分泌抗马铃薯Y病毒单克隆抗体的大鼠杂交瘤细胞系的建立及抗体稳定性测定

用大鼠的骨髓瘤细胞系(IR983)与经马铃薯Y病毒(PVY)免疫的大鼠(LOU/c)脾细胞融合,建立了3类分泌抗该病毒株系特异性单克隆抗体(McAB)的杂交瘤细胞系。其一对PVY^n具有特异性反虚;其二对PVY°具有特异性反应;其三对PVY^n和PVY°均产生反应。经用ELIAA双抗体夹心法和ELISA间接法检测,上述(McAb)同TMV、CMV、TEV、AMV、TuMV、PLRV、PVX七种植物病毒均不产生交叉反应。对上述杂交瘤细胞系和McAb的生物学特性及理化特性进行了鉴定。

微孔法分离大鼠骨髓内皮祖细胞

用一种杂交瘤皿,根据内皮祖细胞集落形成单位(endothelial progenitor cells colony-forming units,EPCs-CFUs)的形态特征和EPCs表面特异性标记物分离EPCs.取大鼠股骨、胫骨骨髓,将全骨髓接种在聚苯乙烯制作的杂交瘤皿上,培养4～7天后出现CFUs,将这些集落分别挑选出来后,取单个集落的部分细胞免疫荧光鉴定EPCs表面特异性标记物CD133/VEGFR-2.CD133/VEGFR-2双阳性即为EPCs-CFUs.与此对应的余下一部分继续传代增殖,流式细胞术鉴定CD133/VEGFR-2/CD34,并把此方法命名为微孔法.发现接种后第4天,显微镜下可见明显的CFUs.免疫荧光鉴定大约7%的CFUs为CD133+/VEGFR-2+,进一步传代培养,流式细胞术鉴定CD133+/VEGFR-2+/CD34+细胞纯度达70%以上.传代细胞可在体外形成血管样结构,并表达内皮细胞特异性标记物vWF.结果表明通过微孔法能成功地从大鼠骨髓分离到EPCs.

应用Protein G纯化细胞培养上清中的大鼠单抗

用ｍｉｎｉＰｅｒｍ系统旋转连续培养大鼠杂交瘤细胞株，获得大量含抗鼠ＩＬ－４（ＩｇＧ１）和ＩＬ－５（ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ）抗体的培养上清；经ＰＭ１０膜超滤、５０％饱和硫酸铵沉淀及链球菌Ｇ蛋白－琼脂糖亲和层析纯化ＩｇＧ单抗。结果每升杂交瘤细胞培养上清得到大鼠ＩｇＧ２２～３６ｍｇ；１次可纯化抗体达２０ｍｇ；经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及ＥＬＩＳＡ鉴定，所得到的抗体纯度高、活性保持良好。

抗大肠癌大鼠单克隆抗体R19的建立和特性

用大鼠杂交瘤技术，将人盲肠癌Ｈｃｅ－８６９３细胞免疫ＬＯＵ／ｃ大鼠，取其脾细胞与大鼠骨髓瘤ＩＲ９８３Ｆ细胞融合，共产生６２０株杂交瘤，从中筛选出分泌抗人大肠癌单抗杂交瘤１９５株，阳性率为３１％。其中Ｒ１９株分泌ＩｇＧ２ｂ型抗体，与人大肠癌Ｈｃｅ－８６９３和ＨＴ－２９细胞呈强阳性反应，与人鼻咽癌ＣＮＥ２细胞有弱阳性交叉反应，与正常人胚肺２ＢＳ细胞，人肝癌、人肺癌等共１５种细胞无交叉反应，显示较强的特异性。用１２５Ｉ标记Ｒ１９单抗在荷人盲肠癌裸鼠体内分布显示肿瘤部位特异性分布。

大鼠抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及其特性定鉴

将人血红蛋白(Hb)免疫LOU/M(IgK-1a)大鼠,取脾细胞与IR983F大鼠骨髓瘤细胞融合,制备了3株大鼠抗Hb单克隆抗体(McAb)2A10、9B5,4F12杂交瘤细胞株。3种McAb腹水效价分别为1:16×10~4、1:3.2×10~4、1:323×10~4。培养上清效价分别为1:256、1:16、1:8。亚类测定分别为IgM、IgG2_a、IgG2_4、染色体记数2A10为60±5,9B5为72±6。3种McAb的亲和常数分别为1.28×10~6M^(-1)、6.35×10~7M^(-1),3.64×10~8M^(-1)。特异性检测表明3种McAb与人Hb及人红细胞的亲和力明显高于其它种类动物的红细胞,与无关蛋白无结合活性。用这些McAb检测Hb最低可测到1υg水平,检测人红细胞可检测到4～8个RBC/ml(相当于90～190ngHb/ml)。大大高于目前临床常用的测定潜血方法。

大鼠抗-HRP单克隆抗体的制备及应用的研究

本文采用大鼠杂交瘤体系制备了大鼠抗HRP McAb,并以此与HRP制成McPAP复合物。本文的结果表明,我们制成的McPAP复合物不仅可用于免疫组织化学法,也可用于ELISA法。均获得强的染色反应而背景清晰,并对McPAP与酶标记抗体的灵敏度进行了比较。

大鼠杂交瘤技术及抗HIV、HBsAg大鼠单克隆抗体的制备

在目前制备单克隆抗体的三个主要体系:小鼠、大鼠和人杂交瘤体系中,大鼠系统具有某些特有的优点。本文以制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎表面抗原的大鼠单克隆抗体为例,较详细的介绍了大鼠杂交瘤的特点及大鼠单克隆抗体制备技术。

体外简便快速增产大鼠杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的方法对比研究

本文报告了以抗肾综合征出血热病毒(HFRSV)大鼠单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞系为模型,研究比较了用常规营养液添加培养法与静置细胞培养法(非添加培养)生产大鼠McAb的产量和滴度的效果。结果表明应用静置细胞培养法,McAb的产量明显高于添加细胞培养法2～3倍,抗体效价亦增加至少一个数量级,并且有简便易行、快速省时、减轻劳动强度和节省原材料的特点,值得试用。

采用重组小鼠凝血因子Ⅸ制备单克隆抗体的研究

将小鼠凝血因子Ⅸ (mFⅨ )cDNA蛋白编码区序列克隆至原核表达载体 pQE30 ,在大肠杆菌M 15中获得高效表达 (约占细菌蛋白总量的 5 1 2 % ) ,并经过SDS PAGE纯化获得均一的重组mFⅨ蛋白 .以此蛋白为抗原 ,免疫Lou/MN系大鼠 ,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞 (Sp 2 / 0 )融合后 ,经 3次克隆化选择获 2株杂交瘤细胞(H4B5和C2B10 ) .以 1× 10 6杂交瘤细胞注射免疫缺陷型裸鼠 ,10d后获得腹水 .对此单抗的功能和特异性初步研究表明 ,所制备的抗小鼠FⅨ单抗可用于Western免疫印迹等研究 .