实时定量PCR分析CML患者胸腺近期输出功能

目的 了解慢性粒细胞白血病 (CML)患者CD3+ 、CD4 + 和CD8+ 细胞中T细胞受体重排删除DNA环 (TRECs)的含量 ,从而推测CML患者的胸腺近期输出功能。方法 利用实时定量PCR(Taq Man)方法检测 8例CML患者外周血单个核细胞、3例CML患者CD4 + 和CD8+ 细胞中TRECs的水平。并根据外周血中CD3阳性率计算CD3+ 细胞中TRECs水平。 9例正常人外周血作为对照。结果 CML患者中TRECs含量为 0 .1± 0 .2 2 / 10 0 0T细胞 ,明显低于正常人TRECs水平 (6 .84± 4 .71/ 10 0 0T细胞 ,P <0 .0 1)。其中 5例患者外周血单个核细胞中未能检测到TRECs ,经分选CD4 + 和CD8+ 细胞后 ,2例可以检测到低水平的TRECs。结论 本研究首先报道了CML患者TRECs水平情况 。

MDS患者外周血中TCRVβ_(1-24)-Dβ1sjTRECs的分析

目的检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血中TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs的存在情况。方法利用半巢式PCR扩增9例MDS患者外周血单个核细胞DNA中TCRβ链基因重排时形成的T细胞受体DNA删除环(Vβ1-24-Dβ1sjTRECs),10例正常人外周血作为对照。结果所有TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs在正常人组外周血T细胞DNA中均有检出,除TCRVβ12-Dβ1sjTRECs和TCRVβ19-Dβ1sjTRECs外,其余TCRVβ-Dβ1sjTRECs在MDS患者外周血T细胞DNA中均可检。大多数TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs在正常人组中的检出率较MDS患者高,但其中只有6种TCRVβ-Dβ1sjTRECs(分别是TCRVβ3、12、13、15、21、22-Dβ1sjTRECs)的检出率差异有统计学意义。结论本研究率先提供了MDS患者外周血T细胞中TCRVβ-Dβ1sjTRECs的存在情况。MDS患者TCRVβ-Dβ1sjTRECs出现频率低于正常人提示其胸腺近期输出功能存在部分缺陷情况。

B淋巴细胞肿瘤患者胸腺近期的输出功能

本研究了解B细胞肿瘤患者胸腺近期输出naiveT细胞的水平,以评价其T细胞免疫潜能。利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测61例B细胞肿瘤患者(成人B-ALL20例,儿童B-ALL6例,B-CLL4例,B-NHL17例,MM14例)外周血单个核细胞(PBMNC)中T细胞受体重排删除DNA环(T-cell receptor rearrangement excision circles,TREC)的含量,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TREC水平。5例ALL-CR病人和17例正常人外周血作为对照。实验结果显示,正常人外周血中TREC拷贝数为3.76±3.42/1000PBMNC和5.87±4.96/1000CD3+细胞,而各B细胞肿瘤组的TREC水平均显著低于正常人水平,其TREC水平在成人B-ALL为0.53±1.52拷贝/1000PBMNC和2.01±3.93拷贝/1000CD3+细胞(p=0.0005和p=0.0123),在B-CLL为0.11±0.15拷贝/1000PBMNC,0.23±0.27拷贝/1000CD3+细胞(p=0.0015和p=0.0381),在B-NHL为0.71±1.34拷贝/1000PBMNC(p=0.0017),在MM为0.53±0.90拷贝/1000PBMNC(p=0.0018)。ALL-CR组TREC水平同样低于正常人水平,儿童B-ALL组TREC水平明显高于成人组。结论:各类B细胞肿瘤胸腺近期输出naiveT细胞功能均明显降低,个体差异较大,在病人达到完全缓解期时,胸腺近期输出功能仍没有得到恢复,提示对病人有动态观察的必要性。

