重组人白细胞介素-6对缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响

实验在培养的大鼠海马神经元中观察了重组人白细胞介素 6 (recombinanthumaninterleukin 6 ,rhIL 6 )对缺氧 复氧后Bcl 2、Bax表达和神经元凋亡的影响。把培养 12d的大鼠海马神经元分为对照组和rhIL 6组 ,同时于缺氧环境 (90 %N2 +10 %CO2 )中培养 2、4h后 ,再于常氧培养箱内复氧培养 2 4和 72h。于不同时间取出 ,分别用抗Bcl 2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色 ,观察缺氧 复氧后大鼠海马培养神经元Bcl 2和Bax的表达 ,并用原位末端标记 (TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧 复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果可见 ,与缺氧前相比 ,缺氧 复氧后 2 4和 72h ,海马神经元Bcl 2表达明显减弱 ,Bax表达明显增强 ,凋亡神经元明显增多。经rhIL 6预处理的海马神经元与对照组相比 ,缺氧 复氧后 2 4和 72h ,Bcl 2表达明显增强 ,Bax表达明显减弱 ,凋亡神经元明显减少。本实验结果提示 ,rhIL 6对海马神经元缺氧

rhIL-6表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

通过PCR技术扩增出约0.5kb的IL-6基因片段,并且采用含有PRPL串联启动子及SD区的高效表达载体pBV220,经DNA重组技术,成功地构建了rhIL-6的基因工程菌E.coli DH5a/pBV220IL-6。所表达的IL-6经SDS-PAGE证明约17.5kD,表达量占菌体总蛋白的30%以上。以IL-6依赖细胞株MH60·BSF2检测,表达产物粗提物1:100复性后效价可达到5×108u/ml,每升发酵菌液可获1012u IL-6粗品。

复春散Ⅱ号、凉血解毒方联合重组人生长激素对重度烧伤患者血清促炎因子TNF-α、CRP、IL-6、蛋白质代谢及免疫功能的影响

目的分析复春散Ⅱ号、凉血解毒方联合重组人生长激素对重度烧伤(SDB)患者血清促炎因子TNF-α、CRP、IL-6、蛋白质代谢及免疫功能的影响。方法将医院2017年3月—2019年3月收治的SDB患者129例按随机数字表法(RTNM)将其分成A、B组,各65例、64例,其中A组单纯予以复春散Ⅱ号、凉血解毒方治疗,B组则在A组治疗的基础上联合重组人生长激素治疗,将两组各项数据纳入SPSS 21.0软件处理,比较两组治疗前后的血清促炎因子TNF-α、CRP、IL-6表达及蛋白质代谢及免疫功能。结果1)A、B组治疗前的血清TNF-α、IL-6、CRP表达水平相比无显著差异(P>0.05),B组治疗后血清TNF-α、IL-6、CRP表达水平均显著低于A组(P<0.05)。2)A、B组治疗前的免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)和T细胞亚群(CD4、CD8、CD4/CD8)相比无显著差异(P>0.05),B组治疗后以上几项指标均高于A组(P<0.05)。3)A、B组治疗前氮平衡、白蛋白、前白蛋白及转铁蛋白水平相比均无显著差异(P>0.05),B组治疗后以上指标均高于A组(P<0.05)。4)经ROC曲线分析发现,TNF-α、IL-6、CRP、蛋白质代谢及免疫功能在SDB患者的创面愈合中均有较好的临床评估价值。结论在SDB患者临床治疗中科学、合理的予以复春散Ⅱ号、凉血解毒方联合重组人生长激素能显著降低重度烧伤患者机体炎症介质的水平,改善蛋白质代谢和免疫功能。可选择性地将以上几项指标视作患者创面愈合情况的评价标准之一,临床应用价值较好。

