhibitor组细胞中miR-34a的表达降低,细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著升高(P<0.05)。与NC mimic组比较,共转染miR-34a mimic和WT-SOX4的细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而共转染miR-34a mimic和MUT-SOX4的细胞荧光素酶活性无显著性变化(P>0.05)。与miR-34a mimic+Vector组比较,miR-34a mimic+pcDNA-SOX4组Raji细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:miR-34a通过靶向SOX4调控RAS/MAPK信号通路从而抑制PCNSL细胞增殖,促进细胞凋亡。

不同中医治法对ras/MAPK信号通路相关基因转录调节的实验研究

目的 :研究中医治疗原发性肝癌的清热解毒、活血化瘀、健脾理气等常用不同方法对实验性肝癌的作用机理。方法 :以二乙基亚硝胺水溶液诱发大鼠肝癌形成 ,采用RT PCR方法分别观察这些不同中医治法对癌基因ras MAPK信号传导通路上相关基因转录的调节作用。结果 :这些不同治法能够针对性地调节癌基因ras MAPK信号通路上一些信号分子的转录水平 ,其中清热解毒法对raf1基因、活血化瘀法对Grb 2和raf 1基因、健脾理气法对sos基因的转录水平有显著的下调作用 ,各治法均能上调GAP基因的转录水平。结论 :不同中医治法能够不同程度地调节肝癌发生发展过程中一些促使细胞过度增殖的信号分子的转录 ,并且这些治法有不同的选择性。

Ras的结构和功能及其参与的信号传导

从ｒａｓ基因发现以来，因为它和癌症的相关性，引起了人们对其基因和蛋白研究的普遍关注．通过这些研究不仅知道了ｒａｓ基因的癌变作用机制，而且对Ｒａｓ蛋白与磷酸化途径的关系有了一个比较清晰的了解．同时关于Ｒａｓ蛋白所参与的信号传导途径的研究使得对细胞内的整个信息通路的开关和调节有了更进一步的认识。Ｒａｓ蛋白参与的信号传导途径还和其他的通路有相关性，如Ｇ蛋白的β、γ亚基二聚体可以激活Ｒａｓ途径．因此对Ｒａｓ途径的研究不仅可以了解Ｒａｓ自身的调节途径，而且对细胞内整体的信息传导的研究是十分必要的．

Ras/MAPK与PI3K/Akt信号转导通路及其相互作用

Ras/MAPK通路和PI3K/Akt通路是膜受体信号向细胞内转导的重要途径,它们调节着细胞凋亡、生长以及一些重要基因的表达。在不同的细胞类型、不同的细胞分化时期、不同的实验条件下,PI3K/Akt通路和Ras/MAPK通路之间的相互作用都会十分明显地表现在这两条通路的不同阶段,这些为白血病和其他肿瘤的新治疗方案提供了重要的理论依据。现将PI3K/Akt和Ras/MAPK通路及其相互作用综述如下。

转移抑制基因nm23-H1参与肺癌Ras信号传导机理研究

背景与目的nm23-H1基因已被证实为一种肿瘤转移抑制基因,但其作用机理尚不明了,本研究探讨nm23-H1参与肺癌Ras信号传导的机理。方法应用脂质体法将pEGFP-nm23-H1野生型和突变型质粒(WT,H118F,S120G,P96S,S44A)转染人大细胞肺癌细胞株L9981,采用免疫共沉淀与Western blot方法检测野生型和突变型nm23-H1蛋白与Ras支架蛋白KSR的关系。结果在转染了野生型和突变型质粒的五个细胞株中,鼠抗nm23-H1免疫沉淀物在86KDa处可检测到KSR的阳性条带,而各组KSR的量应用单因素方差分析比较无显著性差异(F=0.190,P=0.938)。结论本研究结果表明nm23-H1与KSR存在相互作用,但这种相互作用与nm23-H1有无突变及突变位点无关,nm23-H1可能是通过KSR参与肺癌Ras信号传导的。

前列腺癌DD3基因与Ras-MAPK信号通路的相关性

前列腺癌是泌尿系统常见恶性肿瘤之一，其发病率呈现上升趋势。在前列腺癌的发生、发展进程中可经历激素依赖和激素非依赖的阶段，其转变的机制目前尚未完全清楚，多种信号传导通路可能参与其中。近年来随着MAPK信号通路研究的深入，

