乙肝疫苗无、弱应答与B7-CD28及IL-12、IL-10的相关性

目的 研究乙肝疫苗无、弱应答与B7 CD2 8分子及IL 1 2、IL 1 0的相关性。方法 分离并培养乙肝疫苗强应答和无、弱应答者PBMCs ,以PHA或rHBsAg刺激。用流式细胞术检测培养细胞CD80、CD86及CD2 8的表达 ;酶标法检测上清IL 1 2、IL 1 0的水平 ;MTT法检测细胞增殖反应。结果 rHBsAg刺激后 ,无、弱应答组与强应答组比较 ,CD80和CD86的表达率、IL 1 2和IL 1 0水平、细胞增殖反应均降低 ,差异显著 ;但CD4+、CD8+细胞CD2 8的表达率无显著差异。PHA刺激后 ,上述指标在2组之间均无显著差异。结论 乙肝疫苗无、弱应答者一般的细胞免疫功能正常。抗 HBs低下与CD80、CD86表达及IL 1 2、IL 1 0产生不足等有关 ,但无T细胞CD2

LONG-TERM IMMUNOGENICITY AND EFFICACY OF RECOMBINANT YEAST DERIVED HEPATITIS B VACCINE FOR INTERRUPTION OF MOTHER-INFANT TRANSMISSION OF HEPATITIS B VIRUS

Recombinant DNA Yeast-Derived Hepatitis B Vaccine (RYHB vaccine) is comparable to and can replace Plasma-Derived Hepatitis B Vaccine (PHB vaccine) for the prevention of mother-nfant transmission of hepatitis B virus (HBV), but the duration of immune efficacy of RYHB vaccine is not clear. This study indicates the long-term efficacy for the prevention of mother-infant transmission of HBV. One hundred and six neonates born to HBsAg-arrier mothers with HBeAg positive were randomly divided into two groups, one receiving 20 μg per dose of RYHB vaccine and the another receiving 20 μg per dose of PHB vaccine on the day of birth, at 1 month and at 6 months (three times). Physical examination and blood tests were performed for all infants at 6, 12, 24, 36, 48 and 60 months of age. The results showed that the protective efficacies at 6, 12, 24, 36, 48 and 60 months were 67%, 75%, 63%, 62%, 57% and 56%, respectively for the RYHB vaccine group and 58%, 76%, 51%, 41%, 24% and 18%, respectively for the PHB vaccine group. The protective efficacy was notably significant in the last two years. The study indicates that the duration of protective efficacy is over 5 years with RYHB vaccine, being longer than that of PHB vaccine. These recipients of RYHB vaccine showed no side effects, and the vaccine is regarded as safe and effective.

表达EB病毒主要膜蛋白gp350/220的非复制型重组痘苗病毒的构建

利用非复制痘苗病毒质粒载体 pNEOCK11β75及 pNEOCK ,改造了表达EB病毒主要膜蛋白 gp35 0 /2 2 0的复制型重组痘苗病毒VMA ,构建了非复制型重组痘苗病毒VMAΔCK。该病毒能在鸡胚原代成纤维细胞 (CEF)中正常繁殖 ,而在人源细胞中不能正常繁殖。在CEF中连续传代至第 2 5代 ,经PCR证明 ,该病毒符合非复制型重组痘苗病毒的特征。经免疫荧光及免疫酶斑法证实 ,VMAΔCK可稳定表达gp35 0 /2 2 0 ,且表达水平与VMA无明显差异。VMAΔCK经腹腔免疫Balb/C小鼠 ,4周后能诱生一定水平的抗 gp35 0 /2 2 0特异性抗体 ,加强免疫 2周后该抗体水平明显升高。这一结果类似于VMA免疫Balb/C小鼠的结果。初免后 ,VMAΔCK免疫组抗痘苗抗体水平明显低于VMA免疫组 ;加强免疫 2周后 ,两组小鼠的抗痘苗抗体水平趋于一致。上述结果证明 ,所构建的非复制痘苗病毒不影响目的抗原的表达 ,也不影响该抗原的免疫原性 ,但导致病毒毒力下降 ,而且用该病毒免疫小鼠后小鼠抗痘苗病毒载体的免疫反应明显下降。

