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肥大细胞对重组口蹄疫病毒VP1-VP4蛋白的模式识别效应 被引量:2
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作者 李丽敏 王燕 +4 位作者 崔贝贝 林敏 张磊 左玉柱 王家鑫 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1644-1649,共6页
为研究肥大细胞对重组口蹄疫病毒VP1-VP4蛋白的模式识别作用,将VP1-VP4蛋白负载经TLR2/TLR4抑制剂、甘露糖受体抑制剂或清道夫受体抑制剂预处理的小鼠肥大细胞系P815,在不同时间点观察其脱颗粒现象,并用ELISA检测细胞上清液中TNF-α的... 为研究肥大细胞对重组口蹄疫病毒VP1-VP4蛋白的模式识别作用,将VP1-VP4蛋白负载经TLR2/TLR4抑制剂、甘露糖受体抑制剂或清道夫受体抑制剂预处理的小鼠肥大细胞系P815,在不同时间点观察其脱颗粒现象,并用ELISA检测细胞上清液中TNF-α的含量。结果显示,清道夫受体抑制剂处理组在负载VP1-VP4蛋白15和30min时P815细胞脱颗粒数目均极显著低于重组VP1-VP4蛋白组(P<0.001)。在负载VP1-VP4蛋白24h时,各抑制剂处理组的TNF-α含量均极显著低于VP1-VP4蛋白组(P<0.001),其中以甘露糖受体抑制剂处理组含量最低。这表明小鼠肥大细胞系P815主要通过清道夫受体识别FMDV VP1-VP4并引起脱颗粒现象的发生,而甘露糖受体和TLR2/TLR4识别FMDV VP1-VP4则是引起P815细胞分泌TNF-α的主要模式识别机制,其中以甘露糖受体的作用最强。 展开更多
关键词 肥大细胞 模式识别受体 重组口蹄疫病毒vp1-vp4 脱颗粒 Α-肿瘤坏死因子
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血清4型禽腺病毒Fiber-1蛋白截短表达及多克隆抗体制备
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作者 罗昕雨 赵磊 +5 位作者 陈玉晴 缪欣怡 石家鑫 顾有方 李文超 刘欣超 《安徽科技学院学报》 2024年第2期25-30,共6页
目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,... 目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,截取具有较高免疫原性的片段,设计合成特异性引物,以CH/AHMC/2015分离株基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得截短Fiber-1(sFiber-1)基因片段,将其连接至原核表达载体pET-32a,验证后转化至大肠杆菌BL21感受态中,诱导表达sFiber-1蛋白。纯化后的蛋白与佐剂乳化后免疫SD大鼠,制备多克隆抗体,并测定多克隆抗体效价。用Western-blot检测抗体免疫原性。结果:成功构建了sFiber-1的原核表达载体,获得FAdV-4的sFiber-1重组蛋白,经SDS-PAGE鉴定,重组sFiber-1蛋白大小约为52 kDa,主要以包涵体形式表达;间接ELISA法测得sFiber-1多克隆抗体效价为1∶2^(13);Western blot结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别出重组sFiber-1蛋白。结论:本研究成功表达了FAdV-4的重组sFiber-1蛋白,制备了具有较高免疫活性的sFiber-1多克隆抗体,可为FAdV-4的检测及诊断奠定基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 Fiber-1基因 重组蛋白 多克隆抗体
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清道夫受体在树突状细胞提呈口蹄疫病毒VP1-VP4抗原中的作用
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作者 高云欢 李娜 +3 位作者 董昌海 唐然肖 李丽敏 王家鑫 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期129-135,共7页
