高通量红细胞血型基因分型的多重连接依赖的探针扩增技术在一例抗Di^a新生儿溶血病诊断中的应用

目的运用高通量红细胞血型基因的多重连接依赖的探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)辅助诊断一例罕见的由抗Di^a导致的严重核黄疸新生儿溶血病。方法运用传统的血型血清学方法对导致新生儿溶血病相关红细胞血型抗体进行鉴定,运用MLPA对患儿及其父母的超过40种红细胞血型抗原进行基因分型,对鉴定的抗体进行效价分析。结果血型血清学检测表明患儿体内含有针对某种低频抗原的抗体,MLPA基因分析结果提示母婴红细胞MNS血型系统及Diego血型系统抗原不匹配,可能存在抗N或抗Di^a,经进一步的血型血清学检测,证实母亲及患儿血清中存在抗Di^a,并且其母亲血清抗Di^a效价为1:32。结论抗Di^a可引起包括核黄疸在内的严重新生儿溶血病;高通量红细胞血型基因分型的MLPA技术能够协助并有效解决临床疑难样本稀有血型鉴定;针对国人的Di^a阳性的试剂红细胞应该常规应用于日常的抗体筛查工作中。

甲氧基聚乙二醇修饰人红细胞血型抗原的研究

红细胞输注是输血医学的主体,化学材料甲氧基聚乙二醇(mPEG)与红细胞膜共价结合后,可遮蔽红细胞表面血型抗原,使红细胞血型抗原呈阴性,即形成通用型红细胞,对临床输血具有重要意义。研究了mPEG修饰对红细胞血型抗原、膜流动性的影响;红细胞被修饰程度;mPEG与红细胞结合的稳定性;mPEG在体内的代谢情况。结果表明,mPEG能遮蔽红细胞上的血型抗原;mPEG与红细胞结合稳定;mPEG修饰红细胞的比率随浓度增高而增大;mPEG在小鼠体内24 h后基本被代谢,且在体内无蓄积。mPEG修饰的红细胞为解决临床急用稀有血型和配型困难(如自身溶血性贫血,AIHA)等问题提供了有意义的参考。

高通量MLPA基因分型技术在1个D^(el)表型家系基因鉴定中的应用

目的对1个Del表型家系作基因鉴定。方法运用血型血清学方法对先证者及其家系的3名成员作RhD及相关血型抗原鉴定;提取先证者及其父母和妹妹的静脉血DNA。运用高通量红细胞血型基因的多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)对先证者及其他成员血型基因作定性及定量分型;用PCR产物直接测序方法对发现的变异作确认。结果血型血清学检测:先证者为Del表型,其他3名家系成员为正常的RhD阳性个体。MLPA基因分型:先证者有2条包含1227G>A突变位点的RHD等位基因,而3名家系成员有1条包含1227G>A突变位点的RHD等位基因及1条正常的RHD等位基因。结论高通量红细胞血型基因分型的MLPA技术能够对Del表型作明确的基因鉴定,有助于节约宝贵的RhD阴性血液。

上海地区汉族人群红细胞稀有血型系统抗原基因的多态性研究

目的研究上海地区汉族临床输血人群8个红细胞稀有血型系统19种抗原基因多态性分布,提高配合性输注的能力。方法应用PCR-SSP方法进行血型抗原基因分型。结果Diego,Dombrock,Duffy血型系统抗原基因频率分别为:Dia=0.0351,Dib=0.9649;Doa=0.0614,Dob=0.9386;Fya=0.9649,Fyb=0.0351,Fy=0;均具有多态性。而Kell,Yt,Scianna,L-W,Colton血型系统抗原基因频率分布为单态性。经χ2检验,均符合Hardy-weinberg遗传定律。结论上海地区汉族临床输血人群Diego、Dombrock、Duffy血型系统抗原基因频率具有多态性,随机临床输血抗原不合率分别是0.0654、0.1086、0.0654,应引起高度重视。