Ras信号传导通路与肿瘤的关系

在肿瘤的发病机制中，一些信号传导通路的异常激活起着重要的作用，目前发现Ras信号传导通路与人类绝大多数肿瘤的发生、发展过程密切相关，该通路中的任何组分发生突变都会影响肿瘤细胞增殖、分化及凋亡，因此，对Ras信号传导通路的深人研究不仅对认识肿瘤的发生发展及预防有重要意义，而且还可以通过干扰该通路的过度激活而达到在基因水平上治疗肿瘤的目的。本文就Ras通路的激活以及与肿瘤的关系进行综述。

ras信号传导途径

ras信号传导途径是起始于酪氨酸激酶受体的一种重要的细胞信号传导方式。近年特别是1993年夏以来,一个比较完整的、以ras为中心的细胞信号传导途径被揭示。 ras是目前所知最保守的一族癌基因,对于细胞生长、增殖、发育及分化调控以及细胞恶性转化的重要性已众所周知。许许多多癌基因、生长因子和刺激细胞生长的化学物质对细胞生长的促进,都要求ras的参与。 ras基因的正常产物是一大族鸟苷酸结合蛋白。

基于VEGFR2介导的Ras/MAPK信号通路探讨补肾安胎冲剂治疗复发性流产的作用机制

目的:探讨补肾安胎冲剂对小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰的血管内皮生长因子受体2介导的Ras蛋白(rat sarcoma protein,Ras)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)mRNA及蛋白表达的影响。方法:构建胎盘微血管内皮细胞,并制备补肾安胎冲剂含药血清,筛选出最佳含药血清浓度,将其分为正常血清组、siRNA-NC正常血清组、药物血清组、siRNA正常血清组、siRNA药物血清组,采用实时荧光定量PCR、Western blotting、免疫荧光法分别检测Ras/MAPK mRNA及蛋白表达。结果:正常组和阴性对照组Ras、MAPK mRNA及蛋白的表达无明显差异(P>0.05);药物血清组细胞Ras、MAPK mRNA及蛋白的表达明显高于正常血清组(P<0.01);siRNA1正常血清组较正常血清组相比Ras、MAPK mRNA及蛋白的表达明显下降(P<0.01);siRNA1药物血清组与siRNA1正常血清组Ras、MAPK mRNA及蛋白的表达相比有显著差异(P<0.01)。结论:补肾安胎冲剂对于复发性流产的治疗作用可能是通过上调Ras/MAPK mRNA及蛋白表达实现的。

Ras蛋白与信号传导

Ｒａｓ介导的信号传导途径是近几年研究热点之一，这是因为许多细胞受体介导的信号通路和Ｒａｓ途径相关。Ｒａｓ蛋白广泛存在生物界，在信号传导途径中起着极为重要的开关作用。ＰＴＫ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＡＰＫＫ和ＭＡＰＫ通过复杂的蛋白与蛋白之间的相互作用以及蛋白质磷酸化，将外界信号传入细胞中从而对细胞生长产生影响。本文对Ｒａｓ介导的信号传导途径的最新研究近展进行综述。

Ras-Raf-MAPK/ERK信号通路在正畸牙周组织改建中的表达及调控机制

正畸牙周组织改建的基础是牙周膜的存在,牙周膜中最主要的细胞是牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs),PDLSCs作为机械应力刺激的主要效应细胞,参与牙周组织改建中信号通路的转导,目前已知参与机械应力刺激的信号有Wnt/β-catenin、细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun N端激酶(JNK)、p38激酶和核因子κB (NF-κB)、Ras、Raf等。它们参与细胞增殖、分化、凋亡的调节,机械转导途径被认为是由共同的信号途径介导的,MAPKs被认为是参与机械传递的最重要的激酶。Ras-Raf-MAPK/ERK通路在PDLSCs成骨分化中起重要作用,更好地理解正畸牙齿运动中的机械反应和所涉及的信号转导途径可能有助于解决正畸治疗中的挑战。因此,本文就Ras-Raf-MAPK/ERK信号通路在正畸牙周组织改建中的表达及调控机制进行综述。

植物中的MAPK及其在信号传导中的作用

促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是一类存在于真核生物中的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。同动物和酵母中MAPKs类似,植物中的MAPK级联途径也是由MAPKs、MAPKKs、MAPKKKs三种类型的激酶组成。植物细胞内受体接受外界刺激信号,然后依次磷酸化激活MAPKKKs、MAPKKs和MAPKs,并影响相关基因表达。目前已经从植物中分离到一些MAPKs、MAPKKs和MAPKKKs,它们参与了植物激素、生物胁迫及非生物胁迫等过程的信号传导。介绍了植物响应外界环境胁迫过程中,不同机制和因子对MAPKs级联途径的调控。