为研究清道夫受体在树突状细胞提呈口蹄疫病毒VP-VP4融合蛋白中的作用,构建了pET一32a-VP1-VP4原核表达系统,以此获得VP1-VP4融合蛋白。制备骨髓源树突状细胞(BMDCs)和淋巴结T细胞,首先用清道夫受体抑制剂poly(I)处理.BMDCs,然后再将VPl... 为研究清道夫受体在树突状细胞提呈口蹄疫病毒VP-VP4融合蛋白中的作用,构建了pET一32a-VP1-VP4原核表达系统,以此获得VP1-VP4融合蛋白。制备骨髓源树突状细胞(BMDCs)和淋巴结T细胞,首先用清道夫受体抑制剂poly(I)处理.BMDCs,然后再将VPl-VP4.融合蛋白负载经poly(I)处理后的BMDCs,并与淋巴结T细胞共培养,收集不同时间点的共培养上清液,用ELISA检测其中IFN-γ含量。结果显示,经poly(I)处理的试验组在每个时间点产生的IFN-γ含量均明显高于对照组,且差异极显著(P<0.01)。表明清道夫受体可识别口蹄疫病毒VPl-VP4融合蛋白,并在BMDCs提呈VPl-VP4抗原的过程中发挥负调节作用。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp1-vp4融合蛋白 树突状细胞 抗原提呈 T细胞
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引起细胞病变的甲肝病毒BJ-1株结构蛋白VP4-VP2基因序列的测定 被引量:1
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作者 洪世雯 沈宏辉 鞠连才 《传染病信息》 2000年第2期63-64,共2页
目的测定我室分离的甲型肝炎病毒(HAV)BJ-1株结构蛋白VP4-VP2基因区的核苷酸序列。方法从BJ-1感染的A549细胞中提取病毒RNA模板,通过RT-PCR扩增相应的cDNA片段,测定其核苷酸序列。结果BJ-1株与野型株MBB比较,VP4-VP2区有4个核苷酸变异,... 目的测定我室分离的甲型肝炎病毒(HAV)BJ-1株结构蛋白VP4-VP2基因区的核苷酸序列。方法从BJ-1感染的A549细胞中提取病毒RNA模板,通过RT-PCR扩增相应的cDNA片段,测定其核苷酸序列。结果BJ-1株与野型株MBB比较,VP4-VP2区有4个核苷酸变异,同源性为99.5%(731/735),推论的氨基酸序列有1个氨基酸变异,同源性为99.6%(244/245)。与HM-175比较,有30个核苷酸变异,同源性为95.9%(705/735),推论的氨基酸序列均相同,同源性为100%。结论核苷酸序列分析结果初步确定BJ-1株属甲型肝炎病毒。 展开更多
关键词 甲型肝炎 HAV-BJ-1 vp4-vp2基因 序列分析
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冰岛硫化叶菌β-1,4-内切葡聚糖酶的同源表达、纯化与性质 被引量:3
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作者 朱泾 赵述淼 +1 位作者 彭楠 梁运祥 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期674-679,共6页
利用PCR技术从冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)REY15A中分别扩增得到带有和不带有信号肽编码序列的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(S.islandicus eng),将其克隆至硫化叶菌表达载体pZC2中,构建重组表达载体pZC2-eng-YS和pZC2-eng-WS,并转... 利用PCR技术从冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)REY15A中分别扩增得到带有和不带有信号肽编码序列的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(S.islandicus eng),将其克隆至硫化叶菌表达载体pZC2中,构建重组表达载体pZC2-eng-YS和pZC2-eng-WS,并转化至S.islandicus E233S(△pyrEF△lacS)。重组菌株经D-阿拉伯糖诱导后,细胞破碎上清经镍离子金属鳌合亲和层析介质(Ni-NTA)柱纯化,得到重组蛋白。SDS-PAGE结果表明:不带有信号肽的葡聚糖酶(ENG-W)分子质量为41ku,带有信号肽的分子质量(ENG-SP)为43ku;酶学性质分析表明前者没有酶活性,后者酶活力为103.4U/L,最适反应温度为90℃,最适pH为4.0。耐热性试验结果表明:在90℃保温60min后酶活力稳定在最高酶活力的40%以上。金属离子试验结果表明:Mn2+对重组酶促进作用最大,使其酶活力提高了约50%,Ca2+对其抑制作用最强,使其酶活力下降了约50%。 展开更多
关键词 冰岛硫化叶菌 Β-1 4-内切葡聚糖酶 同源表达 硫化叶菌表达载体pZC2 重组蛋白
