冲击波干预成人骨髓间充质干细胞后IGF-Ⅰ和TGF-β1的表达及意义

[目的]在体外成功分离培养骨髓间充质干细胞(hMSCs)和测得理想冲击波(ESW)干预能量的基础上,观察体外冲击波干预后成骨活性因子IGFⅠ和TGFβ1表达,探讨其促进成骨作用。[方法]将5kV、100频次的体外冲击波作用于第1代骨髓间充质干细胞,采用免疫细胞化学法隔代观察(P1P11)胰岛素样生长因子Ⅰ(IGFⅠ)和转化生长因子β1(TGFβ1)的表达,计数阳性率;并进行统计学分析,设定P<0.05为有统计学差异。[结果]ESW干预后的第3代细胞IGFⅠ染色,胞浆及胞核中出现大量黄色棕黄色颗粒,对照组无明显着色;第7代干预组IGFⅠ呈强阳性(87.9%);TGFβ1出现较晚,第9代细胞TGFβ1阳性率为72.2%,随后开始下降;与对照组差异显著(P<0.01)。[结论]ESW干预能够提高hMSCs增殖活性,IGFⅠ和TGFβ1等的不同时期和不同程度表达是体外冲击波促进hMSCs成骨活动的适时信号和有力证据。

白藜芦醇抑制A549人肺腺癌细胞增殖与IGF-ⅠR的关系

目的探讨白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制效应及其与IGF-ⅠR的关系。方法以人肺腺癌A549细胞株为研究对象,采用MTT方法测定细胞增殖,用RT-PCR与免疫印迹方法测定IGF-Ⅰ受体mRNA与蛋白表达水平。结果 2.5～15 nmol/L IGF-Ⅰ可显著促进A549细胞增殖(P<0.05),给予12.5、25.0、50μmol/L白藜芦醇对A549细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.05)。白藜芦醇(6.25～50μmol/L)与10 nmol/L IGF-Ⅰ共作用于A549细胞,均可抑制IGF-Ⅰ的促A549细胞增殖作用,其中尤以25、50μmol/L白藜芦醇的抑制增殖作用显著(P<0.05),白藜芦醇可有效降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达。结论白藜芦醇可通过降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达有效抑制IGF-Ⅰ介导的A549肺癌细胞增殖。

枸杞多糖对人卵巢癌裸鼠IGF-Ⅰ、IGFR、IGFBP-1水平干预作用的研究

目的研究枸杞多糖对人卵巢癌裸鼠IGF-I、IGFR、IGFBP-1水平干预的作用。方法利用卵巢癌细胞SK-OV-3腹腔种植于BABL/c雌性裸鼠建立荷人卵巢癌裸鼠腹腔种植瘤模型,观察其对人卵巢癌裸鼠的干预作用。结果模型组血清中IGF-Ⅰ水平、卵巢组织中IGFBP-1及IGFR水平与空白组差异均有统计学意义(P<0.01),显示造模成功。枸杞多糖能降低肿瘤引起的IGF-Ⅰ水平的升高,与空白组比较无统计学意义(P>0.05),与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);能升高由于肿瘤引起的IGFBP-1表达的下调,与空白组比较无统计学意义(P>0.05),与模型组比较差异有统计学意义,高、中剂量组(P<0.01),低剂量组(P<0.05);能降低肿瘤引起的IGFR水平的升高,与空白组比较无统计学意义(P>0.05),与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论枸杞多糖能降低卵巢肿瘤引起的IGF-Ⅰ、IGFR水平的上升,IGFBP-1水平的下降,对卵巢癌具有一定的抑制作用。

