AFP-L3、HSP70及AFP水平在大鼠肝癌发展中的动态变化

目的:通过动态检测大鼠肝癌模型造模各阶段血清中AFP-L3、HSP70和AFP水平的变化,对其在肝癌早期诊断中的价值做综合评价。方法:SD大鼠CCl4橄榄油溶液腹壁皮下注射,食用白酒溶液代替饮用水,建立大鼠肝硬化基础上的肝癌模型。从造模第6周起,每2周心脏采血1次,ELISA法检测大鼠血清中AFP-L3、HSP70和AFP水平,并取部分肝组织行病理学检验造模进度。结果:造模第8周发生肝硬化,第10周发生不典型增生及早期肝癌结节。AFP-L3和HSP70在造模第10周即显著升高,其阳性率分别为60%和70%,两者联合检测的阳性率为90%,HSP70在肝硬化阶段也有升高,AFP-L3没有显著变化。AFP水平在造模第12周才有显著升高,阳性率为60%,肝硬化阶段也略有升高,肝癌早期无显著变化。AFP-L3/AFP比值在造模第10周即显著升高(35.5%),其敏感性和特异性分别达70%和100%。结论:成功建立了大鼠肝硬化基础上的肝癌模型,传统指标AFP对极早期的肝癌不敏感,特异性不高,而AFP-L3和HSP70均较AFP敏感,两者联合可提高检测的敏感性,AFP-L3和AFP-L3/AFP比值均较AFP特异。

大鼠肝癌模型CBRH-3的建立及其生物学特性

用ＤＥＮＡ诱发近交系Ｗｉｓｔａｒ大鼠，经三个月后得原发性肝癌，移植于同品系幼鼠，从而建立了 一株染色体众数正常，ＡＥＰ阳性的大鼠移植性肝癌模型，命名为ＣＢＲＨ－３，病理鉴定为肝细胞型肝 癌。至今已传至６０余代，目前生长稳定。

两种方式接种肝癌模型的比较

目的观察直接注入法和瘤块种植法制作Wistar大鼠肝癌模型的差异。方法采用大鼠含有Walker-256肿瘤细胞的腹水离心洗涤后接种于另一组大鼠的后腿后外侧皮下，待肿瘤长到直径约为1．0em，取下肿瘤并切成1．0-2．0mm^3大小。然后将瘤块接种于15只大鼠的肝叶上；另一组（15只）按上述方式将癌性腹水接种于正常大鼠的肝叶上；两组均在第7天后采用CT和开腹后游标卡尺分别测量种植性肝癌的直径。结果腹水直接注射法与瘤块种植法的肿瘤成瘤率分别为：86．7％和80％，两者并不具有统计学意义（P〉0．05）。第7天时，直接注射法所形成肿瘤的直径大于瘤块种植法的肿瘤（P〈0．05）。但瘤块法所引起的腹腔转移的可能性要少于腹水直接种法。结论直接注射法和瘤块种植法制作大鼠肝癌模型均可以满足临床实验研究的需要，但直接注射法的成瘤时间短，腹腔转移可能性也大；瘤块种植法成瘤时间略长，但腹腔转移可能性少于直接法。

三种大鼠移植性肝癌原位模型制作的对比研究

目的常用大鼠移植性肝癌模型制作方法存在诸多不足,通过对直接注射法的改良以解决其缺陷。方法将90只Wistar大鼠随机分成3组,每组30只,分别以直接注射法、瘤块种植法和改良注射法进行模型制作,观察动物模型的肿瘤生长情况和动物模型的生存情况。结果术后第8天对3组大鼠进行比较,改良注射法模型组(C组)的肿瘤最大直径、体积和质量与直接注射法模型组(A组)、瘤块种植法模型组(B组)间差异并不显著(P>0.05),具有可行性,在肿瘤移植的成功率方面以改良注射法模型组最高;在腹水和腹壁瘤发生率方面C组明显低于A、B两组(P<0.01);生存时间长于A、B两组(P<0.01)。结论基于易行性和重复性考虑而产生的改良注射法,优化了直接注射法的实验操作方法、弥补了直接注射法的缺陷,很好地控制了实验条件,既拥有直接注射法的易行性,又提升了其可重复性,同时保证了动物模型的适用性和可靠性。