乌鲁木齐地区哈萨克族献血人群红细胞稀有血型系统抗原基因的多态性研究

目的研究乌鲁木齐地区哈萨克族献血人群5个红细胞稀有血型系统13个抗原基因多态性分布,提高配合性输注的能力。方法应用PCR-SSP方法对128份乌鲁木齐地区哈萨克族无血缘关系献血者开展Kell（Kel）、Diego（Di）、Dombrock（Do）、Kidd（Jk）、Duffy（Fy）5种红细胞稀有血型系统基因分型。结果乌鲁木齐地区128名健康哈萨克族红细胞Kell、Duffy、Diego、Kidd、Dombroek血型系统各抗原基因频率分别为：k=0.988 3、K=0.011 7、Jsb=1.000 0、Jsa=0,Fya=0.668 0、Fyb=0.332 0、Fy=0,Dia=0.031 3、Dib=0.968 7,Jka=0.484 4、Jkb=0.515 6,Doa=0.273 4、Dob=0.726 6;各血型系统抗原不合率分别是2.29,34.52,5.88,37.48,31.84。经Hardy-Weinberg吻合度检验,Kell、Diego、Dombrock系统稀有血型系统基因型分布的观测值与期望值基本符合,但Duffy和Kidd系统差别有统计学意义（P〈0.05）。结论乌鲁木齐地区哈萨克族献血人群5个红细胞稀有血型系统基因分型中Duffy和Kidd的2个血型系统基因型分布的观测值与期望值相差较大,这为乌鲁木齐地区哈萨克族安全输血提供了有力保障。

保存期间试剂红细胞血型相关膜蛋白抗原性研究

目的研究红细胞膜蛋白抗原稳定性随保存时间变化。方法 D抗原、Fy^a抗原、Jk^a抗原、在保存节点（0、14、28、42 d）,对上述红细胞血型抗原抗原性进行检测。结果在标化后的抗体范围,使用国际标准抗体,应用流式细胞术,在42 d检出对比组之间的D抗原抗原性差异具统计学意义（下降11. 3%; P〈0. 05）; 42 d时,应用微柱凝胶卡,使用国际标准品（下降33%）、单克隆IgG-D（下降66%）、IgM-D（下降26%）,检出对比组之间的D抗原抗原性差异具统计学意义（P〈0. 01）,Fy^a抗原抗原性检出对比组之间的差异具统计学意义（下降33%,P〈0. 05）,Jk^a抗原抗原性未检出,对比组之间的差异具统计学意义。结论实验室应定期对谱细胞进行质控,对于弱抗体的检测宜使用较新鲜的谱细胞或新鲜细胞进行检测及确认。

O型洗涤红细胞残留ABO血型抗体检测及非O型患儿输注安全性观察

目的 采用多种血型血清学方法检测O型洗涤红细胞中残留ABO血型抗体（IgM抗-A,抗-B;IgG抗-A和抗-B）的含量,观察非O型患儿输注O型洗涤红细胞的安全性.方法 取O型洗涤红细胞上清,首先采用盐水试管法检测其中IgM抗-A、抗-B含量.再用凝聚胺法、微柱凝胶法、手工抗人球蛋白法检测其中IgG抗-A、抗-B含量.选取非O型患儿输注O型洗涤红细胞者（异型组）与年龄体重相当的输等量同型洗涤红细胞的患儿（同型组）,分别比较2组患儿输血前后血红蛋白上升幅度、总胆红素和直接胆红素水平、直接coombs试验结果.结果 共检测O型洗涤红细胞上清液597份,盐水试管法在室温及4℃ 条件下均未观察到凝集现象,显微镜下也未观察到凝集现象.凝聚胺法、微柱凝胶法、手工抗人球蛋白法检测IgG抗-A和抗-B均为阴性.2组患儿输血前后血红蛋白上升幅度、总胆红素和直接胆红素水平差异无统计学显著性意义（t值分别为0.19,0.22和0.13,P＞ 0.05）,直接coombs试验均为阴性.结论 血型血清学方法无法检出O型洗涤红细胞中残留ABO血型抗体.非O型患儿输注O型洗涤红细胞是安全的.

中国南京地区十个红细胞血型系统稀有抗原的大规模调查

本研究调查南京地区人群中稀有血型抗原的类型及分布情况,为稀有血型病人的临床用血和献血招募提供基础性资料。采用4M尿素对红细胞进行Kidd血型系统的Jk(a-b-)表型筛选;利用抗血清对H系统的H-、MNS系统的GPA-、Gerbich系统的GPC-、Ii系统的i+、Lutheran系统的Lub-表型进行筛选;对Kell系统的k-和Jsb-、Duffy系统的Fya-、Ok系统的Ok-、MNS系统的s-和Digeo系统的Dib-表型采用多重PCR的方法进行筛选。结果表明:在40337例标本中,筛选出2例Jk(a-b-)表型;在1 782例标本中,筛出Fy(a-b+)表型3例,尚未发现Fy(a-b-)的表型,也未发现Ok-、s-和Dib-表型。在2 002、2 003、2 084、10 189和10 004例标本中,未发现相应的GPA-、GPC-、Lub-、H-和i+稀有表型者。在2017例标本中,也未发现k-和Jsb-的表型存在。结论:南京地区人群中Jk(a-b-)表型频率为0.0049%,Fy(a-b+)表型频率为0.168%,在现有筛查人数中尚未发现所查其它血型系统稀有抗原的存在。

