常见红细胞添加剂成分对双花扁豆凝集素与A1红细胞反应的影响

目的探索常见试剂红细胞添加剂中糖类物质和金属离子螯合剂成分对双花扁豆凝集素(Dolichos Biflorus Agglutinin,DBA,又称抗-A_(1))与A_(1)红细胞间血清学反应凝集强度的影响,为减少临床检测假阴性结果和凝集素功能特性研究提供数据支持,也为当前实验室A_(1)抗原鉴定质控实验提出改进方案。方法以生理盐水为基础红细胞稀释液,在反应体系中分别加入梯度稀释的糖溶液(葡萄糖、蔗糖、甘露醇)和棋盘滴定的强金属离子螯合剂(E_(DTA-Na_(2)))和二价金属阳离子(Ca^(2+)、Mg^(2+)),对不同反应条件下DBA-A_(1)红细胞凝集强度进行评估。结果在DBA-A_(1)红细胞反应体系中C_(E_(DTA-Na_(2)))>0.6 mM时出现了明显的凝集抑制现象,提高C_(Ca)^(2+)或C_(Mg)^(2+)可减弱高浓度E_(DTA-Na_(2))对DBA-A_(1)红细胞凝集强度的影响;另一方面,体系中糖类物质浓度的增高也使DBA-A_(1)红细胞凝集强度产生明显减弱,加入0.6%~5%葡萄糖溶液,1.3%~10%蔗糖溶液或5%甘露醇溶液时,DBA-A_(1)红细胞凝集明显减弱。结论红细胞添加剂中的E_(DTA-Na_(2))和糖类物质对-A_(1)红细胞反应存在凝集抑制,是血型血清学检测中植物凝集素制剂使用的重要干扰因素。

筛选试剂红细胞的血型基因分型方法建立和应用

目的建立重要的红细胞血型的基因分型技术用于筛选抗原谱合理的试剂红细胞。方法首先建立检测红细胞血型系统Rh CE、Kidd、MNS、Duffy、Diego、Lutheran、Colton、Lutheran和Kell等的聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)分型技术;对于无法获得相关血型试剂的Diego和Colton血型系统,采用测序方法验证该技术检测血型的准确性,其他6个血型系统则用血清学方法验证该技术检测血型的准确性;最后应用该方法对82名O型固定献血者的8个血型系统做基因分型。结果血型基因PCR-SSP分型技术的结果,与血清学和测序检测结果比较,完全一致。所建立的血型基因分型技术对82名O型献血者8种红细胞血型检测,筛选出13位可能适合提供试剂红细胞的献血者。结论成功建立了分型准确、方便、经济的红细胞血型基因PCR-SSP技术,用于从大量献血者中筛选出抗原谱合理的试剂红细胞。

保存期间试剂红细胞血型相关膜蛋白抗原性研究

目的研究红细胞膜蛋白抗原稳定性随保存时间变化。方法 D抗原、Fy^a抗原、Jk^a抗原、在保存节点（0、14、28、42 d）,对上述红细胞血型抗原抗原性进行检测。结果在标化后的抗体范围,使用国际标准抗体,应用流式细胞术,在42 d检出对比组之间的D抗原抗原性差异具统计学意义（下降11. 3%; P〈0. 05）; 42 d时,应用微柱凝胶卡,使用国际标准品（下降33%）、单克隆IgG-D（下降66%）、IgM-D（下降26%）,检出对比组之间的D抗原抗原性差异具统计学意义（P〈0. 01）,Fy^a抗原抗原性检出对比组之间的差异具统计学意义（下降33%,P〈0. 05）,Jk^a抗原抗原性未检出,对比组之间的差异具统计学意义。结论实验室应定期对谱细胞进行质控,对于弱抗体的检测宜使用较新鲜的谱细胞或新鲜细胞进行检测及确认。