大鼠移植性肝癌模型生物学行为与分期的初步探讨

目的:探讨可能反映人类原发性肝癌发生发展的大鼠移植性肝癌模型的分期标准。方法:采用完整 瘤组织块肝内种植法复制大鼠移植性肝癌模型,在不同时期分别观察模型大鼠肝癌体积和体质量等一般状 况,用全自动生化仪检测大鼠血清白蛋白含量,病理切片观察肝癌组织及邻近脏器侵润、转移情况。结果:模 型大鼠体质量减轻及腹水生成平均出现在造模后第12、18天;第11天白蛋白含量为(35.32±2.45)g/L,与 造模前比较无统计学差异(P>0.05),第18天白蛋白含量为(26.00±3.37)g/L,与第11天比较差异有统 计学意义(P<0.05);模型第23天出现不同程度的脏器转移,其中血性腹水发生率为56.25%。结论:大鼠 移植性肝癌模型第5～11天相当于人类早期肝癌。模型第18天后相当于临床晚期肝癌。该分期标准可能 用于指导原发性肝癌实验性治疗策略的选择。

大鼠肝癌模型经肝动脉改良给药技术的建立

目的建立大鼠移植性肝癌模型,探讨改良的经肝动脉插管(Lindell法)给药技术在该模型上运用的可行性及价值。方法20只SD大鼠采用完整组织块肝内植入法建立模型,随机分为两组,在手术显微镜下经胃十二指肠动脉逆行细针穿刺灌注染料,其中组A采用改良的Lindell给药技术,组B采用常规Lindell法,观察大鼠各肝叶染色程度,比较两组模型肿瘤重量及体积。结果模型复制和给药成功率为100%,两组瘤重和瘤体比较差异无统计学意义(P>0.05);在灌注前暂时阻断肝固有动脉右侧分支的改良Lindell技术使大鼠尾状叶、右叶及中叶染色程度明显减少(P<0.05)。结论用完整组织块肝内植入法建立的大鼠移植性肝癌模型稳定;改良的Lindell给药技术能模拟临床肝癌介入超选择插管技术,适合于肝癌血管介入治疗的实验研究。

扶正抗癌方对大鼠移植性肝癌的抗肿瘤及抗脂质过氧化作用

目的:探讨扶正抗癌方(CM)的抗肿瘤作用。方法:采用CM治疗大鼠移植性肝癌,观察治疗后其对肿瘤大小、生存期、肝功能、SOD的影响。结果:①CM有明显缩瘤作用和显著延长带瘤鼠生存时间(与NSG相比,P<0.01及P<0.05);②CM能提高荷瘤鼠红细胞SOD酶活性,有降低MDA含量作用(P<0.01);③CM具有保肝作用,④CM可能具有消腹水、抗转移作用;⑤光镜下CM组瘤细胞肿胀,而坏死率较低,推知CM内真正的细胞毒物质缺乏或缺如。结论:CM具有抗大鼠移植性肝癌和抗脂质过氧化作用,瘤体大小与SOD可能呈负相关关系。

鼠肝癌变过程中总RNA及不同分子形式GGT的表达与改变

为探讨肝细胞癌变过程中γ－谷氨酰移换酶（ＧＧＴ）和总ＲＮＡ的表达与动态改变，以０．０５％的２－乙酰氨基芴（２－ＦＡＡ）诱导ＳＤ大鼠肝癌发生，观察鼠肝在癌变过程中的组织学改变及总ＲＮＡ浓度和ＧＧＴ比活性的动态改变。结果表明，大鼠摄入２－ＦＡＡ后，鼠肝大量表达出ＧＧＴ，并引起血中ＧＧＴ活性异常；实验组血清总ＧＧＴ、肝组织可溶性及膜结合性ＧＧＴ均显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）；６周后肝组织总ＲＮＡ浓度，较６周前显著升高（Ｐ＜０．０５），且与ＧＧＴ活性呈正相关（ｒ＝０．９０，Ｐ＜０．０５）。研究结果提示，ＧＧＴ为反映肝细胞癌变的标志酶，分析其活性有助于肝癌的早期诊断。

