RNA恒温扩增实时检测痰标本结核分枝杆菌对肺结核的诊断价值

目的:探讨RNA恒温扩增实时检测(SAT)技术检测痰标本结核分枝杆菌(MTB)对肺结核的诊断价值.方法:选择2020年8月至2022年8月本院收治的1190例可疑活动性肺结核患者为研究对象.对患者痰标本行罗氏培养、抗酸染色、SAT检测,以痰培养结果为"金标准",分析SAT检测方法的诊断价值.结果:痰培养结果明确肺结核患者990例,非肺结核患者200例;SAT检测明确肺结核患者570例,非肺结核患者620例;罗氏培养法明确肺结核患者445例,非肺结核患者745例;抗酸染色法明确肺结核患者300例,非肺结核患者890例.与罗氏培养法及抗酸染色法比较,SAT检测对于肺结核诊断灵敏度、准确度、阳性预测值及阴性预测值分别为56.97%(564/990)、63.95%(761/1190)、98.95%(564/570)、31.29%(194/620),均高于罗氏培养法及抗酸染色法,差异均有统计学意义(P<0.05);特异度各检查方法比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:SAT检测痰标本MTB对肺结核诊断具有较高的应用价值,能在较短时间内提供诊断结果,且具有较高的诊断准确度,为临床进一步诊疗提供了可靠的参考依据.

RNA实时荧光恒温扩增技术在儿童支原体肺炎中的治疗效果及意义

目的寻找评价儿童支原体肺炎治疗效果的有效方法。方法收集72例利用血清支原体抗体检测法确诊为儿童支原体肺炎的患者,平均年龄(5.7±2.8)岁,给予同剂量阿奇霉素进行治疗。使用RNA实时荧光恒温扩增技术(SAT)检测治疗前后超敏C反应蛋白(CRP)和血清乳酸脱氢酶(LDH)的差异。结果相对于治疗前,治疗后CRP、LDH明显降低(P<0.05),随着SAT转阴时间的延长,CRP、LDH水平逐渐升高(P<0.05);相对于治疗前最大呼气流量(PEF)和1秒用力呼气容积(FEV1),治疗后PEF明显改善,两组数据分别比较均具有显著性差异(P<0.01)。结论 SAT和血清LDH、CRP联合检测,对临床诊断支原体肺炎演变和发展具有重要意义。

肺炎支原体RNA-SAT对儿童社区获得性肺炎诊治的价值

目的探讨肺炎支原体核糖核酸恒温扩增技术(MP RNA-SAT)对儿童社区获得性肺炎(CAP)诊治的价值。方法选择310例CAP的临床资料进行回顾性分析,其中肺炎支原体肺炎(MPP)和非肺炎支原体肺炎各155例,比较这两组的MP RNA-SAT和MP-IgM的检测结果。结果以临床诊断为标准,RNA-SAT的特异度(97.4%)及阳性预测值(92.2%)高于IgM(分别为72.3%、74.4%),而敏感度(30.3%)及阴性预测值(58.3%)则低于IgM(分别为80.6%、78.9%),差异有统计学意义(P<0.05);年龄>3岁、检测前不使用大环内酯类药物以及选择肺泡灌洗液作为检测标本均能提高RNA-SAT的检出率(P<0.05)。结论RNA-SAT能特异度识别出MP的活动性感染,联合使用RNA-SAT和IgM检测,能更加快速、准确地诊断MP感染,对儿童肺炎的诊治具有较高的价值。尽量在使用大环内酯类药物治疗前进行RNA-SAT检测,必要时可选择肺泡灌洗液作为检测标本以提高检出率。

RNA恒温扩增法与培养法检测解脲脲原体结果比较分析

目的:探讨实时荧光RNA恒温扩增检测(SAT)在男性不育患者精液标本中检测解脲脲原体(UU)的效果和临床意义。方法:收集2015年3~9月精液标本共662例,其中不育患者542例(不育组),已生育生殖健康检查人群标本120例(生育对照组),分别用培养法和SAT法同时检测以上标本。结果:培养法阳性的标本(除4例假阳性标本除外)SAT法检测全为阳性,其中不育组培养法与SAT法UU检出率分别为19.7%与54.1%(P<0.05),生育对照组为12.5%与42.5%(P<0.05)。用SAT法检测不育组和生育对照组其阳性率分别为51.4%和42.5%(P<0.05),而用培养法检测不育组和生育对照组的阳性率分别为19.7%和12.5%(P>0.05)。SAT法和培养法的检出率分别为52.0%和18.4%(P<0.05),两种检测方法的总符合率为53.2%。结论:SAT技术可快速、准确检测UU的RNA,是未来发展方向,而培养法设备要求低,操作简单,可做药敏试验,应根据临床需要,灵活选用,提高UU的诊治水平。