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卡培他滨维持治疗对胃癌术后复发转移患者血清PTX-3、TTF-1、HE4水平的影响及临床意义 被引量:3
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作者 徐丛聪 彭宗玉 +1 位作者 于瀚宇 李海鹰 《癌症进展》 2018年第13期1616-1619,共4页
目的探讨卡培他滨维持治疗对胃癌术后复发转移患者的临床疗效及对患者血清人重组穿透素-3(PTX-3)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)、人附睾蛋白4(HE4)水平的影响。方法回顾性分析86例胃癌术后复发转移患者的临床资料,根据治疗方法的不同将患... 目的探讨卡培他滨维持治疗对胃癌术后复发转移患者的临床疗效及对患者血清人重组穿透素-3(PTX-3)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)、人附睾蛋白4(HE4)水平的影响。方法回顾性分析86例胃癌术后复发转移患者的临床资料,根据治疗方法的不同将患者分为观察组和对照组,每组43例。对照组患者接受常规治疗,观察组患者接受常规治疗联合卡培他滨维持治疗。比较两组患者的近期临床疗效、不良反应发生情况、PTX-3、TTF-1及HE4水平的变化情况。结果治疗后,观察组患者的总有效率为81.4%(35/43),明显高于对照组的41.9%(18/43)(P<0.01)。观察组患者的临床疗效明显优于对照组患者(P<0.01)。治疗前,两组患者的血清PTX-3、TTF-1、HE4水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,观察组患者的PTX-3、TTF-1、HE4水平均明显低于对照组患者(P<0.01);治疗后,两组患者的血清PTX-3、TTF-1、HE4水平均较本组治疗前降低(P<0.05)。治疗后,两组患者的白细胞减少、浅静脉炎、肾功能不全、神经毒性的发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论与常规治疗相比,卡培他滨维持治疗可有效降低胃癌术后复发转移患者的血清PTX-3、TTF-1及HE4水平,临床疗效更好。 展开更多
关键词 卡培他滨 胃癌 重组人穿透素-3 甲状腺转录因子-1 人附睾蛋白4
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The Development and Application of an Indirect ELISA Test for the Detection of Chicken Anaemia Virus (CAV) by VP1 in Chicken Flock Serum
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作者 Elham O. Mahgoub 《Open Journal of Genetics》 2014年第4期316-331,共16页
Chicken anaemia virus (CAV) causes a viral disease in chickens worldwide and thus has economic importance. The main aim of this study was to develop a rapid, sensitive and specific VP1-CAVI indirect ELISA for the dete... Chicken anaemia virus (CAV) causes a viral disease in chickens worldwide and thus has economic importance. The main aim of this study was to develop a rapid, sensitive and specific VP1-CAVI indirect ELISA for the detection of CAV infection. The CAV-VP1, was separately cloned and expressed in recombinant E. coli. The purified recombinant CAV-VP1 protein was then coated as an antigen on an ELISA plates to evaluate its reactivity against chicken sera. The resulting