肝癌与肝血管瘤超声诊断声像图分析

肝癌与肝血管瘤超声诊断声像图分析银秀梅（包头医学院一附院物理诊断科，包头０１４０１０）Ｂ超是诊断肝癌与肝血管瘤的主要手段，对肝癌与肝血管瘤鉴别诊断尤其重要。本文对我院１９８８年至１９９３年以来Ｂ超诊断的１６８例原发及继发性肝癌、５０例肝血管瘤的声像图...

大鼠肝癌模型中Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA和蛋白表达水平及其与肿瘤检测的关系

PIWI和piRNA的表达水平与肿瘤类型密切相关。Piwil2 mRNA在肝癌中的表达量比肿瘤周围的肝脏组织的表达量高。PIWI/piRNA通路基因Piwil4、Mael和Ddx4为候选癌基因,在多种癌组织中表达,而在肝癌组织中的研究尚无报道。为探讨Piwil4、Mael和Ddx4基因在肝癌组织中表达水平变化的影响,建立了大鼠肝癌模型,并提取血清用ELISA方法检测肿瘤标记物,采用实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹方法和免疫组织化学方法检测正常肝组织与模型组肝组织中Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA转录和蛋白表达水平。结果表明,大鼠肝癌动物模型血清中肿瘤标记物含量明显升高。Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA及蛋白在肝癌模型组织中高表达。研究表明,肝癌模型组织中Piwil4、Mael和Ddx4基因表达水平有望作为肝癌检测的一种分子标志物。

大鼠移植性肝癌模型血管介入的护理

目的 总结大鼠移植性肝癌模型血管介入的配合经验。方法 协助医生对2 0只大鼠移植性肝癌模型进行血管介入治疗,在术前、术后积极实施相关护理对策。结果 模型大鼠给药成功率1 0 0 %,术后的存活率为90 %。结论 熟悉大鼠血管介入技术,加强术中的配合有助于提高实验的成功率,提示熟练的护理配合在肝癌患者行化疗栓塞术中具有重要的意义。

TGF-β1和HSP70在大鼠肝癌早期诊断中的价值探讨

目的:通过动态检测大鼠肝癌模型造模各阶段血清中TGF-β1和HSP70水平并与传统指标AFP比较,对其在肝癌早期诊断中的价值做综合的评价。方法:用CCL4诱导大鼠肝硬化基础上的肝癌模型。从造模第6周起,每两周心脏采血一次,ELISA法检测大鼠血清中TGF-β1、HSP70和AFP水平,并取部分肝组织行病理学检查。结果:造模第8周发生肝硬化,第10周发生不典型增生及早期肝癌结节。造模第10周TGF-β1和HSP70水平即显著升高,TGF-β1在肝硬化阶段无显著升高,而HSP70则略微有升高,二者特异性分别为90%和60%,阳性率分别为55%和70%,联合检测的阳性率为80%,造模第12周的阳性率分别达85%和90%,联合检测阳性率达100%;AFP水平在造模第12周才有显著升高,肝硬化阶段也有升高并与早期肝癌无显著性差异。其阳性率和特异性分别为60%和30%。结论:传统指标AFP对极早期的肝癌不敏感,特异性不高,而TGF-β1和HSP70均较AFP敏感、特异,二者联合可提高检测敏感性。