佛山地区无偿献血者红细胞血型不规则抗体筛查及鉴定结果研究

目的 对佛山地区 90000 例无偿献血者的血液进行不规则抗体筛查及鉴定 , 分析其筛查鉴定价值。方法 90000 例无偿献血者 , 均进行血型检查、不规则抗体初步筛查 , 对于初步筛查结果显示为阳性、ABO 正反定型不一致的献血者再次进行不规则抗体检测 , 对抗体[免疫球蛋白 G(IgG)、免疫球蛋白 M(IgM)]的类别进行鉴定。分析献血者血液标本不规则抗体阳性检出情况;比较不同性别、有无妊娠史献血者不规则抗体阳性率 , 不同献血次数、年龄献血者不规则抗体阳性率。结果 90000 例献血者中共筛查出不规则抗体阳性 58 例 (0.06%), 其中特异性抗体 48 例 , 抗体的主要类型为抗 -E、抗 -M其余 10 例为非特异性抗体 , 抗体的主要类型为冷自身抗体。90000 例献血者中女性不规则抗体阳性率为 0.10%(45/47011), 高于男性的 0.03%(13/42989), 差异有统计学意义 (P<0.05);且女性献血者中有妊娠史献血者不规则抗体阳性率为 0.15%(35/24081), 高于无妊娠史献血者的 0.04%(10/22930), 差异有统计学意义 (P<0.05)。90000 例献血者中初次献血者的不规则抗体阳性率 0.14%(37/27839) 高于献血次数≥2 次献血者的 0.04%(21/62161), 差异有统计学意义 (χ^(2)=29.335, P<0.05);不同年龄献血者不规则抗体阳性率比较差异有统计学意义 (P<0.05), 并且献血者的年龄越大 , 不规则抗体阳性率越高 , 凝集强度≤++ 的献血者高达 52 例 (89.66%)。结论 佛山地区无偿献血者血液中红细胞血型不规则抗体阳性率较低 , 以抗 -E、抗 -M 和冷自身抗体为主 , 血站需加强红细胞血型不规则抗体的筛查及鉴定。

温自身抗体干扰抗体鉴定的应对策略

目的探讨排除温自身抗体干扰的血清学方法应用于输血前相容性试验的效果。方法收集10例温自身抗体影响抗体筛查和抗体鉴定患者的血液标本(全血、血清各3 mL/例),用微热放散法、氯喹放散法或二硫苏糖醇和木瓜酶(ZZAP)试剂处理自身或同种异体红细胞,用处理后的红细胞吸收患者血浆中的自身抗体,并用吸收后的患者血浆及患者红细胞放散液行抗球蛋白法或聚凝胺法抗体鉴定,以确定自身抗体/同种抗体是否具有特异性。为存在同种抗体或特异性自身抗体的拟输血患者选用ABO/Rh同型且不含相应抗原的红细胞血液成分输注,并评估输血疗效。结果10例因原发性或继发性自身免疫性疾病导致产生的温自身抗体影响同种抗体筛查、鉴定的标本,经自身/异体吸收后均排除温自身抗体对标本同种抗体鉴定的影响,检出IgG同种特异性抗体3例(抗-e、抗-Jka、抗Wra)、特异性自身抗体1例(抗-Ce);10名患者中有6人接受输血治疗,其中4名有特异性抗体的患者输注不含相应抗原的成分血。6例分别输注悬浮红细胞2 U后,均为24 h Hb增加值>10 g/L,且均未发生溶血性输血反应,输血后贫血症状均有所改善。结论输血患者存在温自身抗体影响同种抗体鉴定时,采用合适的放散法和自体/异体吸收法可排除该种自身抗体的影响,准确鉴定抗体种类和性质,从而有针对性地给患者输血并确保疗效。

红细胞瞬间磁化试剂的制备与应用

目的研制用于ABO、RHD血型检测试剂的红细胞瞬间磁化试剂。方法采用共沉淀法制备磁性粒子,并检测其主要成分及粒径大小,用此磁性粒子制备红细胞瞬间磁化试剂,并分别进行各项检测。结果磁性粒子的主要成分为四氧化三铁,粒径100nm左右。该试剂的外观及特异性均合格,磁响应时间不超过30s,重复性较好,敏感性为98.20%,与试管法检测结果比较,差异无显著意义。结论红细胞瞬间磁化试剂可用于红细胞系统的血型检测。