IGF-1/IGFBP-3摩尔比值在矮身材患儿重组人生长激素治疗时的变化研究

目的观察不同病因矮身材患儿用重组人生长激素(rhGH)治疗1年期间IGF-1/IGFBP-3摩尔比值变化,为其评价rhGH治疗效果及安全性提供理论依据。方法研究对象为2017年5月至2022年11月就诊于我院门诊,随访1年且临床资料完整的67例矮身材患儿[小于胎龄儿(SGA)12例、生长激素缺乏症(GHD)18例和特发性矮身材(ISS)37例]。分别于初始治疗(治疗0月),治疗3、6、9、12月,记录3组患儿身高、体重、rhGH治疗相关不良反应事件,同时测定IGF-1水平、IGFBP-3水平,并计算IGF-1/IGFBP-3摩尔比值。同时将我院儿童保健门诊0~13岁正常健康体检儿童(247名)作为对照人群,收集临床资料,测定IGF-1、IGFBP-3水平,计算IGF-1/IGFBP-3摩尔比值。结果矮身材患儿的IGF-1/IGFBP-3摩尔比值与IGF-1水平呈正相关(r=0.843,P<0.001);IGF-1/IGFBP-3摩尔比值SDS与IGF-1SDS水平呈正相关(r=0.773,P<0.001);rhGH治疗1年期间,SGA、GHD及ISS患儿的IGF-1/IGFBP-3摩尔比值与IGF-1水平出现相应变化,且变化趋势相同,说明IGF-1/IGFBP-3摩尔比值也可以是评价矮身材rhGH治疗疗效的一个生物标志物。且当IGF-1水平超过2 SDS时,IGF-1/IGFBP-3摩尔比值相对稳定,未发现不良反应事件,表明IGF-1/IGFBP-3摩尔比值在rhGH治疗安全性评估中具有合理性。结论IGF-1/IGFBP-3摩尔比值是评价矮身材rhGH治疗的一个生物标志物;rhGH治疗期间,IGF-1/IGFBP-3摩尔比值在rhGH疗效和安全性评估中具有一定科学依据。

口腔鳞状细胞癌组织中IGF-Ⅰ的表达

目的探讨IGF-Ⅰ表达与口腔鳞状细胞癌侵袭及转移生物学行为的关系。方法应用免疫组化S-P法检测52例口腔鳞状细胞癌组织中IGF-Ⅰ蛋白的表达。结果IGF-Ⅰ阳性表达率与口腔鳞癌组织学分级和临床分期有关,随病理组织学分级和临床分期增高,其阳性表达率和表达强度均明显增高。结论IGF-Ⅰ蛋白的过表达可能参与了口腔鳞状细胞癌的侵袭过程,有可能作为有价值的标志物,在口腔鳞癌的诊断、治疗、预后判断中起一定作用。

胰岛素样生长因子-Ⅰ对软骨细胞凋亡的抑制

目的:探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对软骨细胞增殖及白细胞介素-1(IL-1)诱导软骨细胞凋亡的影响,揭示其抗损伤作用机制,为关节软骨损伤治疗提供理论依据。方法:分离培养人胚胎关节软骨细胞,采用四氮甲基唑蓝(MTT)法测定不同含量软骨细胞增殖活性的变化,利用光镜、电镜、DNA电泳及流式细胞仪测定作为凋亡检测指标。结果:IGF-Ⅰ呈剂量依赖式促软骨细胞增殖,当IGF-Ⅰ含量达50μg/L时,促软骨细胞增殖作用达最大值。IL-1组光镜、电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳示特征性的DNA梯状条带,IGF-Ⅰ处理组未见明显凋亡征象。流式细胞仪检测发现,IGF-Ⅰ处理后软骨细胞凋亡率显著降低。结论:IGF-Ⅰ能促进软骨细胞增殖,对IL-1诱导的软骨细胞凋亡具有保护作用。

重组人白介素-11(Ⅰ)治疗急性白血病化疗后血小板减少的疗效观察

目的观察重组人白介素-11(Ⅰ)治疗急性白血病化疗后血小板减少的疗效及安全性。方法 68例急性白血病患者强化治疗后出现血小板减少,分为治疗组35例,对照组33例。治疗组使用重组人白介素-11(Ⅰ)治疗,25μg/kg.d皮下注射,直至血小板连续2 d>50×109/L或>100×109/L。对照组不使用任何升血小板药物。结果治疗组血小板减少持续时间缩短,血小板输注量减少,血小板绝对值较对照组高,差异有显著性。主要不良反应为乏力、头痛、肌痛和浮肿。结论重组人白介素-11(Ⅰ)治疗急性白血病化疗后血小板减少疗效显著,且不良反应轻微,值得推广。

重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ工程菌高密度发酵工艺优化

目的优化表达重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)工程菌的高密度发酵条件。方法考察培养基以及诱导时机、诱导剂量和诱导时间对蛋白表达的影响;用自控发酵罐进行分批补料培养实验,确定优化工艺条件。结果以2×YT+0.5%葡萄糖为发酵培养基,经0.8 mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导5 h,通过pH-stat反馈补料方式实现工程菌高密度发酵与目的蛋白高效表达,每1 L发酵液收获干菌体50.1 g,IGF-Ⅰ含量达5.25 g/L。结论建立了IGF-Ⅰ工程菌优化的高密度发酵工艺,为IGF-Ⅰ的下游纯化和工业化生产奠定了基础。

