重组人促卵泡激素(rhFSH)肽图分析方法研究

目的建立重组人促卵泡激素(rh-FSH)的标准肽图分析方法。方法通过超滤、透析、冷冻干燥法富集制备rh-FSH对照品。通过尿素变性、二硫苏糖醇(DTT)还原、碘乙酸酰基化制备供试品溶液。采用N型-糖苷酶F(PNGaseF)酶解去除rh-FSH糖侧链,经SDS-PAGE验证切糖结果后,用胰蛋白酶水解,酶解所得肽段通过RP-HPLC分析,得到rh-FSH肽图。结果利用国外原研厂rh-FSH制剂富集制备的rh-FSH结构完整,可用作rh-FSH肽图分析的对照品。国产样品的肽图谱与对照品一致。结论建立的肽图分析方法可作rh-FSH产品的结构确证。

重组人生长激素辅助治疗对高龄不孕IVF⁃ET患者血清FSH、E_(2)及LH水平的影响

目的探讨在实施体外受精⁃胚胎移植(IVF⁃ET)治疗过程中使用重组人生长激素(rhGH)辅助治疗对高龄不孕症女性患者血清卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E_(2))及促黄体生成素(LH)水平的影响。方法回顾性选取2021年1月至2023年8月邯郸市中心医院收治的高龄不孕女性102例,依据治疗方案分为对照组[予促性腺激素释放激素(GnRH)拮抗剂方案治疗,n=50]、试验组(予GnRH拮抗剂方案+rhGH辅助治疗方案,n=52);比较两组促排卵结果、性激素水平(FSH、E_(2)、LH)、妊娠结局及不良反应情况。结果试验组Gn总用量、Gn使用天数比对照组少,差异有统计学意义(P<0.05);试验组获卵总个数、可移植胚胎数及优质胚胎数比对照组高,但差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后的FSH、E_(2)、LH水平均下降,且试验组治疗后的FSH、E_(2)、LH水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组治疗后取消周期率、流产率低于对照组,临床妊娠率、活产率高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。试验组、对照组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论相较于GnRH拮抗剂方案单独治疗,GnRH拮抗剂+rhGH辅助治疗方案可进一步调节高龄不孕女性FSH、LH、E_(2)水平,提高获卵数、优胚率及临床妊娠率。

DMB衍生-高效液相色谱法测定重组人促卵泡激素中的唾液酸含量

目的建立采用4,5-亚甲二氧基-1,2-苯二胺二盐酸盐(DMB)衍生-高效液相色谱-荧光检测器(HPLCFLD)法(DMB衍生法)同时测定重组人促卵泡激素(rhFSH)中2种唾液酸组分N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)和N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)含量的方法。方法将DMB衍生法与邻苯二胺衍生-高效液相色谱法(邻苯二胺衍生法)进行对比研究,对DMB衍生法中的水解条件进行优化并确定最终方法为rhFSH原液经酸水解后,采用DMB进行衍生,经Agilent ZORBAX 300SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,采用荧光检测器检测。结果与邻苯二胺衍生法相比,DMB衍生法能够实现Neu5Gc与Neu5Ac相关杂质的有效分离。该方法Neu5Gc和Neu5Ac分别在0.5~5.0μg·mL^(-1)(r=0.9999)和25~250μg·mL^(-1)(r=0.9998)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;Neu5Gc和Neu5Ac的检测限分别为11.07、10.30 ng·mL^(-1),定量限分别为33.21、20.60 ng·mL^(-1),两者回收率分别为(99.63±1.33)%(n=9)和(100.62±1.58)%(n=9),RSD分别为1.3%(n=9)和1.5%(n=9)。结论该方法专属性强、灵敏度高、精密度和准确度良好,可用于准确测定rhFSH中唾液酸Neu5Gc和Neu5Ac的含量。