Ras蛋白信号途径及其对线虫生长发育的调控作用

Ras蛋白是一个分子质量为21kD左右的单体GTP酶,具有两种构象:GTP结合构象(Ras.GTP)及GDP结合构象(Ras.GDP),这两种构象在一定条件下可发生互变。由生长因子介导的Ras信号传导途径是诸多信号途径中与细胞增殖、分化密切相关的重要信号途径。受体型TPK/Ras/MAPK信号转导途径是是目前研究的最为清楚的受Ras蛋白调节的信号传导途径,该途径包括受体型酪氨酸蛋白激酶(RTK)、接头蛋白、鸟苷酸释放因子(GNEF)、Ras蛋白以及MAPK级联反应体系。目前,TPK/Ras/MAPK信号转导途径在秀丽杆线虫(Caenorhabolitis elegans中研究的最为清楚:Ras信号途径对于许多发育进程是必需的,包括阴门、子宫、交合刺、P12以及排泄管细胞的诱导分化;控制着性肌原细胞迁移、轴突导向;对细胞减数分裂粗线期具有促进作用。对C.elegans的研究加深了对TPK/Ras/MAPK信号途径结构、突变体表型以及与其他信号途径的互作的了解,将会促进Ras信号途径对植物寄生线虫调控作用的研究。

MAPK信号传导通路研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinase,MAPK)途径是生物体内重要的信号传导系统之一,参与介导生长、发育、分裂、分化、死亡以及细胞间的功能同步等多种细胞过程。本文就该通路的激活、活性调节及其新发现的生理功能做一综述。对MAPK通路的研究将有助于进一步了解某些疾 病的发生。

Ras/ERK信号转导通路在肝纤维化发生发展中的作用

在肝纤维化的发病机制中,肝星状细胞(HSC)发挥关键的作用。各种细胞因子的分泌,引起胞外信息变化。细胞因子与HSC上的相应受体结合,激活多条信号转导通路,将胞外信息转导入核,调控基因的转录和表达,从而引起胶原分泌增多、细胞基质降解和沉积失衡。在参与肝纤维化发生发展的信号转导通路中,Ras/ERK信号转导通路介导的信号转导促使了肝纤维化的发生发展。

褪黑素对创伤性脑损伤大鼠ERK-MAPK信号传导机制的影响

目的探讨褪黑素(MT)对创伤性脑损伤(TBI)急性期ERK-丝裂原活化蛋白酶(ERK-MAPK)信号通路的影响。方法制作大鼠创伤性脑损伤模型,打击损伤前30 min自尾静脉注射MT。细胞凋亡原位检测(TUNEL)荧光法检测细胞凋亡,Western印迹法检测损伤脑皮质p ERK表达水平。结果 TUNEL荧光法检测显示TBI+MT组损伤灶周围皮层TUNEL阳性细胞少于TBI组,凋亡指数降低(P<0.05)。Western印迹法检测脑损伤后各个时间点p ERK表达,在损伤后1 h起迅速升高,3 d为表达高峰,其后逐渐下降,但直到损伤后5 d仍未恢复至基础水平。TBI+MT组p ERK水平较TBI组明显降低(P<0.01),而且MT 20 mg/kg组的p ERK1/2水平低于10 mg/kg组(P<0.05)。结论创伤性脑损伤诱导了强烈的ERK-MAPK信号通路激活,MT能够剂量依赖性抑制ERK1/2-MAPK信号通路激活,并抑制急性期神经细胞凋亡。

PNRC多肽通过影响Ras信号途径抑制BT-474细胞的增殖

背景与目的:根据富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白(proline-rich nuclear receptor coregulatory protein,PNRC)与Grb2相互作用位点资料和其他基于干扰Grb2/SH3与SOS的相互作用的富含脯氨酸短肽的设计原则,我们设计、合成了基于PNRC的抗Ras、PTD融合多肽(PTD-PARP),研究该多肽在BT474乳腺癌细胞中对Ras信号途径的影响及其抗肿瘤增殖活性。方法:用多肽合成仪合成PNRC的抗Ras PTD融合多肽PTD-PARP和其单独的PTD多肽。以PTD多肽为对照,将增加浓度的PTD-PARP与分离的、EGF刺激的BT474细胞裂解物共温育,采用免疫共沉淀结合Western blot检测Grb2免疫共沉淀复合物中SOS和PNRC的含量情况。用PTD-PARP-琼脂糖凝胶4B活化偶联磁珠免疫共沉淀BT474细胞裂解物,采用PI3K,Nck和Grb2的抗体检测沉淀复合物中这些含SH3结构域的蛋白与PTD-PARP的结合能力。Western blot检测PTD-PARP对EGF刺激的BT474细胞内Ras和MAPK活化的影响。采用软琼脂克隆形成实验考察PTD-PARP对BT474细胞体外增殖的影响。结果:PTD-PARP能以剂量依赖方式抑制SOS、PNRC与Grb2的结合,它与Grb2的结合具有特异性,PTD-PARP能降低BT474细胞中EGF刺激的Ras和MAKP活化,并能显著抑制BT474细胞的体外软琼脂克隆形成。结论:PNRC抗Ras PTD融合多肽可通过影响Ras信号途径抑制乳腺癌细胞的增殖。