indirect ELISA was then compared with a commercial ELISA. The specificity and sensitivity of the indirect ELISA were measured as 93.3% and 100%, respectively. A t-test produced a t-value of 15.805 for the indirect ELISA and revealed a significant difference between CAV-positive serum and CAV-negative serum (p-value of 0.001). For the second variable (i.e., a commercial ELISA), the t-test yielded a t-value of 5.063, which revealed a significant difference between CAV-positive serum and CAV-negative serum (p-value of 0.015). This intervention produces statistically significant improvements in both variables (p-values < 0.05). The correlation coefficient for the indirect ELISA was r = 0.93. Therefore, this work can be considered as a new achievement in diagnosis for Chicken anaemia virus in chicken flocks. 展开更多
关键词 Indirect ELISA Commercial ELISA CHICKEN ANAEMIA Virus recombinant protein vp1 Sensitivity Specificity Standard Curve for Indirect ELISA
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炎症因子和TOLL样受体4重组蛋白及内皮缩血管肽-1在冠状动脉性心脏病患者中的表达与经皮冠状动脉介入治疗术后支架内再狭窄的相关性分析
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作者 王改 刘莎 《当代医学》 2022年第32期65-67,共3页
目的探讨炎症因子、TOLL样受体4重组蛋白(TLR4)及内皮缩血管肽-1(ET-1)在冠状动脉性心脏病患者中的表达与经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后支架内再狭窄的相关性。方法回顾性分析2019年5月至2020年5月于本院行PCI术的48例冠状动脉性心脏... 目的探讨炎症因子、TOLL样受体4重组蛋白(TLR4)及内皮缩血管肽-1(ET-1)在冠状动脉性心脏病患者中的表达与经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后支架内再狭窄的相关性。方法回顾性分析2019年5月至2020年5月于本院行PCI术的48例冠状动脉性心脏病患者的临床资料,根据术后是否出现支架内再狭窄(ISR)分为ISR组(n=20)和非ISR组(n=28),比较两组血清白细胞介素-18(IL-18)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、ET-1及TLR4表达水平,采用多元logistic线性回归分析上述指标在冠状动脉性心脏病患者中的表达与PCI术后支架内再狭窄的相关性。结果治疗6个月后,非ISR组血清IL-18、hs-CRP、ET-1及TLR4表达水平均低于ISR组,差异有统计学意义(P<0.05);多元Logistic线性回归分析结果显示,hs-CRP、TLR4均为ISR的独立影响因素(P<0.05)。结论PCI术后联合检测hs-CRP、TLR4水平对冠状动脉性心脏病患者PCI术后发生ISR具有一定的预测价值。 展开更多
关键词 白细胞介素-18 超敏C反应蛋白 内皮缩血管肽-1 TOLL样受体4重组蛋白 经皮冠状动脉介入治疗 冠状动脉性心脏病 支架内再狭窄
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2021年南京市手足口病流行特征及柯萨奇A组4型VP1区基因特征分析