超长方案中不同启动策略对多囊卵巢综合征患者IVF结局的影响

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者行IVF治疗时应用高纯度尿促性素(HP-HMG)联合重组人促卵泡生成素(rFSH)与单用rFSH启动卵巢刺激的临床结局。方法回顾性分析2017年10月至2019年9月在北京协和医院生殖中心行IVF助孕的96例PCOS患者的临床资料。所有患者应用3.75 mg长效GnRH激动剂降调节满意后卵巢刺激,根据启动药物不同将患者分为两组,HP-HMG+rFSH组:HP-HMG联合rFSH启动者49例;rFSH组:单用rFSH启动者47例。比较两组的胚胎发育情况、临床妊娠结局和卵巢过度刺激(OHSS)的发生率。结果rFSH组获卵数为(13.3±6.2)个显著高于HP-HMG+rFSH组(11.0±4.5)个(P<0.05);而HP-HMG+rFSH组的优胚率(13.5%vs.6.3%)和活产率(54.7%vs.32.4%)均显著高于rFSH组(P<0.05);两组间周期取消率和中重度OHSS发生率均无统计学差异(P>0.05)。结论PCOS患者应用超长方案时,HP-HMG联合rFSH启动卵巢刺激可显著提高优质胚胎比率、改善活产率,在降低OHSS风险方面与单用rFSH启动卵巢刺激的疗效相当。

重组人促卵泡激素(rhFSH)制剂的SDS-PAGE/Western blot鉴别方法研究

目的:建立可用于不同剂型重组人促卵泡激素(rhFSH)产品质量控制的特异性SDS-PAGE/Western blot鉴别方法。方法:用SDS-PAGE电泳分离由不同生产企业生产的不同剂型rhFSH产品,通过半干电泳将凝胶上的待测蛋白转移至硝酸纤维素膜(NC膜),采用特异性抗体在NC膜上进行免疫杂交。通过检测灵敏度、线性和专属性试验,进行方法学考察。结果:对rhFSH特异性检测灵敏度可达5ng;对3个厂家生产的3种注射液、1种注射用冻干制剂检测,均可得到阳性结果,且试验结果不受不同剂型中的防腐剂、稳定剂和其他辅料干扰;用本法对等量的其他重组糖蛋白激素如重组人促黄体激素(rhLH)、重组人绒促性素(rhCG)测定结果均为阴性。结论:本方法灵敏度高、专属性强,可作为rhFSH的特异性鉴别方法,用于不同剂型rhFSH产品的质量控制。

柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素中的单糖

目的:建立柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素(rhFSH)中的单糖。方法:采用20%TFA 水解rhFSH,释放单糖,用邻氨基苯甲酸衍生化,采用反相高效液相色谱法测定。色谱柱为 Jupiter C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相 A 为含0.15%正丁胺、0.25%磷酸、0.5%四氢呋喃的水溶液,流动相 B 为流动相 A 与乙腈比例为1:1的溶液,梯度洗脱,流速0.85 mL·min^(-1);柱温30 ℃;荧光检测器:激发波长为230 nm,发射波长为425 nm。结果:葡萄糖胺、半乳糖、甘露糖、岩藻糖进样量分别在0.39～3.94 nmol(r=0.9994),0.29～5.85 nmol(r=0.9998),0.24～4.90 nmol(r=0.9998),0.05～1.03nmol(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好的线性关系。平均加样回收率(n=9)分别为104.1%,104.2%,104.2%,98.0%;RSD 分别为9.3%,1.8%,0.61%,6.0%。结论:该方法灵敏,专属性强,重复性好,可定量测定重组人促卵泡激素中的单糖。

重组人促卵泡激素研究进展

重组人促卵泡激素(rhFSH)是目前人类辅助生殖技术中常用的药物。由于糖基化作用的原因,原核表达系统难以生产出rhFSH。迄今为止,全球仅有两家公司的rhFSH药物上市。rhFSH高表达细胞株的构建、蛋白产量的提高以及糖基化的均一性是目前需要重点解决的问题。本文综述了rhFSH及其突变体的研发现状和未来的发展趋势,为后续的重组卵泡刺激素研究奠定基础。