实时荧光核酸恒温扩增试验和定量反转录-聚合酶链反应对血清乙型肝炎病毒RNA定量检测的一致性评价

为评价实时荧光核酸恒温扩增试验(simultaneous amplification testing,SAT)与定量反转录-聚合酶链反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测血清样本中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)RNA的相关性与一致性,本研究收集了在复旦大学附属公共卫生临床中心就诊的212例患者的血清样本,其中慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者HBV DNA≥100 IU/mL 81例、HBV DNA<100 IU/mL 76例,以及作为对照的非HBV感染患者55例。采用SAT和qRT-PCR方法分别检测所有血清样本中的HBV RNA,对检测结果进行统计学分析。在HBV DNA≥100 IU/mL的CHB患者中,SAT和qRT-PCR的HBV RNA阳性检出率均为95.06%(77/81)。2种方法具有较好的相关性与一致性(R 2=0.803和CCC=0.882)。Bland Altman分析显示绝对偏倚为0.1 log copies/mL,相对偏倚为0.97%。配对t检验显示,结果无统计学差异(t=1.617,P=0.110)。在HBV DNA<100 IU/mL的CHB患者血清样本中,HBV RNA阳性检出率不同,SAT为98.68%(75/76),qRT-PCR为88.16%(67/76),2种方法相关性与一致性较差(R 2=0.326和CCC=0.438)。Bland Altman分析显示绝对偏倚为0.5 log copies/mL,相对偏倚为0.86%。配对t检验显示,结果有统计学差异(t=3.654,P<0.001)。在非HBV感染对照患者中,SAT和qRT-PCR均未检出HBV RNA阳性。结果提示,在HBV DNA≥100 IU/mL的CHB患者中应用SAT与qRT-PCR检测血清HBV RNA,其相关性与一致性较好,在HBV DNA<100 IU/mL的CHB患者中相关性与一致性存在一定差异。

RNA-SAT在儿童肺炎支原体肺炎诊断中的价值

目的探讨RNA实时荧光恒温扩增技术(RNA-SAT)在诊断儿童肺炎支原体肺炎(MPP)中的作用。方法选取221例临床诊断为社区获得性肺炎(CAP)的患儿为研究对象,其中MPP患儿75例,非MPP患儿146例,分别检测咽拭子肺炎支原体(MP)RNA和血清MP抗体(MP-Ab),对两种方法的检测结果进行统计学分析。结果以临床诊断为标准,RNASAT与MP-Ab检测法二者的敏感性分别为65.3%和64.0%(χ~2=0.02,P>0.01),特异性分别为97.9%和82.9%(χ~2=15.75,P<0.01);阳性预测值分别为94.2%和65.8%(χ~2=26.43,P<0.01),阴性预测值分别为84.6%和81.8%(χ~2=1.16,P>0.01)。结论 RNA-SAT作为一种无创的检测技术在儿童MPP的早期诊断中有较高的价值,结合MP-Ab检测可以有效提高MPP的诊断效率。