AML-M5患者外周血naiveT细胞水平和TCRVβ谱系利用特点

目的 了解急性髓性白血病M5亚型 (AML -M5 )患者T细胞受体重排删除DNA环 (TRECs)的含量和TCRVβ基因谱系利用和克隆性 ,从而了解AML患者的胸腺近期输出功能和TCRVβ亚家族T细胞增殖特点 .方法 利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测 5例M5患者外周血单个核细胞TRECs的水平 ,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平 .利用RT -PCR和基因扫描分析患者外周血单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因表达和克隆性 .9例正常人外周血作为对照 .结果 M5患者外周血中TRECs含量为 0 .76± 1.2 1/ 10 0 0CD3+ 细胞 ,明显低于正常人TRECs水平 (6 .84± 4 .71/ 10 0 0CD3+ 细胞 ,p <0 .0 5 ) .5例患者外周血T细胞表达不同数量Vβ亚家族 (2 - 16个 ) .基因扫描分析显示 4例病人外周血中的一些Vβ亚家族出现克隆性T细胞 ,Vβ1,Vβ15和Vβ2 1克隆性T细胞均分别见于 3例病人中 .结论 率先报道了AML -M5型患者胸腺近期输出naiveT细胞功能明显降低 ,尽管整体T细胞免疫功能低下 ,患者仍存在优势利用和克隆性增殖Vβ亚家族T细胞 。

自体造血干细胞移植后的胸腺近期输出功能

目的:了解血液病患者接受自体造血干细胞移植(auto-HSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平,从而了解其胸腺近期输出功能和T细胞免疫重建情况。方法:采用实时定量PCR法检测9例血液病患者经auto-HSCT治疗后外周血单个核细胞(PBMNCs)中的TRECs水平;22例正常人外周血样本作为对照。结果:PBMNCs中的TRECs水平有着较大的个体差异,年龄与PBMNCs中的TRECs水平呈负相关;auto-HSCT组的每1 000个PBMNCs中的TRECs平均拷贝数(2.533±4.194)明显低于正常组(4.367±3.626)(P<0.05),但部分病例的TRECs水平已基本达到正常水平。结论:在一定时间内,auto-HSCT后的胸腺近期输出功能仍较低,不同个体T细胞免疫重建时间存在差异。

B-ALL患者胸腺输出TCR Vβ亚家族nave T细胞分析

目的了解B细胞-急性淋巴细胞白血病（B-ALL）患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族23种信号T细胞受体删除DNA环（sjTRECs）的存在情况，从而了解胸腺近期输出各TCR Vβ亚家族naive T细胞的功能。方法利用半巢式PCR分别扩增10例B-ALL患者外周血单个核细胞DNA中的23种Vβ～Dβ1 sjTRECs，10例正常人作为对照。结果TCR Vβ亚家族sjTRECs在大部分正常人和部分B-ALL患者中均可检测到，与正常人比较，B-ALL病人的Vβ24～Dβ1 sjTRECs出现频率比正常人高，且有统计学意义（80％：30％，P=0．0285），另有18个家族的Vβ～Dβ1 sjTRECs比正常人低，其中在Vβ1（30％，P=0．0285）、Vβ12（20％，P＝0．0285）、Vβ13（40％，P=0．0043）、Vβ15（20％，P=0．0022）和Vβ18（20％，P=0．0089）5个亚家族sjTRECs出现频率的差异有统计学意义。结论B-ALL病人胸腺输出大多数Vβ亚家族naive T细胞功能低于正常人。

抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群的胸腺近期输出功能初步探讨

目的观察抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量,从而推测其胸腺近期输出功能。方法利用实时荧光定量PCR方法检测30例抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群及22例正常人PBMCs中TRECs含量。结果抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群中TRECs含量为(5.67±1.55)cop ies/103PBMCs,与正常人TRECs水平(6.11±2.11)cop ies/103PB-MCs无差异(P>0.05)。结论抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群TRECs水平情况显示其胸腺近期输出功能与正常人比较无差异。

