大鼠皮肤类过敏试验的方法学研究及适用性考察

目的研究大鼠皮肤类过敏试验方法的适用性和可靠性，对中药注射剂潜在的类过敏反应进行检测和评价。方法以C48／80为工具药物，对可能影响大鼠皮肤类过敏试验的灵敏度和可靠性因素进行比较研究，优选最佳试验条件，选用Tween80、内毒素、中华眼镜蛇毒素、天花粉蛋白注射液、痰热清注射液和血塞通注射液进行考察和应用。结果大鼠皮肤类过敏反应试验方法最佳条件为：采用胰岛素注射器（口径0．33mm）进行药物注射，50-100pL／点，给药后立即尾静脉注射0．5％伊文思蓝染液1mL，15min时颈动脉放血处死大鼠，剪取背部皮肤处理。采用该方法，Tween80、内毒素、中华眼镜蛇毒素、天花粉蛋白注射液均呈现一定的诱导大鼠皮肤出现蓝斑的能力，痰热清注射液给予临床剂量无蓝斑出现。血塞通注射液，临床剂量虽可引起大鼠皮肤蓝斑，但不排除与因其本身的药效作用干扰所致。结论该方法操作简便，试验周期短，需用药量少，检测敏感性高，结果重复性好，但易受药物本身特性干扰而出现假阳性。

大鼠皮肤类过敏试验的组织学机制

目的探索大鼠皮肤类过敏试验的组织学机制。方法大鼠背部脊柱两侧分别皮内注射C48/80、吐温-80、碘海醇注射液、紫杉醇注射液、注射用血塞通(冻干)、喜炎平注射液后,立即尾静脉注射0.5%伊文思蓝溶液,15 min后麻醉处死,剪取背部皮肤,测量蓝斑直径,取蓝斑皮肤观察肥大细胞形态,计算脱颗粒率。再采用Pearson检验进行相关性分析。结果皮内注射C48/80、吐温-80、碘海醇注射液、紫杉醇注射液、注射用血塞通(冻干)后,蓝斑直径、肥大细胞脱颗粒率与药物质量浓度(体积分数)均呈正相关,两者之间亦然,但肥大细胞数均无明显变化[除0.8、1.6 mg/mL注射用血塞通(冻干)外];皮内注射喜炎平注射液后,蓝斑直径、肥大细胞数、脱颗粒率均无明显变化(除质量浓度5 mg/mL时蓝斑直径外)。结论大鼠皮肤类过敏试验组织学机制是类过敏阳性物质致皮肤肥大细胞脱颗粒,其脱颗粒率与阳性物质浓度、皮肤蓝斑直径呈高度正相关,可作为药物类过敏性及其反应强度评判的一项补充指标。

伊维菌素乳膏皮肤毒性实验研究

[目的 ]研究伊维菌素乳膏对动物皮肤的毒性作用 .[方法 ]利用健康SD大鼠进行皮肤急性毒性试验 ,用健康白兔进行皮肤刺激性试验 ,用健康豚鼠进行皮肤过敏试验 .[结果 ]伊维菌素乳膏对大鼠完整皮肤及破损皮肤均无急性毒性反应 ,对白兔完整皮肤和破损皮肤无刺激性 ,对豚鼠完整皮肤无致敏作用 .[结论 ]伊维菌素乳膏用于预防和治疗与人体蠕形螨有关的酒糟鼻。

两种可吸收缝合线缝合切口愈合鼠皮抗拉试验

进行了双轴工具显微镜的技术改造,使之具有微型电子万能试验机的基本功能,并实施了两种可吸收缝合线缝合白鼠皮愈合抗拉性能测试。测试结果表明:两种线缝合鼠皮愈合后期抗拉性能差别不大,初期和中期纯生物蛋白线优于人工合成线缝合愈合的抗拉性能。

