抵当汤含药血清对高糖诱导大鼠肾小球内皮细胞损伤的影响

目的观察抵当汤含药血清对高糖诱导损伤大鼠肾小球内皮细胞(RGECs)的保护作用。方法大鼠灌胃给予蒸馏水或抵当汤制备空白血清或抵当汤含药血清,CCK8法筛选葡萄糖造模浓度及含药血清给药浓度。将RGECs分为空白组、模型组、抵当汤组(10%抵当汤含药血清)、达格列净组(空白血清+2μmol/L达格列净)、抵当汤+达格列净组(10%抵当汤含药血清+2μmol/L达格列净),药物处理24 h后,RT-qPCR法和Western blot法检测细胞Nrf2、HO-1、NQO-1 mRNA和蛋白表达,免疫荧光法检测细胞Nrf2荧光表达,比色法检测细胞SOD活性及MDA水平。结果与空白组比较,模型组RGECs中Nrf2、HO-1、NQO-1 mRNA和蛋白表达以及SOD活性降低(P<0.01),MDA水平升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组Nrf2、HO-1、NQO-1 mRNA和蛋白表达以及SOD活性升高(P<0.05,P<0.01),MDA水平降低(P<0.01)。结论抵当汤含药血清可以通过激活Nrf2信号通路从而抑制氧化应激,对高糖损伤的RGECs起到保护作用。

转化生长因子-RhoGTP酶/Rho激酶系统信号通路在低氧诱导大鼠肾小球内皮细胞-间充质细胞转分化中的作用及机制研究

目的低氧对大鼠肾小球内皮细胞(rat glomerular endothelial cells,rGECs)转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1的表达和转分化相关蛋白表达的影响及机制研究。方法低氧培养箱培养rGECs,根据低氧培养时间将细胞随机分为5组,检测细胞增殖活性、TGF-β1及转分化相关蛋白表达情况;在低氧培养细胞中在合适的时间分别加入RhoA/ROCK阻滞剂和TGF-β1受体阻滞剂,分别再次测定:①细胞培养液中TGF-β1表达;②转分化相关蛋白表达;③RhoA/ROCK活性变化。结果①随着低氧培养时间的延长,rGECs增殖活性增加,72h活性最大(F=546.63,P<0.001);②与常氧组比较,低氧组的TGF-β1(F=16.320,P<0.001)和α-SMA(F=5.032,P=0.009)表达升高,而CD-31(F=9.882,P<0.001)表达降低;③经RhoA/ROCK阻滞剂和TGF-β1受体阻滞剂阻滞后α-SMA蛋白表达下降(相对表达量由1.423分别下降至0.750、0.434),CD-31蛋白表达升高(相对表达量由0.741分别上升至0.779、0.934)。结论研究发现低氧可致rGECs增殖活性增加,促进rGECs向间质细胞转分化。并通过细胞信号阻滞剂研究发现低氧可能通过TGF-β1-RhoA/ROCK信号通路促进rGECs向间质细胞转分化。

高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞中eNOS/NO的变化及调节机制研究

目的:探讨高糖条件下大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)中内皮一氧化氮合酶/一氧化氮(eNOS/NO)的变化及可能的调节机制。方法:将大鼠GMCs常规培养在含5.5 mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养液中,用胰蛋白酶-乙二胺四乙酸(EDTA)混合消化酶传代。用RT、实时-PCR和Western blot测定GMCs中eNOS蛋白和其mRNA的相对含量。用NO显示剂DAF-2 DA(0.5 nmol/L)标记,NO的变化用QM-6荧光计测定。结果:在GMCs中,高糖可明显增加eNOS的表达(P<0.05),并有一定的量效、时效关系,同时可促进NO产生;放线菌酮可以抑制eNOS蛋白的合成。高糖对eNOS表达的调节与eNOS mRNA的稳定性没有明显关系。结论:高糖可以上调eNOS mRNA和其蛋白的表达,并可促进NO产生。该效应可能与eNOS蛋白的合成相关,而与eNOS mRNA的稳定性没有明显关系。本实验的结果为eNOS介导的NO产生和由此所致肾小球的超滤过提供了新的思路。