SAT-TB联合FQ-PCR检测在痰涂片阴性肺结核诊断中的效能

目的:分析RNA恒温扩增实时检测技术(SAT-TB)联合荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测在痰涂片阴性肺结核患者诊断中的效能。方法:选取2020年7月至2022年7月该院收治的75例疑似痰涂片阴性肺结核患者进行前瞻性研究。采集所有患者肺泡灌洗液标本,采用SAT-TB、FQ-PCR法进行检测,以结核分枝杆菌痰培养结果为“金标准”,比较SAT-TB、FQ-PCR单项及联合检测在痰涂片阴性肺结核诊断中的效能。结果:金标准结果显示,75例疑似痰涂片阴性肺结核患者中,阳性48例,阴性27例;SAT-TB检测结果显示,阳性36例,阴性39例;FQ-PCR检测结果显示,阳性37例,阴性38例;SAT-TB联合FQ-PCR检测结果显示,阳性47例,阴性28例;SAT-TB联合FQ-PCR检测诊断痰涂片阴性肺结核的灵敏度、准确度均高于SAT-TB、FQ-PCR单项检测诊断,漏诊率低于SAT-TB、FQ-PCR单项检测诊断,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SAT-TB联合FQ-PCR检测诊断痰涂片阴性肺结核的效能高于二者单项检测诊断效能。

难治性慢性前列腺炎患者解脲支原体、沙眼衣原体检测结果的分析

目的通过分析356例难治性慢性前列腺炎(RCP)患者的解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)感染情况,为临床治疗RCP提供参考依据。方法回顾性分析2016年12月至2019年12月中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科门诊收治的356例RCP患者,收集尿道拭子培养法(NGU 4项)及尿液RNA恒温扩增法检测(RNA-SAT)UU、CT的结果。结果NGU 4项共检出UU阳性75例(21.07%)、CT阳性9例(2.53%),CT+UU阳性8例(2.25%);RNA-SAT法共检出UU阳性101例(28.37%),CT阳性12例(3.37%),CT+UU阳性9例(2.53%)。RNA-SAT检测法UU阳性率及UU、CT总病原体检出率均明显高于NGU 4项法,差异有统计学意义(P<0.05);CT及CT+UU阳性率差异均无统计学意义(P>0.05);各年龄段UU、CT、CT+UU阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论RCP患者UU、CT阳性率较高,以UU为主,建议临床上对RCP患者进行UU、CT检测。RNA-SAT检测技术具有灵敏度高、结果准确等优点,适合门诊初筛及治疗后复查。

霉菌实时荧光核酸恒温扩增检测技术研究

以霉菌几丁质合酶Ⅲ保守序列作为靶序列设计引物,合成分子信标探针;以黑曲霉菌ATCC(16404)DNA为模板,通过PCR、分子克隆、转录构建靶标RNA,进而建立实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT),并对体系内相应成分进行优化;最后利用优化的SAT体系检测食品污染中常见的病原微生物,评价SAT方法的特异性;针对不同浓度的黑曲霉菌孢子悬液,提取RNA进行SAT检测,评价SAT方法的灵敏性。结果表明,SAT检测体系中引物浓度为10μmol·L^-1及探针浓度为10μmol·L^-1时,反应曲线最佳;扩增过程中累计荧光量达到设定的荧光阈值所需循环数与培养的黑曲霉菌孢子量的对数存在线性相关关系(y=-7.061x+59.567,R^2=0.961 1),该方法的灵敏度为10^3个·mL^-1孢子,用该方法检测食品中常见污染菌,发现仅黑曲霉菌出现荧光信号。初步建立了黑曲霉菌的SAT检测体系,可与食品常见污染细菌相鉴别,特异性达100%,进一步提高灵敏度后,可成为食品中黑曲霉菌检测的新方法。

两种检测方法对儿童肺炎支原体肺炎的诊断价值

目的比较两种检测方法对儿童肺炎支原体肺炎(MPP)的诊断价值,以为临床寻求快速、准确和特异度高的检测手段提供参考。方法选取2019年4月1日至12月31日西安市儿童医院呼吸科一病区459例诊断为社区获得性肺炎(CAP)的患儿为研究对象,分别采集患儿的血清标本、咽拭子。以经明胶颗粒凝集试验(PA)检测肺炎支原体总抗体(MP-Ab),以RNA实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)检测MP-RNA,比较两种检测方法诊断MPP的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比及阴性似然比。结果共230例患儿最终临床诊断为MPP。PA和SAT对患儿MP感染的诊断灵敏度分别为81.30%、70.00%,特异度分别为93.89%、98.69%,阳性预测值分别为93.03%、98.17%,阴性预测值分别为83.33%、76.61%,阳性似然比分别为13.33、53.85,阴性似然比分别为0.19、0.30。PA和SAT对患儿MP感染的诊断灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论两种检测方法均能满足临床需求,PA的灵敏度较SAT高,特异度较SAT低;两种检测方法的标本不同,可以组合检测以提高MP感染的检出率。