化学材料修饰红细胞非ABO系统血型抗原的研究

目的 考察甲氧基聚乙二醇 (mPEG)衍生物与红细胞膜蛋白共价结合 ,遮蔽红细胞上的非ABO系统的血型抗原的效果。方法 选择 3种端基的mPEG衍生物 (mPEG BTC、 NHS、 ALD)修饰红细胞 ,分别观察它们对红细胞抗原性、形态结构及功能的影响。结果 携带BTC端基的mPEG遮蔽抗原效果较好 ,并对红细胞结构、功能、变形性无影响 ;而且修饰后的红细胞无叠连现象 ,红细胞沉降率 (ESR)有所降低。结论 mPEG修饰后的红细胞在解决临床输血中经常遇到的偏型、血型。

通用O型全血的初步研究

目的探讨冰冻干燥红细胞膜的制备技术及通用O型去除血型抗体全血的可行性。方法将A型及B型红细胞膜经过冰冻干燥处理后,加入O型全血中,经反应后测定血浆中血型抗体效价,并检测红细胞结构及功能,检测血浆中凝血因子活性变化。结果经过冰冻干燥处理后,红细胞膜仍具有抗原性,可有效降低血浆中的血型抗体效价,而全血中红细胞的变形指数、ATP含量与反应前差异无显著性,反应前后均在正常参考范围内;全血血浆中各种凝血因子活性在吸附前后比较,差异无显著性。结论尽管红细胞膜在体内是否产生大量抗体及其清除过程等尚需进行动物实验确定,但使用冰冻干燥红细胞膜制备通用型血液过程简便易行,具有进一步的研究价值。

ABO血型不合异基因造血干细胞移植患者ABO血型抗体的监测

目的:监测ABO血型不合造血干细胞移植患者IgM型和IgG型ABO血型抗体的变化,研究这些变化在移植患者血型转变中的作用。方法:用凝聚胺法和微柱凝胶法监测32例移植患者ABO血型,IgM型和IgG型ABO血型抗体的变化。结果:32例ABO血型不合患者血型全部转变为供者型,造血重建时间结果分析表明血型不合对于粒系和血小板的恢复无影响;患者血型转为供者血型后,其血清中缺乏相对应的抗体;32例ABO血型不合患者中有6例供受者移植模式为A→O,其中有3例发生PRCA,且均检出IgG型抗A抗体,其余29例未检测到IgG血型抗体;3例PRCA患者红系造血恢复时间明显延长。结论:IgG型ABO血型抗体可能会抑制ABO血型不合骨髓移植患者的红系分化成熟,在PRCA的发生中可能起重要作用。监测ABO血型不合移植患者体内的ABO血型抗体变化可指导输血治疗,避免溶血性输血反应。

造血干细胞移植患者红细胞输血效果的影响因素分析

目的分析造血干细胞移植患者红细胞输血效果的影响因素,提高输血效果。方法通过临床输血管理系统,回顾性分析2016年1~12月造血干细胞移植患者输血前后基本信息及血液信息,以红细胞输注前后血红蛋白变化为因变量,其他调查指标为自变量,应用多因素线性回归模型,计算红细胞输血效果的影响因素。结果89例造血干细胞移植患者,共输注红细胞409次,影响红细胞输血效果的因素包括患者输血前脉搏、身高、体重、单次红细胞输血量、红细胞保存天数。结论造血干细胞移植患者应尽量选择保存天数较短的红细胞输注,对处于血型转型期的患者,应根据具体血清学格局制定个体化的输血策略输注红细胞。

A→O血型转变制备通用型红细胞过程中残留α-N-乙酰半乳糖胺酶检测方法的建立

目的:建立一种检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法。方法:利用α-N-乙酰半乳糖胺酶的特异性兔多抗和抗His的单抗,采用间接ELISA法,建立检测微量α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,并用此方法检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留的α-N-乙酰半乳糖胺酶。结果:建立了检测微量α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,该方法的检测下限为1 ng/mL;通过对洗涤后的红细胞和洗涤液中残留酶量的检测,确定经过4次洗涤后,残留酶量达到检测水平以下。结论:本方法的建立,为血型转变的通用型红细胞的安全性评价提供了检测方法,并为进一步的临床应用奠定了基础。