RhCE表型对RhD抗原量及抗-D效价测定的影响研究

目的目前对Rh系统抗-D的定量或效价检测(相对定量)方法皆依赖于试剂红细胞。日常工作中,绝大多数实验室采用单人份红细胞作为效价测定的试剂红细胞,若RhCE表型对RhD抗原表达量影响显著,则不同RhCE表型必然会产生不同的抗-D效价测定结果。本研究旨在通过RhCE分型,RhD抗原定量试验及相应抗体进行效价测定,比较分析RhCE表型对RhD抗原量及抗-D效价测定的影响。方法采用血清学方法筛选获得CCee、Ccee、ccEE、CcEe表型的RhD阳性标本,并使用流式细胞术检测上述红细胞RhD抗原量,最后使用不同RhCE表型单人份标本红细胞对同一份抗-D进行效价测定。分析RhCE表型对RhD抗原量及抗-D效价测定的影响。结果在99例细胞红细胞标本进行Rh血型血清学分型后,对CCDee(n=17)、CcDee(n=15)、CcDEe(n=8)、ccDEE(n=8)分型细胞进行流式免疫荧光检测,发现CcDee与ccDEE及CcDEe间、CCDee与ccDEE之间RhD抗原的荧光量比较存在较大统计学意义差异(P<0.001),CcDee与CCDee比较存在统计学意义差异(P<0.01),其余各组间均不具统计学意义的差异;再对其中CCDee(n=15)、CcDee(n=14)、CcDEe(n=8)、ccDEE(n=8),使用同1份抗-D血浆进行效价测定分析,将效价结果与红细胞RhD抗原免疫荧光值(MFI)进行比较后,发现红细胞表面RhD抗原量与效价二者呈现正相关关系(r=0.907;P<0.001),对效价与RhD抗原MFI值进行统计分析发现:对同一份抗-D血浆,效价值为32、64、128各组内红细胞MFI具有统计学意义的差异(P<0.05);将效价与RhCE分型进行统计分析,发现CCEE与Ccee间、CcEe与Ccee间存在统计学意义的差异(P<0.05)。结论不同的RhCE表型会造成D抗原表达差异,D抗原量对效价测定有较大影响,提示在效价测定试验中,使用相同RhCE分型红细胞作为试剂细胞或对RhD抗原进行定量分析可提高效价试验的准确度。

流式细胞术分析小鼠外周血免疫细胞全血裂解试剂比较研究

本研究探讨流式细胞术外周血样本制备中红细胞裂解液的作用。用流式细胞术检测进口的商品化红细胞裂解液OptiLyse C(Beckman Coulter),FACS Lysing Solution(BD Pharmingen)以及自制裂解液RBC Lysis Buffer裂解小鼠外周血红细胞后免疫细胞的表达情况并进行了对比分析。结果表明,用3种裂解液制备样本中CD3e+、CD3e+CD4+、CD3e+CD8a+、CD3e-CD19+、CD3e-NK1.1+和Gr-1+细胞的百分比均无明显差异(p>0.05);而OptiLyse C裂解液更适于Gr-1+细胞测定,不适于Foxp3+Tregs细胞测定;FACS Lysing Solution和自制RBC LysisBuffer适于Foxp3+Tregs细胞测定。结论:应用自制RBC Lysis Buffer裂解液,按标准化操作程序制备流式样本,能够达到进口的商品化裂解液OptiLyse C的效果,它不仅能满足实验要求,又可降低试剂成本,可推广应用。

流式细胞仪全血红细胞裂解液研究

目的研制流式细胞仪全血红细胞裂解液,并与进口试剂比对效果,以期大大降低试剂的成本,使其在中国广泛应用。方法采用流式细胞术,分别用进口试剂和自制试剂制备全血样品,比较两种试剂对30例健康体检者白细胞分群的影响、淋巴细胞亚群比例的影响、淋巴细胞亚群的平均荧光强度的影响。结果自制试剂制备的样品中淋巴细胞、单核细胞和粒细胞的分布与进口试剂一致;自制试剂制备的样品,T淋巴细胞(CD3+)、B淋巴细胞(CD19+/CD3-)、辅助/诱导T淋巴细胞(CD3+CD4+CD8-)、抑制/细胞毒T淋巴细胞(CD3+CD4-CD8+)、NK细胞(CD16+56+/CD3-)的百分率与进口试剂无明显差异(P>0.05);自制试剂制备的样品,T淋巴细胞、B淋巴细胞、辅助/诱导T淋巴细胞和抑制/细胞毒T淋巴细胞的平均荧光强度与进口试剂无明显差异(P>0.05),但NK细胞的平均荧光强度弱于进口试剂(P<0.05)。结论与进口试剂比对的结果表明,自制试剂对白细胞的分群、淋巴细胞亚群的百分率、淋巴细胞表面分子CD3、CD4、CD8、CD19的表达量,均达到了进口试剂的效果,而成本大大降低。

人红细胞冻干保护剂的研究进展

冷冻干燥法是实现红细胞长期保存的方法之一,要实现冻干,首要解决的问题是维持细胞膜的完整性和功能。低温和干燥是对膜产生损伤的主要因素,通过添加保护剂,优化降温速率及冻干程序、复水方法等,可以缓解冻干过程对膜的损伤。其中冻干保护剂的作用是保持细胞膜结构和减少渗透性损伤,其构成主要为碳水化合物(糖类)、聚合物、蛋白类和其他一些成分。本文对目前常用的冻干保护剂的种类、作用机制、研究进展和存在的问题,进行了分析和总结,并对未来研究及发展方向进行了展望。

试剂红细胞的研究与应用

目的：研制试剂红细胞用于血型鉴定反定型，保证临床输血安全。方法：制备效期长的红细胞保养液，再用该保养液制备4％的试剂红细胞，2℃-8℃冰箱保存，每周对其进行红细胞抗原性和免疫特异性测定及反定型试验．观察细胞凝集状况。结果：本法制备的试剂红细胞保存期为68d，具有较好的抗原特异性和细胞稳定性，68d以后凝集强度减弱。结论：该试剂红细胞凝集效能良好，红细胞抗原稳定性、免疫特异性好，具有成本低，制作易，操作简便等优点。