重组人酸性成纤维细胞生长因子Ⅰ期临床研究

目的:确定人体对重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)的耐受性程度并研究其在人体的药动学特性。方法:将36例深Ⅱ°烧伤患者随机分为5组,分别在创面滴注不同剂量的rhaFGF(25,50,100,200和300 U.cm-2),qd,直至创面愈合,或用至21 d。比较各组创面愈合时间和愈合率,定期测定体温、脉搏、血压、呼吸及血尿常规、肝肾功能。并用ELISA方法测定血清rhaFGF的浓度。结果:除4例发生局部疼痛外,各剂量组均未见明显不良反应;该药很少经表皮创面吸收进入血液,各剂量组在用药后不同时间点均未能在血清中测到rhaFGF;各剂量组创面愈合时间以100 U.cm-2剂量组最短。结论:rhaFGF按剂量25,50,100,200和300 U.cm-2用于烧伤患者是安全的,以100 U.cm-2剂量组创面愈合所需时间最短。推荐Ⅱ期临床试验中使用剂量为100 U.cm-2。

重组人肝再生增强因子可抑制肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达

在培养的肝星状细胞系中加入不同浓度的重组人肝再生增强因子 (hALR) ,于不同的时间点收集细胞 ,提取总RNA ,用逆转录定量PCR方法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平。结果表明 ,高 ( 0 2ng/L)、中( 0 0 2ng/L)、低 ( 0 0 0 2ng/L)浓度的hALR 3组肝星状细胞Ⅰ型胶原基因表达水平在 8、2 4、48、72h 4个时间点均明显低于对照组 ;大剂量组较中、低剂量组Ⅰ型胶原基因表达水平亦明显为低。中、低剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在 2 4、48、72h 3个时间点明显低于对照组 ;大剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在 8、2 4、48、72h 4个时间点均明显低于对照组 ,较中、小剂量组亦显著降低。提示重组人肝再生增强因子对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达有明显的抑制作用。

重组人内皮抑素腺病毒注射液Ⅰ期临床耐受性试验

背景与目的:血管生成抑制剂在抗肿瘤新生血管生成方面显示出良好的临床应用前景,已有多个I期临床试验研究人内皮抑素重组蛋白的安全性和抗瘤活性。本试验目的是确定携带人内皮抑素基因的重组腺病毒注射液(Ad-Es)的最大耐受剂量,并推荐Ⅱ期临床试验的用量和用法。方法:设预试验组1例,1×1010病毒颗粒,单次瘤内注射。普通试验组遵循以一个自然对数级的1/2的方式递增,共14例,分三个剂量组:1×1011、5×1011、1×1012病毒颗粒/次,瘤内注射,每周1次,连续2周。结果:未观察到剂量限制性毒性,各受试者均显示出良好的耐受性。主要的不良事件为:局部反应和发热。其他不良反应有轻微的肝功能异常和流感样症状,如头痛、肌痛、乏力等。1例鼻咽癌放疗后鼻咽复发并颏下淋巴结转移的患者病情好转,12例病情稳定,2例出现进展。结论:人体对Ad-Es耐受性良好,晚期肿瘤患者使用1×1012病毒颗粒/次,瘤内注射,每周1次,连续2周,初步观察到Ad-Es的抗瘤活性。推荐Ⅱ期临床给药剂量为1.0×1012病毒颗粒/次,每周1次,连续4周。

bFGF增强rhBMP-2诱导成骨中Ⅰ、Ⅱ型胶原及碱性磷酸酶的表达

目的 :对bFGF增强rhBMP 2诱导成骨中CollagenⅠ、Ⅱ及碱性磷酸酶 (ALP)的表达进行研究。方法 :110只BALB/c小鼠随机分为 2组 ,每组 5 5只 ,rhBMP 2 /bFGF为实验组 ,rhBMP 2为对照组 ,分别于术后 3～ 2 1d 8个时间点取材 ,用免疫组化法对新生骨组织中的Ⅰ、Ⅱ型胶原进行检测 ;对ALP活性进行定量分析 ,观察 2组在诱导成骨中CollagenⅠ、Ⅱ及ALP的表达情况。结果 :( 1)Ⅱ型胶原和成软骨、软骨细胞的出现相伴随 ,但肥大、变性的软骨细胞并不表达Ⅱ型胶原。 ( 2 )作为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原 ,ALP在软骨形成期即有表达 ,但随着成骨细胞的出现 ,骨组织的形成Ⅰ型胶原表现为高表达 ,而ALP的表达则呈下降趋势。 ( 3)实验组CollagenⅠ、Ⅱ及ALP的表达早于对照组。结论 :bFGF增强了rhBMP 2诱导成骨中CollagenⅠ。