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作者 董晓庆 王雅倩 +2 位作者 石利民 董潇潇 乔梦凯 《热带医学杂志》 CAS 2023年第11期1635-1640,共6页
目的了解南京市手足口病(HFMD)流行特征,分析柯萨奇病毒A组(CVA)4型基因特征。方法收集2021年来自南京市12个区的监测样本,使用实时荧光定量PCR方法检测肠道病毒并分型,对排除CVA6、16、10型和肠道病毒(EV)71型阳性的其他未分型肠道病毒... 目的了解南京市手足口病(HFMD)流行特征,分析柯萨奇病毒A组(CVA)4型基因特征。方法收集2021年来自南京市12个区的监测样本,使用实时荧光定量PCR方法检测肠道病毒并分型,对排除CVA6、16、10型和肠道病毒(EV)71型阳性的其他未分型肠道病毒,用反转录·聚合酶链反应(RT-PCR)的方法扩增VP4-VP2区,双向测序确定基因型,最后巢式扩增CVA4型的VP1区,确定其基因亚型。结果2021年南京市手足口病呈季节性流行,不同月份之间的肠道病毒阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=80.06,P<0.05)。易感人群为3~<6岁儿童,该年龄段阳性数占总阳性数的57.05%(178/312)。不同年龄段之间的肠道病毒阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=73.70,P<0.05)。地区分布中,肠道病毒阳性率占前三位的依次是玄武区94.74%(18/19)、浦口区94.00%(47/50)和江北新区83.33%(65/78),不同地区肠道病毒阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=177.42,P<0.05)。550份标本中,荧光定量PCR法检测肠道病毒阳性312份,主要型别为CVA6型,占总阳性数的83.01%(259/312),其次依次为CVA16型(21份)和CVA10型(5份),未分型肠道病毒27份。经VP4-VP2区测序得到CVA4型6份,对其VP1区扩增测序后获得目的片段。结论南京市2021年手足口病主要型别以CVA6型为主,与其他毒株(CVA16型、CVA4型、CVA10型等)共同循环流行;其中CVA4型毒株均属于C2亚型,未发现新的亚型,需持续监测。 展开更多
关键词 手足口病 柯萨奇病毒A组4 vp4-vp2区基因 vp1区基因
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负载口蹄疫病毒VP1-VP4融合蛋白质的树突状细胞对T细胞的活化效应 被引量:4
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作者 李娜 李丽敏 +3 位作者 安鹏丽 高云欢 董昌海 王家鑫 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期818-822,共5页
为研究负载口蹄疫病毒VP1-VP4融合蛋白质的树突状细胞对淋巴结T细胞的活化效应,通过构建pET32a-VP1-VP4原核表达系统制备VP1-VP4融合蛋白。将纯化VP1-VP4融合蛋白负载骨髓源树突状细胞(BMDC)后与淋巴结T细胞共培养,用ELISA检测不同时间... 为研究负载口蹄疫病毒VP1-VP4融合蛋白质的树突状细胞对淋巴结T细胞的活化效应,通过构建pET32a-VP1-VP4原核表达系统制备VP1-VP4融合蛋白。将纯化VP1-VP4融合蛋白负载骨髓源树突状细胞(BMDC)后与淋巴结T细胞共培养,用ELISA检测不同时间点的共培养上清液中IFN-γ的含量。结果表明,负载FMDVVP1-VP4融合蛋白后的BMDC可通过溶酶体-MHC-Ⅱ类分子途径有效地激活淋巴结T细胞,从而启动Th1细胞免疫应答,分泌大量IFN-γ。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp1-vp4融合蛋白质 原核表达 树突状细胞 T细胞
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MORF4L1蛋白抗体制备及生物信息学分析
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作者 丁圆圆 陈泽锋 +5 位作者 邱腾 施雯 任德续 王伟玲 吉敬 刘彬 《生物技术》 CAS 2024年第1期20-26,75,共8页