红细胞瞬间磁化试剂的制备与应用

目的研制用于ABO、RHD血型检测试剂的红细胞瞬间磁化试剂。方法采用共沉淀法制备磁性粒子,并检测其主要成分及粒径大小,用此磁性粒子制备红细胞瞬间磁化试剂,并分别进行各项检测。结果磁性粒子的主要成分为四氧化三铁,粒径100nm左右。该试剂的外观及特异性均合格,磁响应时间不超过30s,重复性较好,敏感性为98.20%,与试管法检测结果比较,差异无显著意义。结论红细胞瞬间磁化试剂可用于红细胞系统的血型检测。

试剂红细胞质量控制方案的建立

目的建立一套简单易行的试剂红细胞质量控制检测方案，提高试剂红细胞的质量保证，并为制备试剂红细胞的质量标准提供依据。方法分别对相同方法配制的保存1mo和2mo后的试剂红细胞与新鲜制备的试剂红细胞进行特异性、亲和力和抗原性测定，比较不同保存期试剂红细胞的渗透脆性、变形性、红细胞沉降率、反复冻融抗破坏性。结果保存1mo，2mo的试剂红细胞的特异性、亲和力与新鲜配制的试剂红细胞无明显的差异，但保存2mo后的试剂红细胞的抗原性低于新鲜制备和保存1mo的试剂红细胞，试剂红细胞渗透脆性、变形性和反复冻融抗破坏能力均明显低于新鲜配制的试荆红细胞；保存2mo和1mo后的试剂红细胞自然沉降率明显高于新鲜配制的试剂红细胞。结论试剂红细胞保存至2mo时其特异性、亲和力与保存1mo和新鲜配制的试剂红细胞无差异，可以常规应用，但随着保存时间的延长，其抗原性、渗透脆性、变形性及抗破坏能力都明显下降，在常规应用中应注意。

长效反定型红细胞试剂的研究

目的：通过研究实验探索最佳的醛化剂浓度及醛化时间对红细胞进行醛化处理，以获得保存效期长、凝集效果佳的反定型红细胞试剂。方法：分别以0.5%、0.1%、0.05%的戊二醛对洗涤后的红细胞进行1分钟、3分钟、5分钟、10分钟的醛化，配制成5-10%的醛化反定型红细胞试剂，分别与购买的商品化反定型红细胞试剂，单克隆抗A、抗B正定型试剂进行对比试验，同时在2-8℃冰箱放置进行稳定性试验。结果：用0.1%的戊二醛醛化红细胞可以获得最佳的稳定性与凝集效果的平衡，在12个月的保存试验期内试剂稳定，与商品化的反定型红细胞试剂及正定型的对比实验中，二者的结果完全相符。结论：0.1%的戊二醛醛化反定型红细胞试剂具有良好的稳定性及凝集效果，可以用于ABO血型的反定型，同时用醛化的方法制备稳定而又凝集效果佳红细胞试剂也是一条值得探索的途径。

自制红细胞悬液与商品红细胞试剂反定型检测结果分析

血型检测是采供血机构的常规检查项目之一,微量反应板法血型检测技术是血站目前应用最为广泛的一种血型检测技术。用于ABO反定型的红细胞可分为自制红细胞悬液与商品红细胞试剂。自制红细胞悬液成本低,制备容易,但保存期短,人为影响因素较多,易造成血型错判。商品红细胞试剂使用方便,保存期长,但价格较贵。笔者对一种商品红细胞试剂与我站血型室自制红细胞悬液反定型血型检测结果进行了对比分析,现报告如下。

洗涤红细胞输注治疗胆碱酯酶老化的有机磷农药中毒6例临床观察

:目的 :应用洗涤红细胞成分血治疗胆碱酯酶老化的有机磷农药中毒患者 6例 ,旨在提高疗效。方法 :用洗涤红细胞成分血治疗 6例 ,治愈 4例 ,死亡 2例 ,治愈率 6 6 %。结论 :输注洗涤红细胞成分血疗效较好 。

2种试剂红细胞用于血型反定型检测的效果比较

目的:比较商品试剂红细胞和自制试剂红细胞在血型反定型检测中的效果。方法:应用商品试剂红细胞和自制试剂红细胞在梯形微板中进行反定型检测,比较两种试剂红细胞的一次性判读结果的准确率、亚型和不规则抗体的检出率、手工改动现象、灵敏度及抗干扰能力。结果:商品试剂红细胞同自制试剂红细胞相比,前者的一次性判读准确率较高,手工改动现象较少,灵敏度较稳定,在溶血中抗干扰能力较强,而后者的不规则抗体的检出率较高,脂血的抗干扰能力两者接近。结论:商品试剂红细胞用于血型反定型检测的效果略优于自制试剂红细胞,不同的实验室应结合实际情况进行选择。