人重组白细胞介素-6对成牙骨质细胞的生长及分泌骨钙素能力的影响

目的 :了解rhIL 6对成牙骨质细胞 (cementoblasts,CBs)增殖活性及分泌骨钙素 (osteocalcin ,OC)能力的影响。方法 :试验所用的CBs为用组织块法联合酶消化法培养所得的新生牛CBs。实验组培养液为 10 % (体积分数 )FCS +RPMI16 40加不同 (质量 )浓度的rhIL 6 ,对照组不加rhIL 6。采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法观察CBs生长及存活状态 ;放射免疫分析法测定CBs培养上清液中OC的含量。结果 :rhIL 6对CBs的生长有抑制作用 ,并呈剂量依赖趋势 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;同一 (质量 )浓度rhIL 6在不同的培养时间段对CBs分泌OC的影响不同 ,除 0 .1μg·L- 1 IL 6组外 ,1、10、10 0 μg·L- 1 组上清液中的OC浓度在最初的 5d内有明显增高 ,以 10 0 μg·L- 1 组最显著 ,呈浓度依赖性 ,但在第 7天时 ,10 0 μg·L- 1 组的OC浓度明显下降至仅略高于第 3天的水平。 0 .1、1和 10μg·L- 1 组在第 3天和第 7天时 ,OC浓度均低于空白对照组。结论 :IL 6可能通过调节CBs的生长和OC的分泌而在CBs的代谢及牙骨质的形成、修复中发挥一定的作用。

重组人乳铁蛋白对Tca8113细胞中促炎性反应细胞因子IL-6和IL-8蛋白表达的影响

目的:研究重组人乳铁蛋白(rhLF)对口腔鳞癌Tca8113细胞中促炎症反应细胞因子IL-6和IL-8表达的影响,探讨其抑制肿瘤细胞生长的可能机制。方法:体外培养口腔鳞癌Tca8113细胞,用rhLF处理体外培养的Tca8113细胞,应用酶联免疫吸附试验、免疫组织化学方法检测50 mg·L-1rhLF和100 mg·L-1rhLF对Tca8113细胞分泌的IL-6和IL-8蛋白表达的影响。结果:随着rhLF浓度的增加,培养上清中的IL-6和IL-8含量逐渐下降;100 mg·L-1rhLF组培养上清中IL-6和IL-8水平明显下降,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色,IL-6、IL-8在Tca8113细胞有表达,与对照组比较,50 mg.L-1rhLF组IL-6、IL-8在Tca8113细胞的表达明显下降,表现为弱表达或不表达。结论:rhLF在体外可以特异性地抑制口腔鳞癌Tca8113细胞中IL-6和IL-8的生成,诱导肿瘤细胞炎症性环境的改变,达到抑制肿瘤生长的目的。

重组人IL-6对近曲肾小管上皮细胞增殖及生物学表型的影响

【目的】观察重组人白细胞介素6(rIL-6)在体外对人近曲肾小管上皮细胞株(HK-2)增殖及生物学表型的影响。探讨rIL-6对HK-2细胞作用的时间-效应及剂量-效应关系。【方法】用MTT比色法检测rIL-6对细胞增殖的影响;用流式细胞术检测rIL-6对细胞周期及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性细胞百分率的影响;倒置显微镜观察rIL-6对HK-2细胞形态改变的影响。【结果】MTT比色法示,rIL-6在10～50ng/mL作用浓度范围内促进HK-2细胞增殖,呈剂量、时间依赖效应;rIL-6作用浓度为100～200ng/mL时抑制细胞增殖,随作用浓度增加抑制作用加强(F=201.582,P<0.001),(F=43.943,P<0.001)。rIL-6影响HK-2细胞的DNA合成。HK-2细胞有基础量的α-SMA表达,25ng/mLrIL-6与HK-2孵育1～48h后,α-SMA阳性细胞百分率高峰出现在48h(F=442.22,P<0.001)。rIL-6干预下,HK-2细胞形态由卵园型渐转变为长棱型、长条型。【结论】rIL-6可促进HK-2细胞增殖及生物学表型的转化,但大剂量的rIL-6可抑制HK-2细胞增殖。

人重组白细胞介素-6对缺氧时大鼠海马神经元Bcl-2表达的影响

目的和方法 :采用免疫组化方法 ,观察缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl 2表达及人重组白细胞介素 6(rhIL 6)的影响。结果 :经rhIL 6孵育的海马神经元缺氧后神经元活存数、Bcl 2表达阳性神经元数和Bcl 2表达阳性神经元的平均光密度均明显高于对照组。结论 :rhIL 6能增强缺氧神经元Bcl 2的表达 ,抑制缺氧后神经元的死亡 ,提示rhIL 6参与脑缺氧损伤的调控。