造血干细胞移植患者动态监测胸腺输出功能的意义

目的观察造血干细胞移植患者胸腺近期输出功能的动态变化情况,分析其相关影响因素,从而了解移植后T细胞免疫重建情况。方法选择2007年1月~2012年6月于北京大学深圳医院接受造血干细胞移植的血液病患者41例,采用实时荧光定量PCR方法检测患者不同时期200μL外周血中T细胞受体重排DNA删除环（sjTREC）水平,计算每毫升血液中sjTREC拷贝数。同时检测32例年龄匹配的正常者外周血T细胞受体重排DNA删除环含量作为正常对照。比较患者造血干细胞移植后sjTREC随时间变化情况。结果 32例正常对照组外周血Log sjTREC/mL为3.78±0.22,它与年龄呈负相关（r=-0.59,P〈0.05）。41例移植患者移植前外周血sjTREC水平显著低于正常对照组,移植后外周血sjTREC进一步下降,移植6个月后TRECs逐渐升高,移植后1.5年基本恢复至移植前水平,移植后2.5年恢复至接近正常水平。反复化疗可使患者胸腺输出功能下降。不同年龄组患者移植后胸腺输出功能恢复差异无统计学意义（P〉0.05）。移植6个月后,自体造血干细胞移植组患者外周血sjTREC水平恢复快于异基因移植组（P〈0.05）,至移植后2年二者差异无统计学意义（P〉0.05）。移植1年后存在广泛型cGVHD的患者其外周血sjTREC水平下降,低于无cGVHD者（P〈0.05）。结论造血干细胞移植后T细胞免疫重建缓慢,并受多种因素影响。胸腺输出功能可作为评价移植后免疫重建的有效指标。

实时荧光定量PCR分析慢性丙型肝炎患者胸腺近期输出功能

目的观察慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量,从而推测CHC患者的胸腺近期输出功能,并且比较TRECs含量与HCV载量的关系。方法利用实时荧光定量PCR方法检测22例CHC患者及16例正常人PBMCs中TRECs含量,用RT-PCR方法结合荧光探针的检测技术检测CHC组外周血血清中的HCVRNA。结果CHC患者中TRECs含量为(5.52±1.87)copies/103PBMCs,低于正常人TRECs水平(7.19±2.42)copies/103PBMCs,P<0.05;TRECs含量与HCV载量直线相关分析r=-0.427,P<0.05。结论CHC患者TRECs水平低于正常人,显示其胸腺近期输出功能明显降低,且与HCV载量呈负相关性。

原发性血小板减少性紫癜患者胸腺近期输出功能状态

目的:了解原发性血小板减少性紫癜(ITP)患者胸腺近期输出功能的状态,评价其T细胞潜能。方法:采用实时定量PCR(TaqM an)方法检测15例ITP患者外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量,17例正常人作为对照。结果:正常人外周血中每1 000个PBMCs中TRECs拷贝数为(3.76±3.42),ITP患者TRECs水平变化较大[每1000个PBMCs中TRECs拷贝数为(2.60±2.99)],4例病人未能检测到TRECs,病人平均TRECs水平与正常人的差异没有显著性(P>0.05),女性病人TRECs水平略高于男性(P=0.499),但无统计学意义。结论:多数ITP患者外周血初始T细胞水平和胸腺近期输出功能保持正常水平。

定量检测T细胞受体重排删除DNA环含量评价急性非淋巴细胞白血病患者胸腺近期输出功能

目的检测急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者T细胞受体重排删除DNA环(signaljoint T-cell receptor exc ision DNA c irc les sjTRECs,TRECs)的含量,从而探讨患者的初始型naive T细胞水平和胸腺近期输出功能特点。方法利用实时定量PCR(TaqM an)方法,检测77例ANLL患者外周血单个核细胞(PBMC)TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平。14例ANLL缓解期患者和14例正常人外周血作为对照。结果ANLL患者外周血中TRECs含量为(0.43±0.92)拷贝/1 000 PBMCs,(2.02±3.25)拷贝/1 000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平[(4.10±3.65)拷贝/1 000 PBMCs和(6.84±4.71)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0001]和缓解期患者[(2.19±2.49)拷贝/1 000 PBMCs和(6.30±7.13)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0005]。各亚型ANLL患者的TREC水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论绝大多数ANLL型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,缓解期患者的胸腺近期输出功能有一定程度恢复。