若干药物的大鼠皮肤类过敏试验

目的考察和评价10种造影剂、中药注射剂和化学合成药的大鼠皮肤类过敏试验方法的适用性。方法大鼠皮内注射受试药物后立即尾静脉注射0.5%伊文思蓝染液,15 min后处死,测量蓝斑直径。设定蓝斑直径>0.5 cm为类过敏反应阳性。结果临床剂量下,碘海醇、复方泛影葡胺注射液、双黄连、生脉、脉络宁和喜炎平注射液出现类过敏反应阳性,而碘普罗胺注射液、清开灵和金纳多注射液呈类过敏反应阴性;高于临床剂量时,上述受试药物除清开灵外,均为类过敏反应阳性。盐酸川芎嗪在临床剂量和临床2倍剂量下类过敏反应均为阴性。结论蓝斑直径与给药剂量有关,大鼠皮肤类过敏试验方法可作为初步评价注射类药物临床前类过敏性的一种简便、快速的检测方法。

深度烧伤后保留变性真皮自体皮移植修复愈合鼠皮抗拉试验

实施了深度烧伤修复愈合鼠皮抗拉试验。测试结果表明:术后9天移植部位鼠皮抗拉强度、最大应变值已有正常皮肤性能的60%以上,术后60天的愈合鼠皮抗拉性能接近正常值。为完成鼠皮抗拉性能的测试,对双轴工具显微镜技术改造,使其具有微型电子万能试验机的基本功能。

枸杞水提取物的保湿功效及其致敏性评价

以枸杞为试验材料,测定枸杞水提取物作为化妆品添加剂的保湿性及安全性。采用烘箱干燥法、透明质酸酶抑制试验及对大鼠皮肤水含量影响的测定,探讨了枸杞水提取物的保湿能力;采用动物试验,检验其致敏性。结果表明,枸杞水提取物具有良好的保湿能力,对透明质酸酶活性有较好的抑制效果,并且应用添加该提取物的化妆品未见致敏性反应。

杉木提取物凝胶剂修复大鼠皮肤创面的效果研究

目的探讨杉木提取物凝胶在大鼠皮肤创面愈合过程中的效果。方法将32只SD大鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、低剂量组及高剂量组,每组8只,将各组大鼠进行全层皮肤缺损造模后,阴性对照组皮肤破损处不予处理,阳性对照组予以莫匹罗星0.1g,低剂量组予以0.1 g/mL杉木凝胶剂0.1 g,高剂量组予以0.2 g/mL杉木凝胶剂0.1g,所有小组大鼠均持续治疗14 d,统计伤后第3、7、14天皮肤愈合率,治疗14d后对愈合处皮肤进行全层取材,HE染色观察皮肤组织愈合情况,采用抑菌试验方法对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌进行杉木原液抗菌效果评估。结果伤后第3天,高剂量组愈合率高于阴性对照组,低于阳性对照组,低剂量组愈合率低于阳性对照组(P<0.05);伤后第7天高剂量组愈合率高于阴性对照组(P<0.05),低剂量组愈合率低于阳性对照组(P<0.05);伤后第14天,高剂量组愈合率高于阴性对照组(P<0.05),低剂量组愈合率明显低于阳性对照组(P<0.05),高于阴性对照组(P<0.05);与伤前比较,各组伤后第3、7、14天愈合率均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组相比,高剂量组与阳性对照组表皮层与真皮层结构清楚、显著增厚、分层明显,且毛细血管增生明显。高剂量与低剂量杉木在金黄色葡萄球菌平板中抑菌圈直径大于生理盐水(P<0.05),小于莫匹罗星(P<0.05);高剂量杉木在大肠埃希菌平板中抑菌圈直径大于生理盐水(P<0.05),小于莫匹罗星(P<0.05),低剂量杉木在大肠埃希菌平板中抑菌圈直径小于莫匹罗星(P<0.05),与生理盐水无显著差异(P>0.05)。结论杉木提取物凝胶剂可调控机体炎症反应,促进大鼠皮肤创面的修复,同时具有明显抑菌作用,避免创面感染,利于皮肤伤口愈合。