HBsAg免疫刺激复合物型疫苗制备

目的制备中国仓鼠卵巢细胞（CHO）细胞表达的重组乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的免疫刺激复合物型（ISCOMs）疫苗。方法采用离心法和透析法制备了HBsAg的免疫刺激复合物。结果电镜下观察ISCOMs直径为30-40nm左右的蜂窝状结构。十二烷基磺酸钠电泳（SDS-PAGE）分析表明，离心法和透析法制备的颗粒的HBsAg蛋白均由P23、GP27和GP30组成。Bradfords法测定离心法和透析法制备的ISCOMs的蛋白回收率分别为31．50％和41．15％。结论HBsAg免疫刺激复合物型的成功制备为ISCOMs型乙型肝炎疫苗的研制打下了基础。

rHB-DTaP联合疫苗中抗-HBs抗体应答

在乙肝、白喉、破伤风、无细胞百日咳（ｒＨＢ－ＤＴａＰ）四联疫苗的研制过程中，我们采用基因工程乙肝疫苗（ＣＨＯ），精制白喉、破伤风类毒素和无细胞百日咳菌苗原液，按不同的稀释液，不同的加入顺序以及不同的含量等制备四联疫苗，并以单价基因工程乙肝疫苗（ｒＨＢ）做对照，进行小鼠试验，接种４周后采血检测抗－ＨＢｓ水平。结果表明，不同配方的四联疫苗中ｒＨＢ与ＤＴａＰ均无干扰，相容性好；抗－ＨＢｓ免疫应答水平与单价苗（ｒＨＢ）无显著性差异（Ｐ＞０．０５），使用生理盐水制备的ｒＨＢ－ＤＴａＰ其抗－ＨＢｓ免疫应答水平较醋酸盐缓冲液者高（Ｐ＜０．０５），ｒＨＢ－ＤＴａＰ中的抗－ＨＢｓ免疫应答水平与ｒＨＢ原液的加入顺序无关（Ｐ＞０．０５）；ｒＨＢ含量以２０μｇ／ｍｌ为宜。

国产与进口乙肝基因疫苗阻断HBV母婴传播效果研究

目的 对国产和进口CHO乙肝基因工程疫苗阻断HBV母婴传播效果进行研究。方法 分别用长春生物制品研究所和法国巴斯德公司生产的 2 0ug/剂CHO乙肝基因工程疫苗 ,对HBsAg和HBeAg阳性母亲的健康新生儿进行免疫 ,并定期随访检测其血清HBsAg和抗 -HBs情况 ,了解阻断HBV母婴传播效果。各组观察时间≥ 9个月者分别为 33例和 2 4例。结果 免疫保护率分别为 79 2 %和 5 1 7% (P <0 0 5 ) ;T9抗 -HBs阳转率最高 ,分别为 81 0 %和 6 8 4%(P >0 0 5 ) ;T12 抗体水平达高峰分别为 2 0 8 5和 379 3mIU (P <0 0 5 )。结论 国产CHO乙肝基因工程疫苗具有良好的保护性 ,阻断HBV母婴传播的效果较进口疫苗好 ;

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合乙肝疫苗对宫内感染HBV携带儿童治疗机制初探

目的从细胞因子水平初步探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM?CSF)联合乙肝疫苗对宫内HBV感染携带儿童的疗效机制。方法采用ELISA和半定量逆转录?聚合酶链反应(RT?PCR),对12例GM?CSF联合乙肝疫苗治疗后儿童、6例乙肝免疫球蛋白(HBIG)联合乙肝疫苗治疗后儿童及9例未治疗的宫内感染儿童外周血单个核细胞在PHA+LPS、HBsAg及无刺激物时γ?干扰素、白细胞介素(IL)?4分泌及mRNA表达水平进行检测。结果与对照组比较,GM?CSF联合乙肝疫苗治疗儿童γ?干扰素自发分泌显著增加(P=0.017),HBIG联合乙肝疫苗治疗儿童IL?4mRNA转录显著降低(P=0.002)。结论GM?CSF联合乙肝疫苗治疗宫内感染HBV慢性携带儿童时HBV受抑制可能与γ?干扰素产生增多有关,HBIG联合乙肝疫苗治疗时IL?4转录受抑不影响HBV复制,提示慢性HBV感染治疗应以增强Th1应答为主。