弥漫大B细胞淋巴瘤患者胸腺近期输出功能动态监测的临床意义

目的观察弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者不同治疗阶段胸腺近期输出naiveT细胞的动态变化，评估其与疾病预后的关系以及化疗对免疫重建潜能的影响。方法利用实时定量PCR（TaqMan）方法分别检测30例DLBCL患者不同治疗阶段外周血单个核细胞（PBMNC）中T细胞受体重排删除DNA环（TREC）的水平（以每1000个PBMNC中的含量表示），并根据外周血中CD3细胞阳性率计算CD3＋T细胞中TREC水平。以12名年龄相匹配的正常人作为对照。结果与正常人外周血中的TREC水平相比，不同基因亚型DLBCL患者外周血中的TREC水平均明显低下，生发中心B细胞样（GCB）型患者组的TREC水平高于非生发中心B细胞样（non—GCB）型患者组。化疗前GCB型患者组PBMNC和CD3＋T细胞中的TREC水平分别为0．91±0．15和1．22±0．69，而non-GCB型患者组分别为0．43±O．29和0．64±0．44。治疗前的TREC水平与患者的国际预后指数（IPI）评分明显相关（r=-0．441，P=0．015）。化疗后的TREC水平进一步降低，治疗6个周期后最低，GCB型患者组PBMNC和CD3＋T细胞中的TREC水平分别为0．63±0．34和0．89±0．65，而non—GCB型患者组分别为0．19±0．11和0．27±0．25。大多数患者化疗结束后3个月TREC水平上升较为明显。5例患者化疗后6个月的TREC水平已接近正常。结论DLBCL患者的胸腺近期输出功能严重受损，化疗前的胸腺近期输出功能与疾病的预后有重要关系，化疗影响患者的T细胞免疫功能重建潜能。

急性早幼粒细胞白血病患者胸腺近期输出功能情况

目的了解急性早幼粒细胞白血病(APL)患者T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量,从而了解患者胸腺近期输出na觙veT细胞的水平。方法利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测9例APL患者和14例正常人外周血单个核细胞(PBMC)TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平。结果正常人TRECs拷贝数为(4.10±3.65)/1000PBMC和(6.36±5.28)/1000CD+3细胞,APL患者TRECs拷贝数为(0.13±0.22)/1000PBMC和(0.77±1.60)/1000CD+3细胞,与正常人相比均有显著性差异(P=0.0004,P=0.0005)。结论率先报道了APL患者胸腺近期输出na觙veT细胞功能明显降低的情况。

尿毒症维持性血液透析近期胸腺输出功能变化研究

目的评估尿毒症维持性血液透析(MHD)患者近期胸腺输出nave T细胞的情况。方法对郑州大学附属肿瘤医院2010年10月至2011年10月收治的15例MHD患者利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测其透析前后外周血单个核细胞中T细胞受体删除DNA环(TRECs)的含量,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3+T细胞中TRECs水平。以10例年龄相匹配的正常人外周血作为对照。结果与正常人外周血中TRECs拷贝数相比,15例MHD者首次透析前的TRECs均显著低下,分别为(0.48±0.39)拷贝/1000 PBMCs和(1.03±0.57)拷贝/1000CD3+T细胞(P值分别为0.0014和0.0067)。而透析2～6个月后外周血中的TRECs值差异较大,平均为(0.41±0.36)拷贝/1000 PBMCs和(1.33±1.46)拷贝/1000 CD3+T细胞(P值分别为0.0008和0.019),仍明显低于正常水平,与首次透析前的水平相比,差异无统计学意义。结论 MHD患者首次透析前及透析2～6个月后胸腺近期输出nave T细胞功能均明显低下,胸腺近期输出功能低下是导致细胞免疫功能缺陷的根本原因之一。

胸腺近期输出功能与移植后T细胞免疫重建

造血干细胞移植的成功,有赖于T细胞免疫的重建。T细胞受体重排删除环(TRECs)是目前较可靠的反映胸腺近期输出功能的检测指标。定量检测TRECs水平可判断胸腺近期输出功能,评价移植后T细胞免疫重建情况。