大鼠透皮电阻实验替代皮肤腐蚀性实验的验证

目的通过建立大鼠皮肤透皮电阻(TER)实验,研究运用体外方法替代动物试验检测化学品皮肤腐蚀性的可行性。方法参照经济合作与发展组织(OECD)体外实验方法指南430(透皮电阻分析法)建立测定系统,使用11种参考物质对该实验体系进行评估。根据本实验系统对参考物质的实测数据,可判定TER值>15 kΩ为阴性(非腐蚀性),TER<5 kΩ为阳性(腐蚀性),TER介于两者之间或3个平行样的TER测定值在界值上下波动时为可疑阳性,进一步进行染料渗透量测定,以8 mol/L盐酸测得的染料渗透量作为判断标准。结果整个实验的灵敏度为100%(5/5),特异度100%(6/6)。结论大鼠TER测定和染料渗透量分析相结合能成功判断本研究所选的11种标准化学物质的皮肤腐蚀性。此方法在实际运用中的有效性还需更多化学物质的检测来验证。

皮肤腐蚀性试验大鼠经皮电阻替代方法建立

目的建立大鼠经皮电阻(TER)试验,并初步评价试验方法的可行性。方法制作离体皮肤固定装置,用正常大鼠皮片固定于装置后的TER值变化及病理组织学变化来评价其可行性,参照OECD TG430的方法,采用10种化学物进行TER试验,并统计分析TER试验结果与动物试验结果的一致性。结果正常离体皮肤固定装置24 h期间能维持屏障功能稳定,3次重复实验TER值变化曲线一致,24 h时皮片组织形态结构仍然完好;TER试验对10种化学物的腐蚀性判别结果与动物试验的结果具有一致性(Mcnemar,P=0.500;Kappa=0.615,P=0.035),灵敏度为100%,特异度为66.7%。结论 TER试验可替代家兔皮肤腐蚀性试验用于评价化学物的皮肤腐蚀性。

大鼠皮肤类过敏试验评定标准的探讨

该研究通过对大鼠皮肤类过敏试验各项特征指标的研究,选定同只动物给药部位皮肤蓝斑OD与对照部位皮肤蓝斑OD比值(K)作为新的评定标准。并以有临床类过敏反应报道的常用造影剂、中药注射剂和注射剂原料药或辅料为受试药物进行大鼠皮肤类过敏试验,以对K进行界定:K>2为类过敏反应阳性;1.2≤K≤2为类过敏性可疑;K<1.2为类过敏反应阴性。以此标准对受试药物的类过敏性进行评定。评定结果与经典标准的评定结果进行比较,以考察K的适用性。比较结果显示,以K作为大鼠皮肤类过敏试验的评定标准,可更真实地反映皮肤蓝染的实际情况,同时将因动物个体因素造成的误差降到最低。其阳性、可疑、阴性3级标准相对蓝斑直径阳性、阴性2级标准,具有更为客观、准确的特点,建议尝试选择K作为药物致大鼠皮肤类过敏反应的评定标准。

地龙蜂蜜浸液皮肤用药安全性及对大鼠血清溶菌酶的影响

目的:观察地龙蜂蜜浸液的皮肤过敏反应,探讨地龙蜂蜜浸液对浅溃疡模型大鼠血清溶菌酶的影响。方法:采用动物皮肤过敏实验、皮肤急性毒性实验进行安全性评价,将SD大鼠以随机数字表法分为6组,每组10只,设4个实验组,即完整皮肤1组,完整皮肤2组,破损皮肤1组,破损皮肤2组;另设2个对照组,即完整皮肤对照药物组、破损皮肤对照药物组;通过接种金黄色葡萄球菌液复制大鼠溃疡模型,将大鼠随机分为4组,即模型对照组、对照组、1组、2组。造模成功后连续给药7 d,于末次给药后2 h,采集样本检测血清溶菌酶含量。结果:实验连续观察14 d,各用药组对完整或破损皮肤大鼠未见任何急性中毒症状,肉眼未见分泌物,动物活动自如,饮食正常,各组大鼠体质量比较,无明显差异(P>0.05),未发生过敏性反应及急性毒性反应;各用药组血清溶菌酶含量显著高于正常对照组及模型组(P<0.01),对照组与1组比较,溶菌酶含量接近,差异无统计学意义(P>0.05),两组溶菌酶含量显著高于其余用药组(P<0.01)。结论:地龙蜂蜜浸液具有良好的皮肤用药安全性,促进溃疡愈合作用可能与提高血清溶菌酶含量有关。