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Successful prevention of tumor lysis syndrome using recombinant urate oxidase in patient with metastasic and bulky prostate rhabdomyosarcoma
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作者 Atsuko Watanabe Ryuhei Tanaka 《Case Reports in Clinical Medicine》 2014年第1期18-22,共5页
Tumor lysis syndrome (TLS) is a life-threatening oncological emergency that frequently occurs in patients with hematological malignancies. It is becoming more common in patients with solid tumors because of advances i... Tumor lysis syndrome (TLS) is a life-threatening oncological emergency that frequently occurs in patients with hematological malignancies. It is becoming more common in patients with solid tumors because of advances in molecular targeted therapies. Recombinant urate oxidase (rUO) is effective at preventing and treating hyperuricemia, but clinicians who treat adult patients with solid tumors are generally not aware of this. In addition, the treatment guidelines for TLS do not include indications for rUO treatment for chemosensitive sarcoma. We report an adolescent case of metastatic rhabdomyosarcoma (RMS), in which clinical TLS was successfully prevented using rUO. A 16-year-old Japanese male suffered from urinary retention and bone pain and was diagnosed with prostate RMS combined with multiple bone metastases and bone marrow involvement. He was judged to be at high risk of clinical TLS because his prostate tumor was bulky and he displayed laboratory TLS. rUO was administered during chemotherapy. Soon after the initiation of chemotherapy, his disseminated intravascular coagulation (DIC) got worse, and his lactate dehydrogenase (LDH) level was elevated due to tumor lysis. However, his serum uric acid levels remained low, and he was prevented from falling into acute renal failure. The planned regimen was successfully completed without life-threatening complications, and the patient achieved a complete response after 2 courses of chemotherapy. The international TLS consensus panel developed recommendations for TLS prophylaxis, but did not define the TLS risk classification of RMS. We recommend that RMS should be treated like neuroblastoma because it grows rapidly and is highly chemosensitive. Our patient was considered to be indicated for rUO because he displayed urinary retention, DIC, and laboratory TLS before chemotherapy. These features might be useful as indications for rUO therapy, which can safely support chemotherapy. 展开更多