国产与进口重组人FSH在辅助生殖技术超排卵治疗中的疗效比较

目的本研究旨在比较国产与进口重组人促卵泡激素(recombinant human follicle stimulating,rhFSH)在辅助生殖技术超排卵治疗中的疗效差异。方法回顾分析了2018年1月—12月在首都医科大学附属北京妇产医院生殖科接受控制性超促排卵后行IVF-ET/ICSI治疗的192个周期的临床资料,根据所用药物不同分为国产组(A组,101个周期)和进口组(B组,91个周期),比较两组患者的一般情况、基础激素水平、用药情况、获卵情况和妊娠结局等是否存在差异。结果两组的一般情况、基础激素水平和基础卵泡数均无显著差异(P>0.05)。两组rhFSH人均用药总量、人均用药天数、加用HMG人数比例、人均用HMG总量、天数,HCG日子宫内膜厚度、LH水平均无明显差异(P>0.05);但是进口组获卵数、HCG日E2、P0水平高于国产组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组胚胎种植率、生化妊娠率、临床妊娠率以及流产率均无明显差异(P>0.05);但是,国产组的多胎妊娠率高于进口组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论使用相同剂量的rhFSH进行超排卵治疗,国产组可获得与进口组大致相同的胚胎种植率、生化妊娠率、临床妊娠率以及流产率,在不孕患者的辅助生殖治疗中不失为一种好的选择。

重组人卵泡刺激素的研究进展

综述了重组人卵泡刺激素(rhFSH)的制备和未来发展方向以及我国卵泡刺激素(FSH)产品的发展概况,重点介绍了rhFSH产品(果纳芬和普丽康)的制备技术特点。与传统的尿源卵泡刺激素(uFSH)相比,rhFSH具有纯度高且产品批次均一性好的优点,更重要的是rhFSH在提高安全性、减少治疗副反应等方面具有优势。FSH广泛地用于不孕不育的治疗当中,是用于生殖健康领域的重要药物分子,有着很大的市场发展前景。

重组人促卵泡激素低剂量递增方案联合宫腔内人工授精临床分析

目的:探讨重组人促卵泡激素(rhFSH)低剂量递增方案联合宫腔内人工授精(IUI)临床效果及卵巢反应预测因子。方法:选择多囊卵巢综合征、WHO II型排卵障碍及不明原因不孕患者60例,采用rhFSH(果纳芬)低剂量递增方案促排卵联合IUI,分析妊娠率、多胎妊娠率、卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生率,并对卵巢反应预测因子加以分析。结果:①临床妊娠率28.21%,双胎妊娠率9.09%,流产率18.18%,促排卵过程中发生OHSS(轻度)1例,无三胎及以上妊娠。②促排卵成功患者与卵巢反应不良患者在体质量、体质量指数(BMI)、窦卵泡数(AFC)、rhFSH总剂量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:rhFSH低剂量递增方案可以使排卵障碍特别是对其他促排卵药物抵抗患者获得较好的妊娠结局,促排卵结局可能受患者体质量、BMI、AFC等因素影响。

龙鹿丸联合重组人促卵泡激素治疗多囊卵巢综合征不孕症的临床研究

目的探讨龙鹿丸联合重组人促卵泡激素治多囊卵巢综合征不孕症的临床疗效。方法选择2017年3月-2018年6月在郑州大学第二附属医院妇科门诊进行治疗的80例多囊卵巢综合征不孕症患者,随机分为对照组和治疗组,每组各40例。对照组患者在月经前7 d内皮下注射注射用重组人促卵泡激素,75 U/次,1次/d,用药期间行超声监测,适时调整剂量至卵泡成熟后,给予人绒毛膜促性腺激素(hCG)1万单位诱发排卵,指导患者同房。若有多卵泡发育,则取消扳机和试孕。治疗组在对照组治疗基础上口服龙鹿丸,1 g/次,3次/d。两组均连续治疗3~6个周期。观察两组的临床疗效,比较两组彩超指标、血清学指标、性激素水平的变化情况。比较两组排卵率和妊娠率。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别是80.00%、97.50%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者子宫内膜厚度、优势卵泡数量均较治疗前显著增高,而卵巢体积显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,治疗组子宫内膜厚度、优势卵泡数量显著高于对照组,而卵巢体积显著小于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血清游离脂肪酸(FFA)、干细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)水平均较治疗前显著下降,而性激素结合球蛋白(SHBG)、β-促脂激素C末端31肽(β-EP)水平均显著增高,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,治疗组FFA、HGF、VEGF水平显著低于对照组,而SHBG、β-EP水平高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组孕酮(P)、雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)水平均较治疗前显著增高,而睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,治疗组P、E2、FSH水平显著高于对照组,而T、LH水平低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,对照组排卵率、妊娠率分别是37.5%、12.5%;治疗组排卵率、妊娠率分别是62.5%、32.5%,两组排卵率、妊娠率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论龙鹿丸联合重组人促卵泡激素治疗多囊卵巢综合征不孕症效果显著,可有效改善机体性激素水平,调节机体相关血清学指标水平,促进排卵功能,提高妊娠率,具有一定的临床推广应用价值。