RNA恒温扩增技术在非淋球菌性尿道炎病原体检测中的临床评估

目的探讨不同核酸检测方法在非淋球菌性尿道炎病原体检测中的临床价值。方法对173例疑似非淋球菌性尿道炎感染患者尿液以及尿道分泌物样本运用RNA恒温扩增技术(RNA-SAT)和实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR)分别进行解脲支原体(Uu)和沙眼衣原体(Ct)检测,并对结果统计分析。结果 2种方法检测,尿道分泌物样本的Uu阳性率均高于尿液样本,差异有统计学意义(χ~2=4.011,P<0.05),而Ct阳性率经χ~2检验比较差异无统计学意义(χ~2=0.25,P>0.05)。Uu-尿液检测的敏感度(100.0%)高于Uu-尿道拭子(88.0%),差异有统计学意义(χ~2=9.049,P<0.01)。Ct-尿液和Ct-尿道拭子,二者敏感度差异无统计学意义(χ~2=0.642,P>0.05)。结论 RNA-SAT法既具备了FQ-PCR的高敏感度和特异度,又能很好地判断预后效果,同时可采用尿液作为待检样本,具有取样方便、耗时短、污染小及结果准确等优点,可用于临床实验室检测与疗效监测。

RNA恒温扩增实时荧光检测痰标本结核分枝杆菌对肺结核诊断的应用价值

目的探讨结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时荧光检测技术(SAT-TB)在肺结核诊断中的应用价值。方法纳入209例临床确诊肺结核患者和211例其他肺部疾病患者作为研究组和对照组,采集患者晨痰,用SAT-TB、涂片抗酸染色镜检(AFS)和BactecMGIT960液体培养(MGIT960)3种方法检测结核分枝杆菌,采用χ^(2)检验比较2组患者SAT-TB、AFS、MGIT960的阳性率和同组3种方法的阳性率差异,绘制ROC曲线比较3种方法的诊断价值。结果研究组3种检测方法阳性率均高于对照组(P<0.05);研究组3种方法检测结果比较差异有统计学意义(P<0.05);SAT-TB、AFS和MGIT960诊断肺结核的AUC分别为0.778(0.732-0.842)、0.620(0.566-0.674)和0.723(0.673-0.772);AFS.MGIT960和SAT-TB的灵敏度分别为28.23%,49.28%和57.42%,特异度分别为95.73%、95.26%和98.10%。结论SAT-TB有较高的灵敏度和特异度,且具有检测耗时短、能鉴别活菌等优点,在肺结核的诊断中有重要的应用价值。

实时荧光RNA恒温扩增技术在沙眼衣原体和淋球菌检测中的临床应用价值评估

目的评估实时荧光RNA恒温扩增技术(SAT)在生殖道沙眼衣原体(CT)和淋球菌(NG)检测中的临床应用价值。方法对186例疑似生殖道沙眼衣原体感染或淋病患者尿道或宫颈拭子分别采用实时荧光定量PCR(CT-RT-PCR)和SAT检测CT(CT-SAT);采用分离培养与鉴定(NG培养法)以及SAT检测淋球菌(NG-SAT)。对于差异样本,采用常规PCR进行鉴定。配对卡方检验统计分析检测结果。结果SAT技术对CT、NG检测阳性率分别为8.1%、10.2%,略高于CT-RT-PCR(7.0%)和NG培养法(9.1%),但差异无统计学意义。配对卡方检验显示SAT法与传统方法检测结果一致性较好。以CT-RT-PCR为金标准,CT-SAT的特异度和敏感度分别为98.3%和92.3%;CT-RTPCR加常规PCR检测结果作为扩大金标准,CT-SAT的特异度和敏感度分别为100.0%和93.8%。以NG培养法为金标准,NG-SAT的特异度和敏感度分别为98.8%和100.0%;NG培养法加常规PCR检测结果作为扩大金标准,NG-SAT的特异度和敏感度均为100.0%。结论SAT技术与传统金标准方法的检测结果一致性较好,且有较高的特异度和敏感度,适于沙眼衣原体和淋球菌的临床实验室检测。