扶正抗癌方对大鼠移植性肝癌红细胞粘附功能及IL-2水平的影响

目的:探讨扶正抗癌方(FAP)对大鼠移植性肝癌红细胞免疫功能及IL-2水平的影响,为其抗肿瘤作用提供实验依据。方法:20只移植性肝癌模型随机分为NS和FAP两组,每组10只,并设正常组大鼠为对照,分别灌胃10天后测红细胞免疫功能及脾脏的IL-2水平。结果,FAP能显著提高RBC-C_(3b)RR,降低RBC-ICRR.促进IL-2产生(P<0.05及P<0.01)。结论:FAP确有调节红细胞免疫功能紊乱及促使IL-2产生作用,其抗癌效应可能于此有关。

Overexpression of insulin-like growth factor-Ⅰ receptor as a pertinent biomarker for hepatocytes malignant transformation

AIM:To investigate the dynamic features of insulinlike growth factor-Ⅰreceptor(IGF-ⅠR)expression in rat hepatocarcinogenesis,and the relationship between IGF-ⅠR and hepatocytes malignant transformation at mRNA or protein level.METHODS:Hepatoma models were made by inducing with 2-fluorenylacetamide(2-FAA)on male SpragueDawley rats.Morphological changes of hepatocytes were observed by pathological Hematoxylin and eosin staining,the dynamic expressions of liver and serum IGF-ⅠR were quantitatively analyzed by an enzymelinked immunosorbent assay.The distribution of hepatic IGF-ⅠR was located by immunohistochemistry.The fragments of IGF-ⅠR gene were amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction,and confirmed by sequencing.RESULTS:Rat hepatocytes after induced by 2-FAA were changed dynamically from granule-like degeneration,precancerous to hepatoma formation with the progressing increasing of hepatic mRNA or IGF-ⅠR expression.The incidences of liver IGF-ⅠR,IGF-ⅠR mRNA,specific IGF-ⅠR concentration(ng/mg wet liver),and serum IGF-ⅠR level(ng/mL)were 0.0%,0.0%,0.63±0.17,and 1.33±0.47 in the control;50.0%,61.1%,0.65±0.2,and 1.51±0.46 in the degeneration;88.9%,100%,0.66±0.14,and 1.92±0.29 in the precancerosis;and 100%,100%,0.96±0.09,and2.43±0.57 in the cancerous group,respectively.IGF-ⅠR expression in the cancerous group was significantly higher(P<0.01)than that in any of other groups at mRNA or protein level.The closely positive IGF-ⅠR relationship was found between livers and sera(r=0.91,t=14.222,P<0.01),respectively.CONCLUSION:IGF-ⅠR expression may participate in rat hepatocarcinogenesis and its abnormality should be an early marker for hepatocytes malignant transformation.

扶正抗癌方对大鼠移植性肝癌抗肿瘤作用的实验研究

目的：探讨扶正抗癌方（ＣＭ）抗肿瘤作用。方法：用大鼠移植性肝癌对其进行了研究。结果：１ＣＭ有显著缩瘤作用和显著延长荷瘤鼠生存时间（与ＮＳＧ相比，Ｐ＜００１及Ｐ＜００５）；２ＣＭ能提高带瘤鼠红细胞免疫功能的作用（Ｐ＜００５）；３ＣＭ具有保肝作用（Ｐ＞００５）；４ＣＭ可能具有消腹水、抗转移作用。５光镜下ＣＭ组瘤细胞肿胀，而坏死率较低。结论：ＣＭ确有明显抗瘤作用，而ＣＭ内真正的细胞毒物质缺乏或缺如。

肝细胞损伤时鸟嘌呤酶的释放与动态改变

［目的］探讨鸟嘌呤酶（ＧＵＡ）在肝细胞损伤过程中的动态改变及其临床价值。 ［方法］以２－ＦＡＡ喂饲ＳＤ大鼠，观察大鼠肝细胞从损伤到癌变过程中血清及肝组织中的ＧＵＡ的活性变化。［结果］在鼠肝细胞发生变性至肝组织全数癌变时，各实验组血清及肝组织中ＧＵＡ活性与正常对照组相比，ＧＵＡ第二周开始升高，以后酶活性持续升高，但肝癌鼠ＧＵＡ的动力学常数（Ｋｍ值）与正常鼠的ＧＵＡ相比，未见异常改变。［结论］胞浆酶ＧＵＡ为肝细胞损害的特异标志酶，血清该酶活性的升高幅度反映了肝病的严重程度。