重组人白细胞介素-2与宫颈环形电切术治疗宫颈上皮内瘤样病变Ⅰ合并人乳头瘤病毒感染的疗效对比

目的比较重组人白细胞介素-2(rh IL-2)与宫颈环形电切术(LEEP)治疗宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅰ合并人乳头瘤病毒(HPV)感染的疗效。方法合并HPV感染的CINⅠ患者227例,其中应用期待方法 25例(A组),行LEEP治疗69例(B组),应用rh IL-2治疗65例(C组),LEEP联合rh IL-2治疗68例(D组)。分别于治疗前及治疗4个月对各组患者进行HPV定量检测及阴道镜活检。结果治疗后4个月,D组的HPV总转阴率、低载量或高载量HPV转阴率最高(P<0.05),而A组最低(P<0.05),但B组与C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。B组、D组的宫颈病变治愈率高于其他两组,A组的治愈率低于其他3组(P<0.05),但B组与D组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于合并HPV感染的CINⅠ患者,LEEP联合rh IL-2治疗的治疗效果最佳;在治疗宫颈病变方面,LEEP效果优于rh IL-2,但在治疗HPV感染方面,两种方案疗效相当。

TGF-β增强rhBMP-2诱导成骨中Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA及碱性磷酸酶的表达

目的 :对TGF β增强rhBMP 2诱导成骨中CollagenⅠ、ⅡmRNA及碱性磷酸酶 (ALP)的表达进行研究。方法 :BALB/c小鼠 110只随机分 2组 ,每组 5 5只。rhBMP 2 /TGF β为实验组 ,rhBMP 2为对照组 ,于术后 3～2 1d 8个时间点取材 ,用原位杂交方法对新生骨组织中的Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA进行检测 ;对ALP活性进行定量分析 ,观察 2组在诱导成骨中CollageⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达情况。结果 :(1)Ⅱ型胶原mRNA的出现是和成软骨、软骨细胞的出现相伴随的 ;(2 )做为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原mRNA、ALP在软骨形成期即有表达 ,随着成骨细胞的出现 ,骨组织的形成Ⅰ型胶原mRNA仍表现为高表达 ,而ALP的表达则呈下降趋势 ;(3 )实验组CollagenⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达早于对照组。结论 :TGF β增强了rhBMP 2诱导成骨中CollagenⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达。

rhBMP-2在体内诱导成骨中Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA及碱性磷酸酶的表达

目的 :研究rhBMP 2在体内诱导成骨中CollagenⅠ、ⅡmRNA及碱性磷酸酶 (ALP)的表达。方法 :将含rhBMP 2 0 .5mg的松质骨载体植入BALB/c小鼠的右股部肌袋内 ,于术后 3～ 2 1d间 8个时间点取材 ,用原位杂交法对新生骨组织中的Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA进行检测 ;定量分析ALP活性 ,观察rhBMP 2在诱导成骨中CollagenⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达。结果 :( 1)Ⅱ型胶原mRNA的出现是和成软骨、软骨细胞的出现相伴随。肥大、变性的软骨细胞并不表达Ⅱ型胶原mRNA。 ( 2 )作为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原mRNA、ALP在软骨形成期即有表达 ,随着成骨细胞的出现 ,骨组织的形成 ,Ⅰ型胶原mRNA仍表现为高表达 ,而ALP的表达则呈下降趋势。结论 :在体内诱导成骨中rhBMP 2促进了CollagenⅠ。

生长激素雌激素对去势大鼠剩余牙槽骨内IGF-I表达的影响

目的观察生长激素、雌激素及两者联合运用对切除卵巢大鼠剩余牙槽骨内胰岛素样生长因子分布和表达的影响。方法通过去除SD大鼠双侧卵巢,拔除单侧上颌磨牙,建立骨质疏松的剩余牙槽骨动物模型,并在此基础上通过免疫组化方法观察、分析切除卵巢及单独和联合运用生长激素、雌激素对去势大鼠剩余牙槽骨内胰岛素样生长因子分布和表达的影响。结果骨质疏松组局部牙槽骨内的IGF-I表达最弱,雌激素、生长激素以及两者联合运用都能通过增加IGF-I在骨组织局部的表达量提高成骨的活性,检验有统计学意义(P<0.05)。生长激素及联合用药的效果优于单独运用雌激素,联合用药组提高IGF-I表达的效果略高于单用生长激素组,但无统计学意义(P>0.05)。结论雌激素、生长激素及两药联合运用能通过增加IGF-I表达延缓牙槽骨吸收。