关键词 Tumor LYSIS Syndrome recombinant urate oxidase RHABDOMYOSARCOMA
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PEG化重组尿酸氧化酶蛋白含量测定方法研究
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作者 李晶 苑方园 +2 位作者 程速远 张慧 梁成罡 《生物技术通讯》 CAS 2014年第4期542-546,共5页
目的:以未修饰的原型蛋白为对照品,建立准确测定2种聚乙二醇化重组尿酸氧化酶(PEG-rUOX)含量的方法。方法:以原型蛋白rUOX为对照品,利用凝胶色谱法测定PEG-rUOX中的蛋白含量,通过详细的专属性、精密度、准确性等方法学考察,建... 目的:以未修饰的原型蛋白为对照品,建立准确测定2种聚乙二醇化重组尿酸氧化酶(PEG-rUOX)含量的方法。方法:以原型蛋白rUOX为对照品,利用凝胶色谱法测定PEG-rUOX中的蛋白含量,通过详细的专属性、精密度、准确性等方法学考察,建立该方法。色谱条件:采用TSK Gel 5000PWxl(300 mm×7.8 mm)凝胶色谱柱,以含0.15 mol/L氯化钠的0.05 mol/L的Tris-HCl溶液(pH9.0)为流动相,流速0.5 mL/min,柱温为室温,检测波长280 nm。结果:在280 nm下,2种rUOX在200~1000μg/mL浓度范围内线性关系良好(r2分别为1和0.9999),其高、中、低平均回收率均较高,为98.33%~99.96%。结论:本方法专属性、精密度和准确性良好,可作为PEG-rUOX的含量测定方法。 展开更多
关键词 聚乙二醇化重组尿酸氧化酶 凝胶色谱 蛋白含量
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痛风性关节炎诊疗简况 被引量:9
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作者 陈渊 李可大 《实用中医内科杂志》 2015年第6期176-179,共4页
痛风性关节炎西医治疗主要通过抑制尿酸生成(别嘌呤醇、非布索坦降)、促进尿酸排泄(丙磺舒、苯溴马隆)、尿酸吸附(爱西特)、分解(重组尿酸氧化酶)及双重功能药物(氯沙坦、醋酸己脲);急性发作期,非甾体抗炎药、激素、5-磷酸腺苷诱导低温... 痛风性关节炎西医治疗主要通过抑制尿酸生成(别嘌呤醇、非布索坦降)、促进尿酸排泄(丙磺舒、苯溴马隆)、尿酸吸附(爱西特)、分解(重组尿酸氧化酶)及双重功能药物(氯沙坦、醋酸己脲);急性发作期,非甾体抗炎药、激素、5-磷酸腺苷诱导低温,间歇期逐渐降低血尿酸水平,减少血尿酸突然大幅度波动;慢性期控制炎症,降低血尿酸值,保护受损脏器,矫正关节畸形,提高生活质量为主要目的;疗效有限,存在副作用。中药提取有效成分(如黄柏、穿山龙等)及辨证分型、复方及针灸理疗等联合治疗,疗效显著,副作用小,依从性高,但缺乏统一标准。痛风是终生性疾病,预防更显重要:1严禁高嘌呤食物;2限制饮酒;3控制体重;4多进食碱类食物5多饮水6积极治疗糖尿病、高血压、心血管疾病,肾功能不良等疾病;。7避免应用抑制尿酸排泄药。未来须深入研究中医药作用机制,为中医药治疗奠定基础。 展开更多
关键词 痛风性关节炎 代谢性疾病 抑制尿酸 别嘌呤醇 非布索坦 促进尿酸排泄 丙磺舒 苯溴马隆 尿酸吸附 苯溴马隆 爱西特 重组尿酸氧化酶 氯沙坦 醋酸己脲 中药提取物 黄柏 穿山龙 辨证分型 疾病预防
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微杆菌属ZZJ4-1菌株的耐热尿酸氧化酶基因的克隆及重组酶性质 被引量:6
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作者 张鹏程 卢向锋 +3 位作者 李倩延 林小清 刘辉 马晓航 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期813-822,共10页
