用重组hTSHR胞外段测定女性AITD患者TRAb的研究

目的应用重组人促甲状腺素受体胞外段(hTSHRecd)蛋白在自身免疫性甲状腺病(AITD)患者中用以间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测TSH受体抗体(TRAb),建立一种简便快捷、敏感性及特异性均高的新的TRAb测定方法。方法病例组:女性,Graves甲亢(GD)患者59例,其中初诊23例;原发性甲状腺功能减退患者63例。对照组:非AITD甲状腺病(甲状腺囊肿或腺瘤,甲状腺功能正常)43例;正常对照50例。将重组hTSHRecd蛋白稀释成10μg/mL,包被酶标板,利用间接ELISA法测定上述各组样本血清TRAb,以放射受体分析(RRA)检测法为对照。结果间接ELISA法测定TRAb,各组OD450值分别为:正常对照组0.27±0.12,非AITD对照组0.32±0.26,GD甲亢组0.96±0.78,甲减组0.48±0.39。GD甲亢及甲减组与两个对照组相比均有显著性差异(GD甲亢t_1=6.79,t_2=6.30;甲减t1=4.27,t_2=3.26,均P<0.01)。用ELISA法和RRA法在AITD患者组中检测TRAb的阳性率分别为:GD甲亢组76.27%、81.36%,经比较无显著性差异(x^2=0.57,P>0.05);初诊GD甲亢组86.96%、91.30%,经比较无显著性差异(x^2=0.00,P>0.05);甲减组34.92%、39.68%,经比较无显著性差异(x^2=0.57,P>0.05)。用两种方法测得的TRAb活性值有相关性(r=0.577925,P<0.05)。结论 重组hTSHRecd蛋白与AITD患者血清有良好的反应性。间接ELISA法检测高效、简便、费用低,无同位素污染,在作为临床常规检验中优于RRA。

人TSH受体胞外段高效表达质粒的构建、表达及蛋白纯化

利用基因重组方法 ,构建hTSHRecd基因片段原核表达系统 (E .coliM15 )。hTSHRecd蛋白表达量大 ,纯化得到毫克级高纯度的hTSHRecd蛋白 ,可与TSHR自身抗体及TSH特异性结合 。