注射用重组人甲状旁腺素(1-34)的Ⅰ期临床耐受性研究

目的:评价中国健康志愿者皮下注射重组人甲状旁腺素(1-34)的安全性和耐受性。方法:将40例18～40岁的健康受试者随机分为10,20和40μg 3个剂量组,腹部皮下注射,观察临床症状体征并严密观察记录试验期间发生的不良反应事件。结果:各组受试者体检及实验室检查各项指标均在正常范围,具较好的可比性。给药后生命体征和实验室检查均未见有临床意义的改变,试验中未见严重不良反应发生。结论:健康受试者皮下注射甲状旁腺素(1-34)40μg以内安全性和耐受性较好。

重组类人Ⅰ型胶原蛋白分离与纯化

目的研究重组类人Ⅰ型胶原蛋白基因工程的下游工艺。方法工程菌株Escherichia coliBL21 3.1在B ioengineering L1 523型12.8 L自控发酵罐中经24 h发酵,细胞干重达到77.3 g/L,表达量为菌体蛋白量的29.4%。发酵菌体经超声破碎、硫酸铵沉淀后,依次经DEAE52,Sephadex G-100柱层析分离纯化。结果最终产物纯度达到98%,回收率为80.5%。结论纯化的类人Ⅰ型胶原蛋白经SDS-PAGE电泳测定为电泳纯,分子质量为90ku,N端序列为NH2-H-D-P-V-V-L-Q-R-R-D-W-E-N-P-G,与基因序列设计一致。

rhIGF-1对STZ糖尿病大鼠心肌局部血管紧张素Ⅱ的影响

目的 观察重组人胰岛素样生长因子 1(rhIGF 1)对链脲佐菌素 (STZ)糖尿病大鼠心肌局部钙和血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)含量的影响 ,探讨其对糖尿病心肌病变的潜在治疗价值。方法 STZ 5 5mg/kg腹腔注射建立糖尿病大鼠模型 ,随机分为糖尿病对照组 (DM C)和糖尿病治疗组 (DM rhIGF 1) ,并设立未予任何处理的正常对照组 (NC) ,6周后测定大鼠血糖、果糖胺 (FMN)、血清GH和IGF 1水平、心肌Ca2 + 和ATⅡ含量及Ca2 + ATP酶活性。结果 (1)rhIGF 1治疗降低DM大鼠血糖和果糖胺水平 ;(2 )rhIGF 1治疗降低DM大鼠血清GH水平 ,升高IGF 1含量 ;(3)rhIGF 1治疗降低DM大鼠心肌局部Ca2 + 含量 ,升高Ca2 + ATP酶活性 ,降低ATⅡ含量。结论 rhIGF 1治疗改善STZ糖尿病大鼠心肌病变 ,可能与改善全身代谢及降低心肌局部ATⅡ含量有关。

人胰岛素样生长因子-Ⅰ基因农杆菌工程菌株的构建

采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｈｕＩＧＦ－Ｉ）基因的４条寡核苷酸 片段，再通过片段１、２与３、４末端互补配对和Ｋｌｅｎｏｗ酶促补平及酶切连接成为完整的ｈｕＩＧＦ－ＩＤＮＡ片段，用 ＥｃｏＲ Ｉ／ＰｓｔＩ酶切后克隆于 ｐＧＥＭ Ｔ－Ｅａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒ，经测序证明所得 ＤＮＡ序列与设计的序列完全一致；选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ＡＴＧ下游的６个密码子，并在ＡＴＧ处增加Ｋｏｚａｋ序列后，插入ｐＢＩ１２１的ＢａｍＨＩ／ ＳａｃＩ位点，构建了以 ３５Ｓ为启动子的植物表达载体；以 Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲＩ切下“３５Ｓ－Ｋｏｚａｋ－ＩＧＦ－Ｉ－ＮＯＳ（ｔｅｒ．）”插入 ｐＣＡＭＢＩＡ２３００之Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲ Ｉ位点，构建成ｈｕＩＧＦ－Ｉ植物表达载体；通过ＣａＣｌ２直接转化法将表达载体导入农 杆菌ＥＨＡ１０５（Ｒｉｆ．ｒ），并以菌落原位杂交技术和 ＤＮＡ ｄｏｔ ｂｌｏｔ对重组农杆菌进行了筛选，所获得的重组农杆菌菌株为培育ｈｕＩＧＦ－Ｉ豆药用植物奠定了基础。