重组乙肝疫苗联合干扰素对慢性乙型肝炎患者抗HBV及改善肝功能的临床研究

目的通过重组乙肝疫苗联合干扰素抗HBV研究,探讨其治疗乙型肝炎的可行性及作用机制。方法两组慢性乙型肝炎患者均常规给予保肝降酶药物,联合组每周3次肌注IFNα2b3MU,另加重组乙肝疫苗20μg每月1次三角肌处肌注,疗程为6个月。对照组只单独肌注IFNα2b,分别观察其抗HBV及改善肝功能情况。结果联合组抗HBV及改善肝功能效果与对照组比较有显著差异。结论重组乙肝疫苗联合干扰素抗HBV显示出良好的治疗前景。

进口乙肝基因工程疫苗阻断HBV母婴传播的研究

分别对日本(10μg/剂)、美国Merk (5μg/剂) 生产的酵母乙肝基因工程疫苗和法国(20μg/剂) 生产的地鼠卵巢细胞乙肝基因工程疫苗阻断HBV 母婴传播效果进行研究,各组观察时间≥9个月者分别为62、18 例和24 例。其免疫保护率分别为89.2% 、93.8% 、53.7% ;T9 和T12抗-HBs阳转率及抗体水平达高峰,分别为87.5% 、88.2% 、68.4% 和213.7m IU、173.4m IU、379.3m IU,结果显示进口酵母乙肝基因疫苗阻断HBV母婴传播效果较CHO苗好;

抗肿瘤和乙肝双效IL18-HBVS基因疫苗的构建

目的]探讨IL_18及乙肝病毒S基因(HBVS)的联合功效。[方法]从胎肝组织中抽提总RNA ,RT-PCR扩增IL-18cDNA基因。从载体 pcDNA3.0/S中限制性酶切获取HBVS基因 ,然后 ,将其与IL -18cDNA一并亚克隆到真核表达质粒 pIRES-EGFP中。[结果]构建了具有抗肿瘤及乙肝双重功效的IL18_HBVS乙肝基因疫苗。

培养基组分和发酵温度对重组酵母表达HBsAg的影响

分析酵母基因工程菌生产目的基因表达产物——乙型肝炎表面抗原的发酵过程,降低培养基中葡萄糖浓度,补充甘油和蔗糖,能使乙型肝炎表面抗原相对浓度从3.89提高至8.12,比活值增加2.69倍。根据实验观察的结果,造成发酵过程的温度序列,能合理地分配受体细胞代谢能量的消耗,使目的基因的表达量提高至13.51相对浓度。同时,对流加式操作系统中表现出的重组质粒稳定性的变化规律给予描述和解释。另外,提出了异源DNA与受体细胞的转化过程存在着一个分布,此分布对通过发酵提高乙型肝炎表面抗原的产量造成影响。

电脉冲介导的治疗性双质粒HBV DNA疫苗的临床安全性及免疫原性研究

目的观察电脉冲(EP)介导的治疗性双质粒HBV DNA疫苗的安全性及免疫原性。方法将30名健康志愿者随机分为低(1mg)、中(2mg)、高(4mg)三个剂量组(n=10)。于0、4、12、24周肌注联合EP导入治疗性双质粒HBVDNA疫苗。每个剂量组随机再分成两组(n=5),分别使用两种不同输出电压(36V和60V)导入DNA疫苗。观察受试者HBVDNA疫苗给药前后生命体征,物理学诊断指标(心电图、胸透、B超),实验室检查指标(血、尿常规、血液生化、凝血酶原时间、甲状腺功能、肿瘤标记物),免疫学检测指标[干扰素γ(IFN-γ)、抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体]、HBV血清标记物(HBsAg、HBcAb、HBeAg、HBeAb、HBV DNA)及抗HBs等的变化。结果所有志愿者接受疫苗后,耐受性良好、生命体征平稳,个别受试者出现一过性体检指标升高或轻度异常,怀疑与用药有关,但均能自行缓解或恢复;抗HBs在大剂量36V组中有升高趋势,其中1例受试者给药后达17.22mU/ml。结论 EP介导的治疗性双质粒HBVDNA疫苗在低、中、高三个剂量组中均显示较好的耐受性和安全性,且在大剂量组中具有一定的体液免疫原性。

