重组人透明带蛋白3诱导精子的顶体反应

目的 :在体外条件下检测重组人透明带蛋白诱导的顶体反应。方法 :体外采集已生育健康男子精液 ,采用非连续密度梯度法分离精子 ,将获能的精子悬液分成阴性对照组 (C组 ,2 0 0 μL 精子悬液加 1μL DMSO)、阳性对照组 (A组 ,2 0 0 μL精子悬液加 A2 3187至终浓度为 10 μmol· L- 1 )和 ZP3组 (2 0 0 μL 精子悬液加 ZP3至终浓度为 10 m g· L- 1 ) ,考马斯亮蓝染色法检测重组人 ZP3蛋白诱导的顶体反应。结果 :C组、A组和 ZP3组发生顶体反应的精子百分率分别为 (5 .0 0± 1.70 ) %、 (4 6 .10± 7.4 9) %和 (13.2 0± 2 .70 ) % ,各组间比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :重组人透明带蛋白能够诱导人精子发生顶体反应。

人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较

目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区会影响重组蛋白泌出胞外而使表达量降低,潜在酶切位点存在会导致重组蛋白被不完全降解,而多聚组氨酸纯化标签设计位置对表达也有一定影响。结论:从表达量和产物完整性综合考虑,以突变型成熟肽为佳,含跨膜区的蛋白则应选用pPICZaA质粒,以便富集得到完整的表达蛋白。

重组人卵透明带蛋白及其多克隆抗体对精子-透明带结合的影响

为了探讨毕赤酵母表达的重组人卵透明带ZP3蛋白(recombinant human zona pellucida-3 protein,rhZP3)及其多克隆抗体对小鼠和人精卵结合的影响,采用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理小鼠精子,然后再与小鼠卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附及体外受精率的影响;用rhZP3以及空白培养液分别处理人精子,然后再与人卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附的影响;用抗rhZP3抗体与阴性血清分别处理小鼠和人卵子,再与精子进行结合实验,观察多克隆抗体对精子粘附以及小鼠体外受精率的影响。实验结果表明,rhZP3和抗rhZP3多克隆抗体既能抑制人的体外精卵结合,也能抑制小鼠体外精卵结合,提示rhZP3具有天然透明带的特性,有发展成避孕疫苗和作为检测透明带抗体检测试剂的可能。