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-6免疫反应的影响

目的 观察低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL 6免疫反应的影响。方法 取培养 12d的两组 (对照组和低氧预处理组 )培养神经元 ,同时置于缺氧环境 ( 0 .9L LN2 、0 .1L LCO2 )中培养 2、4、8和 12h。分别观察它们的形态变化和神经元存活数 ,并用抗rhIL 6单克隆抗体进行免疫组化染色 ,观察缺氧对大鼠海马培养神经元IL 6免疫反应的影响。结果 低氧预处理可增强海马神经元对rhIL 6的免疫反应 ,经低氧预处理的海马神经元缺氧后神经元存活数和对rhIL 6的免疫反应均明显高于对照组。结论 低氧预处理可使体外培养的海马神经元对缺氧产生耐受 ,其中rhIL 6的免疫反应增加可能是海马神经元对缺氧的一种适应性变化 ,提示IL 6可能参与脑缺氧耐受性的形成 ,并在海马神经元缺氧损伤的调控中起重要作用。

重组人白细胞介素-6融合蛋白的大肠杆菌发酵工艺

研究了重组大肠杆菌表达人白细胞介素-6(rhIL-6)融合蛋白的发酵工艺。摇瓶实验对比了不同培养基对重组菌密度和rhIL-6表达量的影响,确定了以含0.1%葡萄糖的2×YT培养基为最适培养基。同时,还对诱导剂异丙基疏基半乳糖苷(IPTG)加入量进行优化,按每升发酵液加入0.02mmol,就能有效诱导rhIL-6的表达。在10 L发酵罐间歇实验中,以含0.1%葡萄糖的2×YT为培养基,比较了溶氧、pH、诱导前培养时间、诱导后培养时间对rhIL-6的表达量和菌密度的影响,得到最优培养条件为pH为6.8～7.0,接种量4%,温度37℃,诱导前溶氧量30%,在O.D._(600)为1.2～1.8时加入IPTG诱导,控制诱导后溶氧为5%～10%,再培养5 h,最终rhIL-6表达量为38%,菌体密度为5.8 g/L。

聚乙二醇化重组人白细胞介素-6生物学活性工作标准品的校准和稳定性研究

目的对聚乙二醇化重组人白细胞介素-6生物学活性工作标准品进行校准和稳定性研究。方法按《中国药典》三部(2010版)的要求,检测工作标准品的生物学活性,以IL-6国际标准品进行校准,并研究其在不同温度下放置的稳定性。结果聚乙二醇化重组人白细胞介素-6工作标准品经8次试验,每次分别在3个96孔板上检测生物学活性,并以国际标准品进行校准,共获得24个校准活性结果。平均生物学活性的95%可信区间为2.0×106～3.8×106AU/mL,单次测定范围为1.9×106～3.8×106AU/mL,平均可信限率为3.771%。工作标准品分别在-20℃、4℃、25℃、37℃条件下放置12个月,其生物学活性保持稳定。结论所制备的工作标准品可用于聚乙二醇化重组人白细胞介素-6中试工艺的研究和每批产品质量的评价。

人重组白细胞介素-6对大鼠海马神经元Bcl-2表达的影响

观察重组人白细胞介素－6（rhIL－6）对体外培养大鼠海马神经元Bcl－2表达的影响。方法取培养3、7、14、21和28天（d）的两组（对照组和rhIL－6组）培养神经元，分别观察其生长发育和神经元活存数，并用抗Bcl－2抗血清进行免疫组化染色，观察Bcl-2免疫反应（Bcl-2－IR）阳性和阴性神经元数目，计算Bcl-2－IR阳性神经元所占百分率，并在图像分析仪上对Bcl-2－IR神经元作平均光密度的色谱分析。结果培养3、7、14、21和28d时，rhIL－6组神经元活存数、Bcl－2－IR阳性神经元数和Bcl-2-IR阳性神经元的平均光密度均明显高于对照组。结论rhIL－6能增强生长发育过程中海马神经元Bcl-2的表达，减少神经元的退化死亡，表明rhIL-6对体外培养的海马神经元具有神经营养作用。

重组人IL-6在沙门菌x4550中的表达

为在鼠伤寒沙门菌ｘ４５５０中表达重组人白细胞介素６（ＩＬ６），利用定点突变、聚合酶链反应、体外重组ＤＮＡ技术构建出重组表达载体ｐＹＡ３３３３ＩＬ６；利用ＩＬ６依赖性的小鼠杂交瘤细胞株Ｂ９测定重组人ＩＬ６ＨＧＦ的活性。结果：从全菌ＳＤＳＰＡＧＥ考马斯亮蓝染色后薄层扫描分析表达产物产率为１７６％，相对分子质量为２１×１０４；测定重组人ＩＬ６ＨＧＦ活性为２×１０６Ｕ／Ｌ。提示：鼠伤寒沙门菌ｘ４５５０能够表达人ＩＬ６。