为了研究微杆菌Microbacterium sp.ZZJ4-1菌株的耐热尿酸氧化酶(Uox)的性质,克隆其基因(uox),得到1个894 bp的开放阅读框。该基因与多数已报道的uox无明显同源性,仅与球形节杆菌Arthrobacterglobiformis的uox有72%的同源性。将基因插入... 为了研究微杆菌Microbacterium sp.ZZJ4-1菌株的耐热尿酸氧化酶(Uox)的性质,克隆其基因(uox),得到1个894 bp的开放阅读框。该基因与多数已报道的uox无明显同源性,仅与球形节杆菌Arthrobacterglobiformis的uox有72%的同源性。将基因插入质粒pET-15b构成pET-15b-uox表达载体,转化至Escherichiacoli BL21(DE3)中诱导表达。对重组Uox的主要理化性质研究表明:该酶由大小约为35 kDa的亚基组成;其最佳反应温度和pH分别为30℃和7.5;在65℃以下和pH 8.5~11.0范围内稳定;以尿酸为底物的Km值为0.22 mmol/L;Ag+、Zn2+、Cu2+和SDS均能完全抑制酶活,Tween 20、Tween 80和Triton X-100对酶活有一定的促进作用。该重组酶的耐热性是目前报道的重组Uox中最好的,这一特性有利于其在诊断治疗中的开发应用。 展开更多
关键词 重组尿酸氧化酶 克隆 序列分析 微杆菌 热稳定性
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微生物尿酸氧化酶的筛选、酶学性质及重组表达 被引量:8
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作者 咸静女 郭鑫 +4 位作者 李波 彭海波 汪小龙 张建业 陈刚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1147-1155,共9页
尿酸氧化酶(Urate oxidase,Uox)是一种催化尿酸氧化为尿囊素的酶,常用于尿酸的检测以及痛风和高尿酸血症治疗。文中从土壤中筛选出一株Uox高产菌株OUC-1,经16S rRNA部分基因序列分析,与苛求芽孢杆菌Bacillus fastidiosus序列相似度达99%... 尿酸氧化酶(Urate oxidase,Uox)是一种催化尿酸氧化为尿囊素的酶,常用于尿酸的检测以及痛风和高尿酸血症治疗。文中从土壤中筛选出一株Uox高产菌株OUC-1,经16S rRNA部分基因序列分析,与苛求芽孢杆菌Bacillus fastidiosus序列相似度达99%。B.fastidiosus OUC-1的Uox经纯化后,分析表明该酶反应最适pH和温度分别为10.0和40℃;Uox以尿酸为底物反应动力学参数K_m值为(0.15±0.04)mmol/L(n=5)。Mg^(2+)能够提高该酶性活性,而Zn^(2+)和SDS能强烈抑制该酶的酶活。参考GenBank中苛求芽孢杆菌基因组中的uox基因序列,成功扩增出uox基因,通过SWISS-MODEL对Uox空间结构进行预测,推测该酶是同源四聚体,单亚基分子量为35.38 kDa。文中将uox基因克隆并在大肠杆菌中表达,为后续的Uox的性能改造提供条件和技术支持。 展开更多
关键词 尿酸氧化酶 苛求芽孢杆菌OUC-1 酶学性质 重组尿酸氧化酶
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新型Y型聚乙二醇-尿酸氧化酶修饰物的制备及免疫原性和生物活性评价 被引量:4
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作者 张加慧 严忠海 +3 位作者 毛培江 刘翔 杨毅 高建青 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1045-1050,共6页
目的制备一种新型支链(Y型)聚乙二醇(Y-shape polyethylene glycol,PEG)修饰的尿酸氧化酶,并对该修饰酶的体外酶活性和稳定性,在大鼠体内药效学、药动学和免疫原性进行评估,为其临床研究给药方案的设计和优化提供依据。方法运用凝胶电... 目的制备一种新型支链(Y型)聚乙二醇(Y-shape polyethylene glycol,PEG)修饰的尿酸氧化酶,并对该修饰酶的体外酶活性和稳定性,在大鼠体内药效学、药动学和免疫原性进行评估,为其临床研究给药方案的设计和优化提供依据。方法运用凝胶电泳、高效液相色谱技术研究聚乙二醇修饰产物的理化特征,采用酶反应-紫外分光光度法对酶生物活性进行检测,结合ELISA方法分析修饰酶的免疫原性。以大鼠为模型,研究不同聚乙二醇修饰的尿酸氧化酶在体内的药动学。结果 Y型聚乙二醇尿酸氧化酶修饰物rUOX-mPEG2的表观相对分子质量比线性聚乙二醇修饰的产物rUOX-mPEG更大,聚乙二醇分子的修饰度更高,在相同温度和pH条件下的活性明显高于直链型聚乙二醇尿酸氧化酶修饰物。动物实验表明,该聚乙二醇-尿酸氧化酶修饰物在体内呈现良好的动力学特征,并在体内具有更长的药效维持时间。免疫原性实验结果也表明,Y型聚乙二醇修饰能有效降低免疫原性。结论 Y型聚乙二醇修饰尿酸氧化酶的酶学性质明显优于重组酶和直链型修饰的尿酸氧化酶,药效维持时间显著高于后者,免疫原性和国外品种采用的直链修饰尿酸氧化酶相当,且明显低于重组酶,在大鼠体内呈线性动力学特征。 展开更多