[目的]构建MORF4L1原核表达载体和纯化表达产物,制备MORF4L1蛋白抗体并进行生物信息学分析。[方法]利用PCR将MORF4L1基因片段酶切、克隆、转化至大肠杆菌Bl21(DE3),经IPTG诱导表达蛋白。利用His-Tag技术纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫新... [目的]构建MORF4L1原核表达载体和纯化表达产物,制备MORF4L1蛋白抗体并进行生物信息学分析。[方法]利用PCR将MORF4L1基因片段酶切、克隆、转化至大肠杆菌Bl21(DE3),经IPTG诱导表达蛋白。利用His-Tag技术纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫新西兰白兔,采集抗血清后通过硫酸铵沉淀法将多克隆抗体从抗血清中纯化,应用Western Blotting验证多克隆抗体与内外源性MORF4L1蛋白的结合特异性。利用在线软件(GEPIA、UALCAN)进行生物信息学分析。[结果]成功构建了重组蛋白,蛋白纯化后在相对分子质量(Mr)43000位置处有单一条带,重组His-MORF4L1蛋白与His抗体发生特异性结合。制备的抗血清与MORF4L1蛋白特异性结合,纯化后仅在相对分子质量(Mr)55000和25000位置处有条带。纯化的多克隆抗体与内外源性MORF4L1蛋白发生特异性反应。MORF4L1的表达与肝癌不良预后相关。[结论]成功构建MORF4L1蛋白及抗体,MORF4L1在肝癌中高表达预后差,对进一步研究MORF4L1蛋白的结构和生物学功能具有重要意义。 展开更多
关键词 致死因子4样蛋白1(MORF4L1) 载体构建 重组蛋白 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 抗体制备 生物信息学分析
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A型清道夫受体在口蹄疫病毒VP1-VP4蛋白诱导小鼠免疫应答中的作用 被引量:1
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作者 董昌海 李红芳 +4 位作者 刘元杰 王丹 高云欢 李丽敏 王家鑫 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1888-1892,共5页
为研究A型清道夫受体(SR-A)在重组口蹄疫病毒(FMDV)VP1-VP4蛋白诱导小鼠产生抗免疫应答中的作用,通过构建Pet32a-VP1-VP4原核表达系统制备VP1-VP4蛋白,用纯化的VP1-VP4蛋白分别免疫预先注射SR-A抑制剂的BALB/c小鼠和未作处理的BALB/c小... 为研究A型清道夫受体(SR-A)在重组口蹄疫病毒(FMDV)VP1-VP4蛋白诱导小鼠产生抗免疫应答中的作用,通过构建Pet32a-VP1-VP4原核表达系统制备VP1-VP4蛋白,用纯化的VP1-VP4蛋白分别免疫预先注射SR-A抑制剂的BALB/c小鼠和未作处理的BALB/c小鼠,用ELISA检测免疫7d后小鼠血清中IFN-γ和IL-4的含量,用琼脂扩散法测血清的抗体效价,用ELISA检测血清抗体亚类的含量。结果发现,经SR-A抑制剂处理的小鼠血清IFN-γ含量和IL-4含量均降低,血清总抗体效价也降低,但血清IgA水平显著升高,这表明SR-A在识别VP1-VP4蛋白进而启动免疫应答的过程中发挥广泛的调节作用。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 A型清道夫受体 重组vp1-vp4蛋白 免疫应答
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刚地弓形虫重组蛋白表面抗原1与4诱导小鼠免疫保护性的比较研究 被引量:3
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作者 梁凯 李艳文 +6 位作者 王贝贝 傅晓茵 刘晓泉 何姗姗 唐莉莉 刘登宇 石焕焕 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期155-160,共6页
目的比较刚地弓形虫重组蛋白表面抗原1 (rSAG1)与rSAG4单独及联合诱导昆明小鼠的免疫保护性作用,为研制复合型疫苗分子提供参考。方法以弓形虫RH株基因组DNA为模板, PCR扩增SAG1和SAG4,构建重组质粒pET-28a (+)-SAG1和pET-28a (+)-SAG4... 目的比较刚地弓形虫重组蛋白表面抗原1 (rSAG1)与rSAG4单独及联合诱导昆明小鼠的免疫保护性作用,为研制复合型疫苗分子提供参考。方法以弓形虫RH株基因组DNA为模板, PCR扩增SAG1和SAG4,构建重组质粒pET-28a (+)-SAG1和pET-28a (+)-SAG4;经双酶切和测序鉴定后,将序列正确的重组质粒转入BL21 (DE3)中,挑选阳性菌落,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌体,超声裂菌。