基于JAK/STAT信号通路探究重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果及机制

目的 基于Janus激酶(JAK)/信号转导与转录活性因子(STAT)信号通路探究重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果及机制。方法 选取2020年3月—2022年2月收治的毛细支气管炎患儿156例,依据治疗方案不同分为观察组和对照组2组各78例。观察组予重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗,对照组予乙酰半胱氨酸治疗。比较2组治疗7 d后临床效果及症状和体征消失时间、住院时间,治疗前及治疗7 d后JAK/STAT信号通路关键蛋白[干扰素调节因子9(IRF9)、信号转导与转录活性因子1(STAT1)和信号转导与转录活性因子2(STAT2)]表达及相关细胞因子[白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织型金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)]、辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)水平,以及治疗期间不良反应发生率、治疗后6个月喘息复发率。结果 治疗7 d后,观察组总有效率、IRF9、STAT1、STAT2表达和Treg水平高于对照组;IL-6、MMP-9、TIMP-1和Th17水平低于对照组(P<0.01)。观察组咳嗽、喘憋、喘息、湿啰音消失时间及住院时间均短于对照组(P<0.01)。治疗期间,2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后6个月,观察组喘息复发率低于对照组(P<0.01)。结论 重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果显著,可促进症状、体征消失,加速康复进程,降低喘息反复发作风险;机制可能为其抑制IL-6释放,激活JAK/STAT信号通路,促使Th17向Treg转化,增强机体免疫应答,且调控MMP-9、TIMP-1表达,减轻支气管及肺损伤。

重组人脑利钠肽治疗慢性心力衰竭的疗效及对患者白细胞介素-6水平的影响

目的:探讨重组人脑利钠肽治疗慢性心力衰竭的疗效及对患者白细胞介素-6水平的影响。方法:选取2013年5月-2015年12月本院接收慢性心力衰竭患者98例,随机分配法将其分为对照组与观察组,每组各49例。对照组患者接受硝酸甘油治疗,观察组患者接受重组人脑利钠肽治疗,比较两组治疗效果及药物对患者白细胞介素-6水平的影响。结果:治疗后,两组患者的临床症状均得到明显缓解,对照组患者左室舒张末内径(LVEDD)、左室收缩末内径(LVESD)高于观察组,左室射血分数(LVEF)低于观察组,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);用药3 d后,对照组、观察组患者血浆中白细胞介素-6水平分别为(364.90±17.99)ng/L、(195.00±23.86)ng/L,比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗期间,两组患者不良反应发生率分别为8.16%、6.12%,比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:重组人脑利钠肽治疗慢性心力衰竭患者效果显著,能够有效降低患者白细胞介素-6水平,值得推广应用。

PEG化重组人白细胞介素-6制品游离PEG测定方法的研究

为了建立PEG化学修饰的重组人白细胞介素-6(PEG-rhIL-6)的部分质量控制方法,参照2005年版《中华人民共和国药典》三部附录III B高效液相色谱法,以RP-HPLC方法分离PEG-rhIL-6原液中的不同成分,用蒸发光散射监测器检测游离PEG,用外标法测定计算样品中残留PEG的含量。PEG修饰rhIL-6结构稳定;制品中的游离PEG含量符合要求。RP-HPLC法检测游离PEG结果可靠。

重组人干扰素ɑ-1b雾化对病毒性上呼吸道感染患儿TNF-α、IL-6的影响

目的 研究重组人干扰素ɑ-1b雾化对病毒性上呼吸道感染患儿肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL-6)的影响.方法 回顾性分析梁河县人民医院2018年2月至2019年3月收治的病毒性上呼吸道感染患儿94例,按照治疗方法 的不同分为常规组(47例)、试验组(47例),常规组使用利巴韦林治疗,试验组使用重组人干扰素ɑ-1b雾化治疗,均治疗7?d.结果 试验组的临床总有效率为97.87%,高于常规组的87.23%;与常规组相比,试验组的咳嗽、发热、卡他症状消失时间均明显缩短;与治疗前相比,治疗后2组血清TNF-α、IL-6、CRP水平均降低,且试验组低于常规组(P<0.05).结论 重组人干扰素ɑ-1b雾化治疗可通过抑制炎症反应缓解病毒性上呼吸道感染患儿的临床症状,缩短症状缓解时间.

