DMB衍生-高效液相色谱法测定重组人促卵泡激素中的唾液酸含量

目的建立采用4,5-亚甲二氧基-1,2-苯二胺二盐酸盐(DMB)衍生-高效液相色谱-荧光检测器(HPLCFLD)法(DMB衍生法)同时测定重组人促卵泡激素(rhFSH)中2种唾液酸组分N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)和N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)含量的方法。方法将DMB衍生法与邻苯二胺衍生-高效液相色谱法(邻苯二胺衍生法)进行对比研究,对DMB衍生法中的水解条件进行优化并确定最终方法为rhFSH原液经酸水解后,采用DMB进行衍生,经Agilent ZORBAX 300SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,采用荧光检测器检测。结果与邻苯二胺衍生法相比,DMB衍生法能够实现Neu5Gc与Neu5Ac相关杂质的有效分离。该方法Neu5Gc和Neu5Ac分别在0.5~5.0μg·mL^(-1)(r=0.9999)和25~250μg·mL^(-1)(r=0.9998)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;Neu5Gc和Neu5Ac的检测限分别为11.07、10.30 ng·mL^(-1),定量限分别为33.21、20.60 ng·mL^(-1),两者回收率分别为(99.63±1.33)%(n=9)和(100.62±1.58)%(n=9),RSD分别为1.3%(n=9)和1.5%(n=9)。结论该方法专属性强、灵敏度高、精密度和准确度良好,可用于准确测定rhFSH中唾液酸Neu5Gc和Neu5Ac的含量。

柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素中的单糖

目的:建立柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素(rhFSH)中的单糖。方法:采用20%TFA 水解rhFSH,释放单糖,用邻氨基苯甲酸衍生化,采用反相高效液相色谱法测定。色谱柱为 Jupiter C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相 A 为含0.15%正丁胺、0.25%磷酸、0.5%四氢呋喃的水溶液,流动相 B 为流动相 A 与乙腈比例为1:1的溶液,梯度洗脱,流速0.85 mL·min^(-1);柱温30 ℃;荧光检测器:激发波长为230 nm,发射波长为425 nm。结果:葡萄糖胺、半乳糖、甘露糖、岩藻糖进样量分别在0.39～3.94 nmol(r=0.9994),0.29～5.85 nmol(r=0.9998),0.24～4.90 nmol(r=0.9998),0.05～1.03nmol(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好的线性关系。平均加样回收率(n=9)分别为104.1%,104.2%,104.2%,98.0%;RSD 分别为9.3%,1.8%,0.61%,6.0%。结论:该方法灵敏,专属性强,重复性好,可定量测定重组人促卵泡激素中的单糖。

重组人促卵泡激素研究进展

重组人促卵泡激素(rhFSH)是目前人类辅助生殖技术中常用的药物。由于糖基化作用的原因,原核表达系统难以生产出rhFSH。迄今为止,全球仅有两家公司的rhFSH药物上市。rhFSH高表达细胞株的构建、蛋白产量的提高以及糖基化的均一性是目前需要重点解决的问题。本文综述了rhFSH及其突变体的研发现状和未来的发展趋势,为后续的重组卵泡刺激素研究奠定基础。

重组人卵泡刺激素的研究进展

综述了重组人卵泡刺激素(rhFSH)的制备和未来发展方向以及我国卵泡刺激素(FSH)产品的发展概况,重点介绍了rhFSH产品(果纳芬和普丽康)的制备技术特点。与传统的尿源卵泡刺激素(uFSH)相比,rhFSH具有纯度高且产品批次均一性好的优点,更重要的是rhFSH在提高安全性、减少治疗副反应等方面具有优势。FSH广泛地用于不孕不育的治疗当中,是用于生殖健康领域的重要药物分子,有着很大的市场发展前景。

长效重组人促卵泡激素主要功效的对比研究

目的：评价并比较生物类似药候选药长效重组人促卵泡激素（rh FSH-CTP）与参照药Elonva的功能差异,即对幼龄大鼠体内主要药效学作用的相似性。方法：生物活性测定按中国药典方法进行;药效学研究以未成年4-5周龄,体重70-90 g的SD雌性大鼠研究其超排卵作用。结果：rhFSH-CTP注射液的生物效价为453 IU·支-1,与参照药Elonva体内活性相当,两者差异很小;其超排卵作用相比于阴性对照组（空白组）卵巢系数、卵子数、组织病理学总评分等指标显著增大（p〈0.05）,大鼠血清激素水平即雌二醇（E2）、黄体激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、孕酮（P）等都有不同程度增加,尤其E2增加显著（p〈0.05）;各指标与Elonva间的差异无显著性意义（p〉0.05）。结论：生物类似药候选药rhFSH-CTP批号20140901的制剂,具有生物活性和促进卵泡发育成熟超排卵的长效作用,与参照品Elonva活性和药效相似。

国产与进口重组人FSH在辅助生殖技术超排卵治疗中的疗效比较

目的本研究旨在比较国产与进口重组人促卵泡激素(recombinant human follicle stimulating,rhFSH)在辅助生殖技术超排卵治疗中的疗效差异。方法回顾分析了2018年1月—12月在首都医科大学附属北京妇产医院生殖科接受控制性超促排卵后行IVF-ET/ICSI治疗的192个周期的临床资料,根据所用药物不同分为国产组(A组,101个周期)和进口组(B组,91个周期),比较两组患者的一般情况、基础激素水平、用药情况、获卵情况和妊娠结局等是否存在差异。结果两组的一般情况、基础激素水平和基础卵泡数均无显著差异(P>0.05)。两组rhFSH人均用药总量、人均用药天数、加用HMG人数比例、人均用HMG总量、天数,HCG日子宫内膜厚度、LH水平均无明显差异(P>0.05);但是进口组获卵数、HCG日E2、P0水平高于国产组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组胚胎种植率、生化妊娠率、临床妊娠率以及流产率均无明显差异(P>0.05);但是,国产组的多胎妊娠率高于进口组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论使用相同剂量的rhFSH进行超排卵治疗,国产组可获得与进口组大致相同的胚胎种植率、生化妊娠率、临床妊娠率以及流产率,在不孕患者的辅助生殖治疗中不失为一种好的选择。