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Clostridium butyricum蔗糖磷酸化酶的酶学性质及其功能研究
1
作者
谭姚姚
何贺贺
+4 位作者
王宏萌
梁蒙
林宇
黄日波
杜丽琴
《广西科学》
CAS
北大核心
2022年第6期1094-1102,共9页
本研究克隆表达丁酸梭菌Clostridium butyricum DSM10702菌株的蔗糖磷酸化酶基因,并探究重组酶的酶学性质和转糖苷功能。从丁酸梭菌C.butyricum DSM10702菌株中克隆蔗糖磷酸化酶基因cbsp,构建重组表达质粒pQE30-cbsp并在大肠杆菌Escheri...
本研究克隆表达丁酸梭菌Clostridium butyricum DSM10702菌株的蔗糖磷酸化酶基因,并探究重组酶的酶学性质和转糖苷功能。从丁酸梭菌C.butyricum DSM10702菌株中克隆蔗糖磷酸化酶基因cbsp,构建重组表达质粒pQE30-cbsp并在大肠杆菌Escherichia coli XL1-blue中诱导表达;将重组蛋白经镍柱纯化后,进行酶学性质和转糖苷功能研究。实验结果表明,以蔗糖为底物,重组酶Cbsp的最适温度为45℃、最适pH为7.0、V_(max)和K_(m)分别为(957±23.29)μmol·mg^(-1)·min^(-1)和(62.4±4.749) mmol·L^(-1)。当以葡萄糖-1-磷酸(G-1-P)为糖基供体时,重组酶Cbsp对于多数单糖、糖醇类、(-)-儿茶素、己基-β-D-吡喃葡萄糖苷和L-抗坏血酸表现出转糖苷活性。以上研究结果可丰富蔗糖磷酸化酶相关数据库,为其应用研究提供参考。
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关键词
蔗糖磷酸化酶
丁酸梭菌
克隆表达
纯化
酶学性质
转糖苷功能
下载PDF
职称材料
重组大肠杆菌产蔗糖磷酸化酶的酶学性质及其催化合成α-熊果苷
被引量:
4
2
作者
万月佳
马江锋
+4 位作者
徐蓉
贺爱永
姜岷
陈可泉
姜引
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1450-1459,共10页
利用重组大肠杆菌EscherichiacoliRosetta(DE3)/pET-SPase发酵生产蔗糖磷酸化酶(EC2.4.1.7,Sucrosephosphorylase,SPase)。收集的菌体经高压破碎后离心得到粗酶液,通过镍NTA亲和层析、超滤除盐后得到电泳纯的SPase,纯化后的...
利用重组大肠杆菌EscherichiacoliRosetta(DE3)/pET-SPase发酵生产蔗糖磷酸化酶(EC2.4.1.7,Sucrosephosphorylase,SPase)。收集的菌体经高压破碎后离心得到粗酶液,通过镍NTA亲和层析、超滤除盐后得到电泳纯的SPase,纯化后的SPase的比酶活是原来的2.1倍,酶活回收率达到82.7%。经SDS.PAGE电泳测定,重组SPase的分子量约为59kDa。该酶在不高于37℃,pH6.0~6.7的条件下比较稳定,最适催化温度与最适催化pH分别为37℃,pH6.7,该酶对蔗糖的米氏常数(Km)为7.3mmol/L,最大反应速率(Vmax)为0.2/μmol/(min·mg)。此外文中还以蔗糖和氢醌为底物,利用重组SPase催化合成a-熊果苷。其最佳反应条件为:20%蔗糖,200U/mL的酶液,1.6%氢醌,pH6.0~6.5,25℃,反应21h。a-熊果苷的摩尔产率为78.3%,a-熊果苷的产量为31g/L。
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关键词
重组蔗糖磷酸化酶
纯化
酶学性质
α-熊果苷
原文传递
题名
Clostridium butyricum蔗糖磷酸化酶的酶学性质及其功能研究
1
作者
谭姚姚
何贺贺
王宏萌
梁蒙
林宇
黄日波
杜丽琴
机构
广西大学生命科学与技术学院
亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室
出处
《广西科学》
CAS
北大核心
2022年第6期1094-1102,共9页