重组人白细胞介素-6补料分批发酵工艺研究

在传统分批发酵工艺的基础上,对E.Coli表达IL-6的补料分批发酵工艺进行研究,结果表明:在发酵诱导前补料可在表达纯度相差无几的情况下提高菌体的产量,最终提高了生产效率,降低了成本。通过几次发酵比较,结果如下:分批补料工艺菌体生物量平均为10.8g/L,SDS-PAGE电泳法测IL-6表达量平均为40%,比分批发酵8.3g/L的菌体生物量及3.5%的纯度提高30.1%和3.9%。

缺氧对海马培养细胞人重组白细胞介素－6免疫组化反应的影响

本文观察了缺氧对体外培养海马细胞中ｒｈＩＬ－６免疫反应的影响。结果显示，体外培养的海马神经元和神经胶质细胞的ｒｈＩＬ－６呈弱阳性免疫反应，缺氧１～４ｈ后神经元和神经胶质细胞的ｒｈＩＬ－６免疫组化反应明显增强。对免疫染色细胞作图像分析结果显示，缺氧后神经元和神经胶质细胞的平均光密度较缺氧前增加，尤以缺氧２ｈ时最明显，之后随缺氧时间延长，神经元和神经胶质细胞的平均光密度又逐渐减弱。上述结果表明，海马脑区存在ｒｈＩＬ－６免疫反应细胞；缺氧条件下ｒｈＩＬ－６免疫组化反应增强，提示ｒｈＩＬ－６可能参与脑缺氧损伤的调控。

诱导条件对重组大肠杆菌发酵中人白细胞介素6表达量的影响

对重组人白细胞介素 6(rh IL- 6)大肠杆菌摇瓶发酵工艺作了研究。探讨了诱导策略对菌体生长和rh IL- 6表达量的影响。结果表明 ,含有温敏扩增型质粒 p Kp L3a的重组 h IL- 6大肠杆菌 ,在 2× YT培养基中发酵 ,接种量为 0 .2 % ,于 30℃ ,1 80 r/ min摇瓶中培养 ,当菌密度 OD60 0 约为 1 .5时 ,转至 42℃或 40℃诱导 ,维持时间至少为 1 h,然后转至 37℃培养 3h,最终 rh IL- 6表达量可达 32 %。于 40℃或 42℃下诱导时间低于1 h,则使最终 rh IL- 6表达量降低。如果采用 42℃或 40℃恒温诱导 ,rh IL- 6表达量仅为 2 0 %。

重组人白介素-11诱导C反应蛋白升高与细菌性感染鉴别的病例对照研究

目的总结重组人白介素-11(rh IL-11)诱导发热及CRP升高的临床特点,评估降钙素原(PCT)与IL-6等指标早期鉴别细菌感染与rh IL-11治疗反应的价值。方法回顾性分析2013年9月至2017年3月我科ALL化疗后接受rh IL-11治疗患儿的临床资料。化疗期间每1~3 d监测血象、CRP,出现感染或疑似感染表现后24 h内测定降钙素原(PCT)、IL-6、ESR。根据临床表现及辅查资料综合判断,将患儿分为细菌感染组(48例)与非细菌感染组(30例),比较两组发热及CRP升高情况。将非细菌感染组中CRP升高者定义为rh IL-11反应组(19例),比较其与细菌感染组抗菌疗程及上述实验室指标的差别,对差异有统计学意义的指标,绘制ROC曲线评估诊断效能。结果细菌感染组与非细菌感染组发热、CRP升高比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。细菌感染组PCT、IL-6高于rh IL-11反应组(P<0.01),粒细胞绝对数(ANC)低于rh IL-11反应组(P<0.01);两组CRP、ESR、Hgb、BPC比较差异无统计学意义(P>0.05)。ANC、IL-6、PCT的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.684、0.784、0.820。PCT+IL-6的AUC为0.814,与PCT、IL-6比较差异无统计学意义(P>0.05)。细菌感染组、rh IL-11反应组抗菌治疗中位天数分别为12.5 d(8.0~18.0 d)、5.0 d(4.0~7.0 d)(P<0.05)。结论接受rh IL-11治疗的患者不宜采用CRP指导抗菌治疗。PCT、IL-6对早期鉴别细菌感染与rh IL-11治疗反应具有重要价值。综合临床表现、PCT、IL-6及其他实验室检查,正确识别rh IL-11治疗反应,有助于减少抗生素使用。