高纯度人绝经期尿促性腺激素与重组卵泡刺激素用于诱导排卵的经济学系统评价

目的:系统评价高纯度人绝经期尿促性腺激素(HP-hMG)和重组卵泡刺激素(γ-FSH)在诱导排卵中的经济学效应。方法:系统检索PubMed、Cochrane library、CNKI及万方等数据库,纳入2013年8月之前HP-hMG与γ-FSH用于诱导排卵的经济学研究,按纳入标准严格筛选文献,提取研究相关数据并进行综合分析。结果:共纳入6项研究,大部分研究在欧洲进行,HP-hMG的持续妊娠率和临床妊娠率与γ-FSH无显著差异,HP-hMG的活产率不劣于γ-FSH。经济学结果显示HPhMG的成本均显著低于γ-FSH。结论:在诱导排卵中,HP-hMG的疗效不劣于γ-FSH,且是一种经济的选择。

长效重组人促卵泡激素主要功效的对比研究

目的：评价并比较生物类似药候选药长效重组人促卵泡激素（rh FSH-CTP）与参照药Elonva的功能差异,即对幼龄大鼠体内主要药效学作用的相似性。方法：生物活性测定按中国药典方法进行;药效学研究以未成年4-5周龄,体重70-90 g的SD雌性大鼠研究其超排卵作用。结果：rhFSH-CTP注射液的生物效价为453 IU·支-1,与参照药Elonva体内活性相当,两者差异很小;其超排卵作用相比于阴性对照组（空白组）卵巢系数、卵子数、组织病理学总评分等指标显著增大（p〈0.05）,大鼠血清激素水平即雌二醇（E2）、黄体激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、孕酮（P）等都有不同程度增加,尤其E2增加显著（p〈0.05）;各指标与Elonva间的差异无显著性意义（p〉0.05）。结论：生物类似药候选药rhFSH-CTP批号20140901的制剂,具有生物活性和促进卵泡发育成熟超排卵的长效作用,与参照品Elonva活性和药效相似。

高纯尿促性素应用于IVF超促排卵的初步研究

目的:探讨高纯尿促性素(HP-h MG)对卵巢储备功能正常患者体外受精-胚胎移植(IVFET)促排卵治疗的效果。方法:回顾性分析本中心卵巢储备功能正常且首次进入周期、进行黄体期Gn RH激动剂长方案助孕治疗患者的临床资料,其中使用HP-h MG促排卵者(HP-h MG组)57例,使用重组卵泡刺激素(r FSH组)140例,比较其促性腺激素(Gn)用量、刺激天数、获卵数、种植率、临床妊娠率、h CG注射日雌、孕激素水平以及因卵巢过度刺激综合征(OHSS)风险周期取消率等。结果:HP-h MG组年龄明显高于r FSH组(29.4±3.2岁vs 28.3±3.0岁,P=0.026),其他基础情况组间相似。HP-h MG组Gn总量和刺激天数高于r FSH组,h CG注射日雌、孕激素水平均低于r FSH组,获卵数低于r FSH组,但可用胚胎率高于r FSH组,因OHSS风险而取消周期率低于r FSH组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HP-h MG组和r FSH组妊娠率分别为65.3%和61.7%,但无统计学差异。结论:相比r FSH促排卵,HP-h MG作用温和,获卵数少,但可用胚胎率高,发生OHSS风险小,临床妊娠率有增高趋势。