HBIG联合国产、进口重组乙型肝炎疫苗阻断乙型肝炎母婴传播的效果观察

目的了解乙肝免疫球旦白(HBIG)分别联合相同剂量国产、进口重组(酵母)乙肝疫苗阻断乙肝病毒(HBV)母婴传播的效果。方法用HBIG分别联合国产、进口乙肝疫苗10μg/0.5mL免疫乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒膜抗原(HBeAg)双阳性或只有HBsAg阳性母亲的新生儿共130例,采用0、1、6个月接种程序,测定乙肝病毒表面抗体(抗-HBS)滴度及HBsAg。结果国产组新生儿HBsAg阳性率为1.49%,保护率为98.14%;进口组新生儿HBsAg阳性率4.76%,保护率为94.05%。两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HBIG联合国产、进口10μg乙型肝炎重组(酵母)疫苗阻断乙肝母婴传播的效果同样良好。

不同剂量CHO重组乙肝疫苗免疫效果及联合HBIG阻断母婴传播效果研究

目的 为探讨不同剂量CHO重组乙肝疫苗免疫效果及其联合HBIG阻断母婴传播的效果。 方法 采用血清流行病学的方法对CHO重组乙肝疫苗的免疫效果及联合HBIG阻断母婴传播效果进行追踪调查。 结果 乙肝疫苗不同免疫方案对HBsAg阴性产妇的新生儿产生抗 -HBs滴度 (GMT)的差异无显蓍的统计学意义 ;CHO重组乙肝疫苗2 0 μg -2 0 μg -2 0 μg组与其首针同时联合臀部肌肉注射HBIg 10 0IU组对产妇HBsAg、HBeAg单、双阳性的新生儿的母婴传播阻断率的差异有显著的统计学意义 (P <0 .0 5 )。 结论 CHO重组乙肝疫苗能产生较好的免疫效果 ,对HBsAg阴性产妇的新生儿采用CHO重组乙肝疫苗 2 0 μg -10 μg -10 μg进行免疫更为经济有效 ;CHO重组乙肝疫苗 2 0 μg -2 0μg -2 0 μg且首针同时联合臀部肌肉注射HBIg 10 0IU组阻断母婴乙肝传播效果优于单独使用CHO重组乙肝疫苗 2 0 μg-2 0 μg -2 0 μg组。

HBsAg生化性状对乙型肝炎疫苗效力影响的研究

比较研究了重组酵母表达HBsAg的P2 4亚基间二硫键结合及其还原条件下降解程度对乙型肝炎疫苗效力的影响。分别用HPLC及SDS PAGE法检测重组酵母乙型肝炎疫苗HBsAg的P2 4亚基在还原条件下降解和P2 4亚基间二硫键桥联程度 ,并检测乙型肝炎疫苗小鼠体内效力 (ED50 值 )和体外相对效力 (RP) ,分析HBsAg的P2 4亚基间二硫键结合及其还原条件下降解程度对乙型肝炎疫苗效力的影响。结果表明HBsAgP2 4亚基还原条件下降解成分Sub P2 4的相对含量在 5 .2 %～ 31%间、P2 4亚基间二硫键桥联型HBsAg颗粒相对含量在 41.9%～ 71.8%范围内与疫苗的实验室效力无关。所生产重组酵母乙型肝炎疫苗HBsAg的P2

晚孕妇双重免疫阻断HBV宫内传播的临床观察

目的 :探讨阻断乙型肝炎病毒 (hepatisBVirus,HBV)宫内传播的有效途径。方法 :将乙型肝炎孕妇 1 0 0例为A组于孕 2 8W、32W、36W、4 0W分别给予肌肉注射乙型肝炎免疫球蛋白 (hepatitisBimmuneglobulin ,HBIG) 1 0 0IU及皮下注射重组酵母乙型肝炎疫苗 1 0 μg ,另乙型肝炎孕妇 1 0 0例为B组未行任何干预措施。两组新生儿出生时即取脐血查乙型肝炎病毒标志物 ,观察新生儿窒息率及出生体重。结果 :A组新生儿HBsAg携带率显著低于B组 (P<0 .0 1 ) ;其抗 -HBs阳性率显著高于B组 (P <0 .0 1 ) ;A组新生儿大三阳率显著低于B组 (P <0 .0 1 ) ;两组新生儿窒息率及出生体重无统计学意义。结论 :晚孕妇联合注射HBIG及乙肝疫苗能有效降低HBV的宫内传播 ,对新生儿无影响。