关键词 重组尿酸氧化酶 聚乙二醇修饰 Y型聚乙二醇 免疫原性 高尿酸血症 痛风
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重组猪尿酸氧化酶PEG化修饰的影响因素考察 被引量:2
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作者 朱莹莹 荣俊 +1 位作者 匡红艳 孙中杰 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1263-1268,共6页
目的:考察mPEG-SC与重组猪尿酸氧化酶(recombinant porcine urate oxidase,rPUOX)摩尔比值,碳酸缓冲液pH值和浓度,以及酶浓度对rPUOX PEG化的影响。方法:用mPEG-SC对纯化rPUOX进行PEG化修饰。通过酶残余活力测定和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电... 目的:考察mPEG-SC与重组猪尿酸氧化酶(recombinant porcine urate oxidase,rPUOX)摩尔比值,碳酸缓冲液pH值和浓度,以及酶浓度对rPUOX PEG化的影响。方法:用mPEG-SC对纯化rPUOX进行PEG化修饰。通过酶残余活力测定和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对修饰效果进行评估。结果:随着mPEG-SC/rPUOX摩尔比值的提高,修饰程度也提高。在pH 10.1及其以下的碳酸缓冲液中rPUOX修饰不充分,pH 10.5修饰效果最好,pH 11.6效果下降。碳酸缓冲液为0.02 mol.L-1时,rPUOX溶解不完全,0.06和0.1mol.L-1的溶解和修饰均比较理想,0.1 mol.L-1溶液中rPUOX残余活力较高。摩尔比值相同的条件下,随着酶浓度的提高修饰效果也提高,5 mg.mL-1的酶浓度更加适合修饰反应。结论:优化的rPUOX PEG化的条件是:mPEG-SC/rPUOX摩尔比值为18.6倍;碳酸缓冲液的pH值为10.5,浓度为0.1 mol.L-1;酶质量浓度为5 mg.mL-1。 展开更多
关键词 重组猪尿酸氧化酶 PEG化 摩尔比值 PH 缓冲液浓度 酶浓度
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尿酸氧化酶的表达纯化及活性形式鉴定 被引量:2
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作者 吴伟立 李彦英 +3 位作者 苗林 徐金森 方宏清 陈惠鹏 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2005年第2期124-126,131,共4页
目的:在大肠杆菌内表达具有活性的黄曲霉尿酸氧化酶。方法:用重叠PCR从黄曲霉(Aspergillusflavus)3.1398中钓取了尿酸氧化酶(urateoxidase,UO,EC1.7.3.3)基因,克隆到原核表达载体pET22b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选到高表达的重组转... 目的:在大肠杆菌内表达具有活性的黄曲霉尿酸氧化酶。方法:用重叠PCR从黄曲霉(Aspergillusflavus)3.1398中钓取了尿酸氧化酶(urateoxidase,UO,EC1.7.3.3)基因,克隆到原核表达载体pET22b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选到高表达的重组转化子菌株。经乳糖诱导目的蛋白表达,阴离子交换柱纯化,获得纯品。SDS PAGE分析样品纯度。用尿酸缓冲液测定酶活性,用戊二醛交联结合质谱法测定相对分子质量。结果:目的蛋白为胞内可溶性表达,表达量达菌体总蛋白的35%,纯化后的样品纯度达99%,其酶比活力可达35U/mg。经质谱测定重组UO单体的相对分子质量为34×103。交联后相对分子质量为160×103。结论:黄曲霉尿酸氧化酶可在大肠杆菌中可溶表达,并具有活性,其活性形式为四聚体。 展开更多
关键词 尿酸氧化酶 重组蛋白质类 大肠杆菌 共价交联 聚合酶链反应
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聚乙二醇化重组人尿酸氧化酶质控难点研究进展 被引量:1
9
作者 李勇 李晶 +2 位作者 甘一如 梁成罡 黄鹤 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期2019-2023,共5页
