HPLC测定重组Exendin-4-FC融合蛋白注射液中抗氧剂及其降解物

目的 建立HPLC对重组Exendin-4-FC融合蛋白注射液中11种抗氧剂及其降解物含量测定方法。方法 采用饱和硫酸铵沉淀蛋白,离心后上清液转移至经甲醇活化后的C_(18)固相萃取小柱中,分别用4 mL甲醇、5 mL乙酸乙酯依次洗脱小柱,洗脱液用甲醇-乙酸乙酯(2∶3)混合溶剂定容后过0.22μm PTFE疏水滤膜,经HPLC分析,外标法定量。色谱条件:Kinetex■ XB-C_(18) 100A(100 mm×4.6 mm,2.6μm)色谱柱,检测波长230 nm,柱温箱30℃,进样量5μL,流速0.4 mL·min^(–1),流动相0.1%甲酸-甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B),运行时间45 min。结果 11种目标物在2.5~35μg·mL^(–1)内线性关系良好(R~2≥0.99)。在25,10,5μg·mL^(–1) 3个浓度水平下,平均加样回收率为88.1%~106.5%,RSD为0.10%~9.05%。6份样品重复性RSD为2.01%~4.77%,12份样品中间精密度RSD为2.58%~9.75%,对3批次重组Exendin-4-FC融合蛋白注射液的0月,25℃加速3月及6月正/倒置样品进行检测,结果显示所有批次样品在不同检测点均未有抗氧剂及其降解物浸出。结论 该方法专属性好、准确度与精密度高、溶液稳定性好、方法耐用性高,能够用于对药品中抗氧剂类物质的含量检测。