TMEM16A钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的表达及其电生理特性研究

目的:探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞的表达及其电生理特性。方法:构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞,同时优化脂质体和载体的量和比例,获得最佳转染效率和表达效果,杀稻瘟菌素(blasticidin)进行抗生素筛选,获取稳定表达TMEM16A的FRT细胞株。RT-PCR和免疫荧光检测TMEM16A于FRT细胞的表达情况;倒置荧光显微镜下观察TMEM16A在FRT细胞中的表达和定位;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFPH148Q/I152L检测TMEM16A钙激活氯离子通道的功能。结果:BamHⅠ和XbaⅠ双酶切的琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明目的基因TMEM16A成功克隆到真核表达载体pUB6/V5中;RT-PCR和免疫荧光实验结果表明经杀稻瘟菌素筛选后的FRT细胞在mRNA和蛋白水平表达TMEM16A,倒置显微镜下观察结果表明TMEM16A在FRT细胞膜上有表达;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFP-H148Q/I152L证实稳定表达于FRT细胞的TMEM16A具有经典的钙激活氯离子通道特性。结论:FRT细胞可高效表达TMEM16A。TMEM16A是钙激活氯离子通道的分子基础。

大鼠实验性胃溃疡期间甲状腺的组织学和酶组织化学的研究

雄性Wistar大鼠80只,分成溃疡组、盐水组和空白组。溃疡组在无菌条件下打开腹腔,将少量冰醋酸注入胃粘膜下层,造成实验性胃溃疡;盐水组模拟手术,用等量生理盐水注入胃粘膜下层;空白组为正常大鼠。在手术后1~28天分批取材,进行组织学和酶组织化学观察。盐水组:手术后2~21天,甲状腺滤泡细胞的AcP、AlP、α-GPD、SDH、G 6 PD和NsE的活性减弱,并且比空白组的低,手术后4~21天,滤泡细胞变低,滤泡腔变大;溃疡组:手术后2~21天的AlP活性比盐水组略高,但比空白组的稍有减弱,α-GPD、SDH和G6 PD活性都比盐水组高,与空白组的相同。NsE与盐水组的相似,在手术后4~21天,此酶活性有所减弱。手术后4~10天溃疡组的滤泡细胞变低,滤泡腔变大。手术后14天,滤泡细胞高度恢复正常,滤泡腔大小与空白组的相似。本实验结果与家兔实验性胃溃疡期间甲状腺滤泡细胞功能活性增强基本一致。从而提示,在实验性胃溃疡期间,大鼠和家兔的甲状腺滤泡细胞可能都参与了胃溃疡修复的代谢活动。

ANO1稳定转染细胞模型的构建及生理特性

为了构建稳定转染钙激活氯离子通道(CaCCs)细胞模型并研究其生理特性,本试验采用脂质体转染和抗生素筛选获取共表达阴离子通道1(ANO1)蛋白和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞;用倒置荧光显微镜观察ANO1和YFP-H148Q/I152L在FRT细胞的表达情况;用流式细胞仪检测细胞模型纯度;用荧光淬灭动力学试验检测细胞模型功能;用细胞模型或膜片钳技术研究ANO1生理特性,包括转运阴离子的特性、不同激活剂及抑制剂对ANO1的调控作用、ANO1电流受Ca^(2+)调控作用等。结果显示,倒置荧光显微镜下可观察到清晰的荧光信号;荧光淬灭动力学试验证明,此细胞模型可用于ANO1生理特性的研究;ANO1具有转运阴离子的特性;钙激活氯离子通道激活剂可以使ANO1开放且呈剂量依赖关系;钙激活氯离子通道抑制剂可抑制ANO1开放且具有剂量依赖关系;ANO1电流呈现钙依赖的特性;高浓度Ca^(2+)引起Run-down现象。结果表明,本试验成功构建ANO1细胞模型,ANO1具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性。

妊娠期高血压疾病大鼠甲状腺超微结构和功能变化的联系

目的研究妊娠期高血压疾病大鼠甲状腺激素水平及甲状腺组织的超微病理改变,探讨妊娠期高血压疾病甲状腺组织结构损伤是否与其激素水平变化相一致。方法采用亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)建立妊娠期高血压疾病模型大鼠,发光免疫法测定正常妊娠组、妊娠期高血压疾病模型组(PIH组)大鼠血清中FT3、FT4及TSH的浓度变化,透射电镜下观察甲状腺组织的结构变化。结果 PIH组FT3、FT4水平较正常妊娠组呈下降趋势,TSH水平显著升高(P<0.05);电镜下观察PIH组大鼠甲状腺滤泡上皮细胞损伤明显,主要显示甲状腺功能低下。结论甲状腺亦是妊娠期高血压疾病慢性攻击的靶器官,妊娠期高血压疾病存在甲状腺组织形态学的改变,与血清中激素浓度变化意义基本相同。