基金
国家自然科学基金地区科学基金项目(21566003)
广西科学研究与技术开发计划自治区主席科技资金项目(17290-03)
广西自然科学基金项目(2018GXNSFAA138103)资助。
文摘
本研究克隆表达丁酸梭菌Clostridium butyricum DSM10702菌株的蔗糖磷酸化酶基因,并探究重组酶的酶学性质和转糖苷功能。从丁酸梭菌C.butyricum DSM10702菌株中克隆蔗糖磷酸化酶基因cbsp,构建重组表达质粒pQE30-cbsp并在大肠杆菌Escherichia coli XL1-blue中诱导表达;将重组蛋白经镍柱纯化后,进行酶学性质和转糖苷功能研究。实验结果表明,以蔗糖为底物,重组酶Cbsp的最适温度为45℃、最适pH为7.0、V_(max)和K_(m)分别为(957±23.29)μmol·mg^(-1)·min^(-1)和(62.4±4.749) mmol·L^(-1)。当以葡萄糖-1-磷酸(G-1-P)为糖基供体时,重组酶Cbsp对于多数单糖、糖醇类、(-)-儿茶素、己基-β-D-吡喃葡萄糖苷和L-抗坏血酸表现出转糖苷活性。以上研究结果可丰富蔗糖磷酸化酶相关数据库,为其应用研究提供参考。
关键词
蔗糖磷酸化酶
丁酸梭菌
克隆表达
纯化
酶学性质
转糖苷功能
Keywords
sucrose
phosphorylase
Clostridium butyricum
expression cloning
purification
enzymatic
properties
transglycoside function
分类号
Q814 [生物学—生物工程]
下载PDF
职称材料
题名
重组大肠杆菌产蔗糖磷酸化酶的酶学性质及其催化合成α-熊果苷
被引量:
4
2
作者
万月佳
马江锋
徐蓉
贺爱永
姜岷
陈可泉
姜引
机构
南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1450-1459,共10页
基金
国家自然科学基金(No.21076105)
国家重点基础研究发展计划(973计划)(No.2009CB724701)
江苏高校优势学科建设工程项目资助~~
文摘
利用重组大肠杆菌EscherichiacoliRosetta(DE3)/pET-SPase发酵生产蔗糖磷酸化酶(EC2.4.1.7,Sucrosephosphorylase,SPase)。收集的菌体经高压破碎后离心得到粗酶液,通过镍NTA亲和层析、超滤除盐后得到电泳纯的SPase,纯化后的SPase的比酶活是原来的2.1倍,酶活回收率达到82.7%。经SDS.PAGE电泳测定,重组SPase的分子量约为59kDa。该酶在不高于37℃,pH6.0~6.7的条件下比较稳定,最适催化温度与最适催化pH分别为37℃,pH6.7,该酶对蔗糖的米氏常数(Km)为7.3mmol/L,最大反应速率(Vmax)为0.2/μmol/(min·mg)。此外文中还以蔗糖和氢醌为底物,利用重组SPase催化合成a-熊果苷。其最佳反应条件为:20%蔗糖,200U/mL的酶液,1.6%氢醌,pH6.0~6.5,25℃,反应21h。a-熊果苷的摩尔产率为78.3%,a-熊果苷的产量为31g/L。
关键词
重组蔗糖磷酸化酶
纯化
酶学性质
α-熊果苷
Keywords
recombinant sucrose phosphorylase
,
purification
,
properties
,
a-arbutin
分类号
TQ929 [轻工技术与工程—发酵工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Clostridium butyricum蔗糖磷酸化酶的酶学性质及其功能研究
谭姚姚
何贺贺
王宏萌
梁蒙
林宇
黄日波
杜丽琴
《广西科学》
CAS
北大核心
2022
0
下载PDF
职称材料
2
重组大肠杆菌产蔗糖磷酸化酶的酶学性质及其催化合成α-熊果苷
万月佳
马江锋
徐蓉
贺爱永
姜岷
陈可泉
姜引
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
4
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