在变性条件下经镍离子亲合层析柱纯化目的蛋白,采用透析逐步降低尿素浓度的方法进行目的蛋白复性; 125只昆明小鼠按照随机数字表法分为5组,每组25只,分别为r SAG1免疫组、 rSAG4免疫组、 rSAG1+rSAG4联合免疫组、PBS对照组、 PBS+佐剂对照组,首次免疫为重组蛋白100μg/鼠,与等体积完全弗氏佐剂充分乳化后进行皮下多点注射,间隔2周加强免疫1次,连续2次,加强免疫时重组蛋白为50μg/鼠,与等体积弗氏不完全佐剂乳化,对照组小鼠注射等量PBS。各组小鼠于免疫前(0周)及首次免疫后第2、 4、 6周断尾取血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清特异性抗体IgG。在首次免疫后第6周,每只小鼠经腹腔注射3 000个弓形虫RH株速殖子进行攻击感染,观察小鼠生存时间,采用SPSS 16.0软件进行统计学分析。结果弓形虫RH株SAG1和SAG4基因经PCR扩增后,目的片段大小分别为780和438 bp,与理论大小一致;重组质粒pET-28a (+)-SAG1和pET-28a (+)-SAG4经双酶切和测序鉴定后,特异片段长度与SAG1和SAG4理论大小780和438 bp一致,测序结果显示,重组基因与目的基因序列完全一致; rSAG1、 rSAG4相对分子质量(Mr)为28 970、 17 720,与理论值一致,经纯化和复性后获得较纯的可溶性蛋白; rSAG1免疫组小鼠血清特异抗体IgG吸光度(A450值)为1.821±0.184,明显高于rSAG4免疫组(0.695±0.089)(P <0.05),但低于rSAG1+rSAG4联合免疫组(1.955±0.097)(P <0.05)。PBS组和PBS+佐剂组分别为0.019±0.002、 0.020±0.004, rSAG1、 rSAG4和rSAG1+r SAG4联合免疫组均高于两对照组(P <0.05);经弓形虫速殖子攻击感染后,对照组小鼠均在224 h内全部死亡, rSAG1、 rSAG4免疫组及联合免疫组分别在296、 288及320 h内全部死亡,各免疫组与各对照组之间、 rSAG4免疫组与联合免疫组之间生存时间差异有统计学意义(P <0.05)。结论 rSAG1、 rSAG4和rSAG1+rSAG4均能诱导小鼠产生抗弓形虫感染的免疫保护作用,明显延长实验小鼠的存活时间,联合免疫保护效果要略优于单抗原免疫。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 弓形虫重组蛋白表面抗原1 弓形虫重组蛋白表面抗原4 重组蛋白 联合免疫
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柯萨奇病毒A组4型生物化学特性及免疫原性分析
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作者 田宇璇 魏真妮 +2 位作者 安欢欢 吴杰 申硕 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期581-590,共10页
对引起手足口病的肠道病毒A组4型进行生物化学特性及免疫原性的研究。利用大肠杆菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋白,纯化CV-A4病毒颗粒,制备兔抗CV-A4 VP1~VP4蛋白及抗CV-A4病毒颗粒抗血清。以免疫印迹法(Western blotting,WB)... 对引起手足口病的肠道病毒A组4型进行生物化学特性及免疫原性的研究。利用大肠杆菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋白,纯化CV-A4病毒颗粒,制备兔抗CV-A4 VP1~VP4蛋白及抗CV-A4病毒颗粒抗血清。以免疫印迹法(Western blotting,WB),结合SDS-PAGE电泳法,对CsCl密度梯度纯化的CV-A4的空心颗粒(EP)与实心颗粒(FP)的蛋白组分、纯度、多聚蛋白酶剪切进行分析。以微量中和法测定以上6种抗原免疫的兔或小鼠血清中和抗体效价,评估免疫原性。WB和间接免疫荧光法证明了抗体特异性。EP由VP0、VP1和VP3构成,而FP的VP0被剪切,故由VP1-VP4构成。EP和FP比例分别为41%和59%。CsCl密度分别为1.26 g/cm^(3)和1.34 g/cm^(3),纯度分别为70.5%和96.3%。中和试验显示,兔抗全病毒抗体具有中和作用,而兔抗CV-A4VP1~VP4结构蛋白抗体不具有中和作用。免疫原性强弱为:FP>EP>VP1-VP4。本研究建立了CV-A4纯化病毒结构蛋白的分析方法,研究了重组病毒蛋白及2种病毒颗粒的免疫原性及免疫持久性。对包括CV-A4的手足口病多价疫苗的研发策略以及质量控制具重要意义。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组4型(CV-A4) 结构蛋白vp1-vp4 空心颗粒与实心颗粒 免疫原性