广州地区青年和老年人群血细胞参数的对比研究

目的探讨广州市正常青年和老年人群静脉血细胞参数的参考值范围。方法随机抽样报考广州市公务员体检人数403人和退休公务员体检390人，使用Cell—Dyn3700血液分析仪检测血细胞参数。结果各参数的参考范围（均值）如下：白细胞计数老年男组（3．31～9．37）×10^9／L（6．34×10^9／L），青年男组（3．27～9．81）×10^9／L（6.54×10^9／L），老年女组（3.12～8．10）×10^9／L（5，61×10^9／L），青年女组（2.96～8．99）×10^9／L（5．97×10^9／L）；红细胞老年男组（3．71～5．75）×10^12／L（4．73×10^12／L），青年男组（4.36～6．12）×10^12／L（5．24×10^12／L），老年女组（3．58～5．03）×10^12／L（4．31×10^12／L），青年女组（3．61～5．47）×10^12／L（4．54×10^12／L）；血红蛋白浓度老年男组（112．72～160．21）g/L（136．47g/L），青年男组（125．71～169．24）g／L（147.48g／L），老年女组（105．53～144．56）g/L（125，05g/L），青年女组（97．21～156．87）g/L（127．04g／L）。老年男组与青年男组比较：RBC、HGB、PLT、HCT、MCV、MCH和PCT均P〈0．01；WBC则P〉0．05。老年女组与青年女组比较：RBC、PLT、MCV、MCH、PCT、PDW、MPV均P〈0．01；WBC则0．01〈P〈0．05。老年男组与老年女组比较：PLT为P〈0．01，青年男组与青年女组比较：PLT为P〈0．01。结论青年成人和老年成人多项血细胞参数比较有高度显著性差异．有必要建立两者的参者值范围。

兰州市RhD(-)冰冻红细胞库运行情况调查分析

目的了解兰州市RhD(-)冰冻红细胞库建立以来运行情况,以便提高性改进,更好保障临床RhD(-)血型患者用血。方法调查2011—2016年本中心所有RhD(-)血液采供血数据,统计分析RhD(-)血型检出率、RhD(-)RBC临床应用情况及冰冻红细胞库发展动态。结果兰州市2011—2016年无偿献血检验合格的RhD(-)RBC,81.60%入(4±2)℃动态贮存库供应临床日常所需,18.40%制备成冰冻红细胞入RhD(-)冰冻红细胞库,RhD(-)冰冻红细胞入库量呈逐年下降趋势,解冻去甘油红细胞出库量则大幅增长。结论兰州市RhD(-)冰冻红细胞库2011—2013年运行良好,完全可以保障临床RhD(-)血型患者急救用血,2014年开始进入入不敷出的状态,需采取各种措施来保障RhD(-)冰冻红细胞库的健康发展。

微柱凝胶技术在新生儿溶血病中的应用

目的:探讨微柱凝胶技术在ABO新生儿溶血病中的应用。方法:以微柱凝胶技术对200例患儿进行血型鉴定及直接抗人球蛋白实验,间抗,以及红细胞系统血型抗体(热放散实验).结果实验时间短,判定直观,灵敏度及特意性高,微柱凝胶技术可以检出试管法不能检出的阴性血样。结论:微柱凝胶技术能快速准确的检出ABO新生儿溶血病,是直观可靠的方法。实验样本少,重复性好。

ABO血型抗体吸附剂:冻干红细胞膜的初步研究

目的制备冰冻干燥红细胞膜,探索其作为ABO血型抗体吸附剂去除血型抗体、制备通用型红细胞的可行性。方法收集A、B型红细胞膜,作冰冻干燥处理,与O型血浆中血型抗体反应后,检测血浆中抗体效价,评价其对血浆抗体的吸附效果;检测红细胞结构、功能及血浆中凝血因子活性变化,评价冻干红细胞膜与红细胞及凝血因子的兼容性;采用离心的方法去除残留的冻干红细胞膜。结果冰冻干燥红细胞膜上的抗原可有效吸附血型抗体、降低血浆中的血型抗体效价,全血中红细胞的变形指数、ATP含量,与反应前比较差异无统计学意义(P>0.05),反应前后均在正常参考范围内;全血血浆中各种凝血因子活性在吸附前后比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。采用离心法可去除冻干红细胞膜,清除率约为77%。结论冰冻干燥的红细胞膜保持了很好的抗原性,作为ABO血型抗体的吸附剂能够有效去除ABO血型抗体;冰冻干燥红细胞膜不影响其中红细胞和凝血因子的理化性状和生物活性,并可通过离心的方法去除。