聚乙二醇化重组人尿酸氧化酶(PEG-UOX)是对重组人尿酸氧化酶(UOX)进行聚乙二醇修饰以降低其免疫原性和延长体内半衰期为目的的改构药物。由于它是聚乙二醇随机多位点修饰的蛋白药物,使得修饰后的蛋白质在理化性质以及体内外活性上的复... 聚乙二醇化重组人尿酸氧化酶(PEG-UOX)是对重组人尿酸氧化酶(UOX)进行聚乙二醇修饰以降低其免疫原性和延长体内半衰期为目的的改构药物。由于它是聚乙二醇随机多位点修饰的蛋白药物,使得修饰后的蛋白质在理化性质以及体内外活性上的复杂程度都远远超出重组人尿酸氧化酶。对于此类药物,目前国内外无标准化的质量分析方法。笔者通过整理、归纳近年来关于聚乙二醇修饰药物质控分析技术的文献,对聚乙二醇化重组人尿酸氧化酶的3个关键质量控制难点——聚乙二醇对重组人尿酸氧化酶的平均修饰率、修饰均一度以及聚乙二醇在重组人尿酸氧化酶上的修饰位点所涉及的分析手段进行了综述,以期对国内企业开发此药物提供技术指导。 展开更多
关键词 聚乙二醇 重组人尿酸氧化酶 平均修饰率 修饰均一度 修饰位点
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重组猪尿酸氧化酶基因突变及其对聚乙二醇化的影响 被引量:1
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作者 李欢 杨玉莹 +4 位作者 李国攀 王席 胡基雄 荣明轩 荣俊 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期941-948,共8页
目的对重组猪尿酸氧化酶(recombinant porcine urate oxidase,r PUOX)进行突变改造,以增加rPUOX上可供聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)耦合的赖氨酸(Lys)残基数,探究PEG修饰对改造前后的酶液在SPF鸡体内的药效和抗原屏蔽作用的影响... 目的对重组猪尿酸氧化酶(recombinant porcine urate oxidase,r PUOX)进行突变改造,以增加rPUOX上可供聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)耦合的赖氨酸(Lys)残基数,探究PEG修饰对改造前后的酶液在SPF鸡体内的药效和抗原屏蔽作用的影响。方法对纯化的基因改造前后的r PUOX进行PEG化修饰,修饰蛋白静脉注射SPF鸡,共4次,每次间隔7 d。实验分为20×5K PEG-rPUOX-215组、20×5K PEG-rPUOX组和空白对照组(0.9%生理盐水)。于鸡翼根静脉处采血,用血糖尿酸测试仪及尿酸测试条测定尿酸浓度,酶反应-紫外分光光度法检测尿酸酶活性,间接ELISA法检测免疫原性。结果 20×5K PEG-r PUOX-215和20×5K PEG-rPUOX均获得充分修饰,且前者修饰效果更好。第1、2次注射,降低鸡血尿酸幅度20×5K PEG-rPUOX-215组高于20×5K PEG-rPUOX组约11%和6%。3次注射药效维持时间20×5K PEG-rPUOX组相较于20×5K PEG-rPUOX-215组逐次降低0、24和48 h。20×5K PEG-rPUOX-215组抗体产生速率相对较慢,且14 d抗体阳性率低于20×5K PEG-rPUOX组约14.3%。结论 20×5K PEG-rPUOX-215修饰后药效学作用更显著,药物半衰期延长,且免疫原性相对较低,为研制低免疫原性的rPUOX及实现临床上多次给药提供了新的方法和思路。 展开更多
关键词 重组猪尿酸氧化酶 聚乙二醇化 尿酸浓度 尿酸酶活性 免疫原性
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猪-狒狒嵌合体尿酸氧化酶的表达、纯化及酶学性质研究
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作者 汪柯欣 王亚鹏 +3 位作者 路建光 杨桂英 化浩举 冯军 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1148-1154,共7页
报道了猪-狒狒嵌合体尿酸氧化酶(1)的发酵表达、分离纯化、活性测定及酶学性质分析。采用重组大肠埃希菌高密度发酵技术,以包涵体形式表达1,发酵产量为6.88 g/L。包涵体经碱溶液提取、阴离子交换柱色谱纯化后得到纯度为99.61%的目的蛋白... 报道了猪-狒狒嵌合体尿酸氧化酶(1)的发酵表达、分离纯化、活性测定及酶学性质分析。采用重组大肠埃希菌高密度发酵技术,以包涵体形式表达1,发酵产量为6.88 g/L。包涵体经碱溶液提取、阴离子交换柱色谱纯化后得到纯度为99.61%的目的蛋白,总酶活收率为78.95%。样品经质谱鉴定和酶活性分析,单亚基相对分子质量正确,比活达到6.25 u/mg,证明自制重组1在大肠埃希菌中成功表达,且具有降解尿酸的能力。本研究为1类药物的高效率制备提供了方法学借鉴。 展开更多
关键词 尿酸氧化酶 重组 表达 发酵 纯化 酶学性质
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