口服重组酵母(ApoB100肽段)对小鼠产生特异性抗体的诱导作用

【目的】开发一种针对低密度脂蛋白成分ApoB100的新型重组酵母疫苗,为动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的防治提供一种思路。【方法】利用PCR得到包含编码ApoB100的3 136-3 155位氨基酸残基的目的片段,将其克隆到酵母表达载体JMB88-HA-OVA-MCS上,构建JMB88-HA-OVA-hApoB载体,用硫酸铜诱导表达后获得HA-OVA-hApoB融合蛋白。采用口服的方法对昆明小白鼠免疫成功表达HA-OVA-hApoB蛋白的酵母细胞12周,每周1次,每次1×108个酵母细胞,免疫结束后4周采血,用Western blot检测小鼠是否产生特异性抗体。【结果】PCR扩增获得了859bp的人ApoB100基因。成功构建了JMB88-HA-OVA-hApoB载体。口服免疫12周后,HA-OVA-hApoB免疫组小鼠的血清中含有特异性ApoB100抗体。【结论】灌服表达人ApoB100肽段融合蛋白的重组酿酒酵母能诱导小鼠的免疫反应,使其产生特异性抗体。

重组体人α-2b干扰素联合乙型肝炎疫苗、左旋咪唑涂布剂治疗慢性乙型肝炎

目的:探讨重组体人α-2b干扰素联合乙型肝炎疫苗、左旋咪唑涂布剂治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法:176例慢性乙型肝炎患者随机分为两组:A组和B组,每组88例。A组采用大剂量重组体人α-2b干扰素和左旋咪唑涂布剂、乙型肝炎疫苗联合治疗;B组采用重组体人α-2b干扰素治疗。两组疗程均为24周。结果:A组的食欲不振、腹胀改善均明显优于B组(P均<0.01);A组治疗结束时、治疗后6个月ALT正常率、HBeAg阴转率及HBV DNA阴转率均明显优于B组(P均<0.05)。结论:重组体人α-2b干扰素和左旋咪唑涂布剂、乙型肝炎疫苗联合治疗慢性乙型肝炎,其疗效持久,效果良好,值得临床应用。

APS作为重组(CHO细胞)乙型肝炎疫苗佐剂的安全性及免疫效果

目的 探讨黄芪多糖（APS）作为重组（CHO细胞）乙肝疫苗免疫佐剂的可行性。方法APS与重组（CHO细胞）乙肝病毒表面抗原（HBsAg）混合制成疫苗,进行了动物毒性试验、过敏试验及效力试验。结果 该佐剂毒性轻微,无过敏反应,同一剂量组动物血清抗-HBs阳转率高于Al（OH）3对照组。结论APS是一种很有潜力的疫苗佐剂。

两种重组乙型肝炎疫苗免疫儿童后的抗体应答和免疫持久性

目的比较5μg/剂重组乙型肝炎疫苗(酵母)和10μg/剂重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)免疫儿童后的抗体应答和免疫持久性。方法1151和996名6￣12岁儿童分别按0,1,6月免疫程序接种14批酵母疫苗和5批CHO疫苗,于第1针免后3(T3)、7(T7)、12(T12)、24(T24)、36(T36)、60(T60)月检测抗-HBs应答,分别对接种10批酵母、5批CHO,4批酵母、4批CHO,2批酵母和2批CHO疫苗的儿童进行首针免疫后T24、T36和T60的随访,采用放免法(RIA)检测抗-HBs水平。结果首针免疫后12个月内,接种两种疫苗的儿童抗体阳转率和抗体滴度差异均无显著意义;T24、T36时,接种CHO疫苗的儿童抗体阳转率显著高于酵母疫苗。结论应提高酵母疫苗免疫儿童现用剂量。