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一种真核细胞分泌型重组融合蛋白rPC的构建、表达与纯化
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作者 李春春 谢雨琼 +1 位作者 曹江 邵吉民 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期969-978,共10页
抑制性免疫检查点PD-1或CTLA-4靶向治疗药物已用于肿瘤的临床治疗,但单一靶点药物会有耐药发生,联合使用同时封闭多个靶点可提高疗效,因此拟构建一个可封闭多个靶点的新型重组蛋白。首先设计并合成了一个由人类PD-1和CTLA-4两个受体的... 抑制性免疫检查点PD-1或CTLA-4靶向治疗药物已用于肿瘤的临床治疗,但单一靶点药物会有耐药发生,联合使用同时封闭多个靶点可提高疗效,因此拟构建一个可封闭多个靶点的新型重组蛋白。首先设计并合成了一个由人类PD-1和CTLA-4两个受体的胞外功能域组成并且C端带6´His标签的分泌型重组融合蛋白rPC编码序列,插入真核细胞表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1,稳定转染HEK293细胞,收集细胞培养上清,以亲和方法纯化重组蛋白rPC,通过实时荧光定量PCR检测多个人类肿瘤细胞系中PD-1配体PD-L1、PD-L2和CTLA-4配体CD80、CD86的表达,以选择相对高表达的细胞,利用细胞免疫荧光染色方法检验rPC与肿瘤细胞的结合能力,并用CCK-8法检测rPC是否对肿瘤细胞的生长有影响。结果表明,重组融合蛋白rPC可由稳定转染表达载体的HEK293细胞表达并分泌,纯化后的rPC可以与PD-1和CTLA-4配体表达相对较高的肺癌细胞NCI-H226结合,并且rPC处理对其生长并无直接影响,与预期一致。成功获得的重组融合蛋白rPC可用于进一步的体内外功能研究,也为今后研发新型多靶点肿瘤免疫治疗蛋白药物打下了坚实的基础。 展开更多
关键词 重组融合蛋白 PD-1 CTLA-4 免疫检查点
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柯萨奇病毒A组2型生物化学特性及免疫原性分析
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作者 杨志辉 胡岗 +2 位作者 吕诗韵 吴杰 申硕 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1089-1098,共10页
柯萨奇病毒A组2型(Coxsackievirus A2,CV-A2)每年引起的手足口病病例数不断增加,甚至导致死亡病例[1]。因此,急需对CV-A2的生化特性及免疫原性进行分析,顺利研制出CV-A2的手足口病疫苗。通过细菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋... 柯萨奇病毒A组2型(Coxsackievirus A2,CV-A2)每年引起的手足口病病例数不断增加,甚至导致死亡病例[1]。因此,急需对CV-A2的生化特性及免疫原性进行分析,顺利研制出CV-A2的手足口病疫苗。通过细菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋白,纯化CV-A2病毒颗粒;将纯化的病毒颗粒免疫动物后制备兔抗CVA2 VP1-VP4抗体及CV-A2病毒抗血清,通过免疫印染法(Western Blot,WB)、SDS-PAGE电泳法对CsCl密度梯度纯化的CV-A2的空心颗粒(EP)与实心颗粒(FP)的蛋白组分、纯度、多聚蛋白酶剪切进行分析。WB和间接免疫荧光法证明了抗体具有良好的特异性。EP由VP0、VP1、VP3构成,而FP的VP0被剪切,故由VP1-VP4构成。EP和FP比例为33%和67%,密度分别为.29、1.32 g/cm3,纯度分别为94.7%和97.3%。中和试验结果显示,兔抗全病毒抗体具有中和作用,而兔抗CV-A2 VP1-VP4抗体不具有中和作用。本研究建立了CV-A2纯化病毒结构蛋白的分析方法,研究了重组病毒蛋白及病毒颗粒的免疫原性及持久性,对包括CV-A2的手足口病多价疫苗研究质量控制提供数据支持。 展开更多
关键词 CV-A2 结构蛋白vp1-vp4 空心颗粒与实心颗粒 免疫原性和持久性
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