异常黑胆质肝癌移植模型大鼠Rho/Rock信号通路相关分子表达研究

目的:探讨异常黑胆质证肝癌移植模型大鼠Rho/Rock信号通路相关分子的蛋白表达,诠释异常黑胆质肿瘤高发的分子生物学基础。方法:采用足底电击、干寒饲料、铁管制动等多种因素刺激21 d建立异常黑胆质证大鼠模型,在此基础上通过肝内注射walker-256瘤细胞建立异常黑胆质大鼠肝癌移植模型,观察其肝脏组织形态结构变化,并采用Western Blot法检测大鼠肝脏相关蛋白的表达变化。结果:异黑肿瘤组肝脏组织形成明显癌巢,与对照组相比癌旁组织肝索结构紊乱,癌细胞向肝小叶深部迁移;异常黑胆质成熟剂给药组癌细胞崩解、凋亡,胶原纤维增生,癌旁肝索重构。与对照组相比,肿瘤组Cdc42和Rock2蛋白表达均明显增加(P<0.05),异黑肿瘤组Cdc42、Rac1、Rock1、Rock2和Myl1蛋白表达明显增加(P<0.05);与异黑肿瘤组相比,异常黑胆质成熟剂(ASM)给药组Cdc42、Rac1、Rock1、Rock2和Myl1蛋白表达呈剂量依赖性降低(P<0.05),且与对照组无显著差异。结论:异常黑胆质证肝癌移植模型可能与Rho/Rock信号通路分子通过调控肌动蛋白收缩引起的肿瘤细胞侵袭、转移生物学行为等作用有关,异常黑胆质成熟剂可能通过下调Rho/Rock信号通路分子使损伤的组织形态逆转。

ASM对异常黑胆质肝癌移植大鼠模型的干预

目的:探讨移植法制备异常黑胆质肝癌模型的可行性及维药异常黑胆质成熟剂(ASM)对肿瘤的干预作用。方法:用随机法将雄性SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、病症模型组以及ASM药物治疗组(低、中、高剂量),正常对照组行假肝癌移植术(肝内注射生理盐水);模型对照组采用移植法将walker-256腹水瘤细胞进行肝内接种,建立肝癌模型;病症模型组首先采用多重因素(干寒饲养、足底刺激、铁管制动等)诱导制备异常黑胆质证大鼠模型,在此基础上进行肝内接种walker-256腹水瘤细胞,建立异常黑胆质证肝癌大鼠模型;ASM药物治疗组分为低、中、高不同剂量组(2.53,5.06,10.12 g/kg),异常黑胆质证大鼠接种瘤细胞后给予ASM灌胃治疗。2 w后处死取材,观察各组大鼠肿瘤发生情况、肿瘤体积、腹水形成率及腹壁后转移率;通过光镜及电镜观察各组大鼠肝癌组织肿瘤细胞形态结构变化。结果:模型对照组与病症模型组大鼠在肿瘤发生率、腹壁后转移率及肿瘤体积大小方面无显著差异(P>0.05);与模型对照组相比,病症模型组大鼠腹水形成率显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);与病症模型组相比,低、中剂量ASM可以显著减小肿瘤体积、降低腹水形成率及腹壁后转移率(P<0.05),而高剂量ASM组仅有腹水形成率显著降低(P<0.05),肿瘤体积及腹壁后转移率无明显变化;光镜及电镜下观察可见,不同剂量ASM治疗组大鼠肿瘤细胞的水肿程度增加,瘤细胞发生变性坏死,其周围炎性细胞浸润明显增多。结论:异常黑胆质可能促进肝癌腹水形成和转移,从而影响肝癌的发展及转归;ASM对肿瘤细胞有一定损伤,可以减少肝癌腹水形成和转移,从而起到一定的抗肿瘤作用,影响肿瘤转归。