红三叶草提取物对奶牛体外瘤胃发酵中微生物多样性及尿素分解的影响

旨在通过体外发酵研究红三叶草提取物对瘤胃微生物组成和尿素代谢的影响。试验分为空白对照组(不添加红三叶草提取物)和添加红三叶草提取物处理组,采集3头健康奶牛瘤胃液混合均匀,进行体外发酵培养。分别在培养0、0.5、1、2、4、6、24 h收集发酵液样品,测定尿素、氨氮(NH_(3)-N)、微生物蛋白、总游离氨基酸的含量。利用16S rRNA基因测序揭示瘤胃微生物多样性、群落组成及功能的变化。本研究发现,红三叶草提取物处理组在发酵4 h内显著降低尿素分解速率,在发酵至2 h后显著降低氨氮含量,在发酵6 h后显著提高瘤胃微生物蛋白的含量,对总游离氨基酸含量无显著影响。16S rRNA基因测序结果显示,添加红三叶草提取物显著增加了体外发酵中微生物α多样性的Chao 1和Shannon指标,改变了体外发酵中瘤胃微生物群落结构。添加红三叶草提取物改变了瘤胃蛋白分解菌瘤胃杆菌属(Ruminobacter)、普雷沃氏菌属(Prevotella)中ASV 35和s_unidentified_rumen_bacterium_RF18的丰度,降低了致病菌嗜胆菌属(Bilophila)的丰度。综上所述,添加红三叶草提取物可降低瘤胃微生物分解尿素的速率,提高瘤胃微生物利用氨氮转化为自身蛋白的能力。

红三叶多糖的酶提取方法及抗氧化活性研究

红三叶是全世界种植范围较广的多年生豆科牧草,资源丰富,其多糖成分具有良好的降血糖和抗氧化活性,具有高附加值开发与利用的前景。酶提取条件相对温和,有利于提高多糖活性。本研究考察了酶解时间、酶用量、酶比例、酶解温度4个因素对红三叶多糖提取的影响。利用正交试验对提取条件进行优化筛选,确定酶提取方法为:酶解时间90 min,酶用量1.0%,酶解温度60℃,酶比例为木瓜蛋白酶∶纤维素酶∶果胶酶7∶2∶2,红三叶粗多糖含量为8.85%。本研究比较了酶提取以及文献中超声和热水提取,3种方法所制备红三叶多糖的理化性质和抗氧化活性。3个多糖提取样品均具有抗氧化活性,对O_(2)^(·-)自由基的清除活性明显高于阳性对照抗坏血酸。不同多糖提取样品的分子量范围差异明显,以酶提取和热水提取较为集中。3种多糖样品均由8种单糖组成,其中葡萄糖(Glu)、半乳糖(Gal)和阿拉伯糖(Ara)摩尔占比相对较高,约占到单糖组分的3/4。但单糖比例差异较大,酶提取多糖中Glu摩尔百分比最高,是热水提取多糖的1.6倍,超声提取的1.4倍。

红三叶预加工废水中叶绿素的提取及其稳定性研究

以红三叶鲜青草预加工废水为原料,研究提取叶绿素的方法。首先,采用醇沉法沉降红三叶预加工废水中的有机物;其次,采用醇提法浸提沉淀物中的叶绿素,并通过单因素及正交实验对提取条件进行了优化。结果显示,从废水中沉降有机物的最佳乙醇浓度为30%,固形物沉降率为39.45%;从沉淀物中浸提叶绿素的最佳条件为乙醇浓度90%、浸提温度60℃、浸提时间6h和料液比1∶25(g/mL),叶绿素提取率为1.72mg/g。稳定性研究表明,该方法制备的红三叶叶绿素具有良好的耐热性和抗氧化性,在弱酸、弱碱条件下较稳定,Fe2+有助于其稳定性的提高,在光照条件下易发生降解。

高效液相色谱法荧光检测红车轴草提取物中的苯并(α)芘

目的：建立高效液相色谱法荧光检测红车轴草提取物中苯并（α）芘的测定方法。方法：以乙腈-水（70∶30）为流动相,流速为1.0 mL.min^-1,Hypersil C18色谱柱,荧光检测器检测,激发波长（Ex）为368 nm,发射波长（Em）为405 nm。结果：在0.93-37.2 ng.mL-1内峰面积和浓度呈良好线性关系,样品平均回收率为85.2%（n=9）。结论：本法可以快速、准确地测定红车轴草提取物中的苯并（α）芘。

不同浓度花浸提液对红三叶种子化感作用研究

以普通红三叶种子为受体,选取新鲜红三叶植株的花,设计了0.025 g/m L(DW)、0.05 g/m L(DW)、0.075 g/m L(DW)、0.10 g/m L(DW)、0.15 g/m L(DW)、0.20 g/m L(DW)6种不同浓度的水浸提液,研究了红三叶的花浸提液对其自身种子发芽势、发芽率、幼根长和下胚轴长的化感影响。结果表明:红三叶的花能够分泌出化感物质,对种子发育具有化感作用。不同浓度的红三叶浸提液对种子的发芽势、发芽率表现出"低促高抑"的现象;不同浓度红三叶花浸提液的化感物质对种子的幼根具有极强的抑制作用(p<0.01),而对下胚轴长既具有抑制作用又有促进作用。

红车轴草提取物对小鼠淋巴细胞活化与增殖及巨噬细胞分泌NO的影响(英文)

探讨红车轴草提取物(RCE)在体外对小鼠T淋巴细胞和巨噬细胞的影响。MTT法检测RCE对细胞的毒性作用。荧光抗体染色结合流式细胞术检测RCE对T淋巴细胞在Con A的刺激下表达活化抗原CD69、CD25、CD71的影响。CFDA-SE标记技术结合流式细胞术分析RCE对T淋巴细胞在Con A诱导下增殖情况的影响。Griess法检测RCE对小鼠巨噬细胞在LPS刺激24 h后分泌NO的影响。RCE对小鼠有潜在的抗炎作用。RCE对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞的细胞毒作用很小。不同质量浓度的RCE能够很好的抑制过量的炎症相关信号分子表达,如NO,CD69,CD25,CD71,且呈剂量依赖性。RCE能够抑制T淋巴细胞的增殖。数据显示RCE可能通过对小鼠淋巴细胞活化与增殖及巨噬细胞NO分泌的抑制展示其抗炎效应。

红三叶总异黄酮提取研究

本研究采用乙醇溶剂浸提,结合超声波辅助提取豆科牧草红三叶中的异黄酮。通过对提取剂乙醇浓度、提取温度、提取时间和料液比4因素3水平的正交试验,得出苜蓿异黄酮最佳提取条件为:预浸8h,乙醇浓度70%,料液比1∶25,提取温度70℃,提取时间1h。在此条件下红三叶异黄酮的提取量为24.6mg/g,粗提物得率为24.74%,粗提物纯度为5.99%。

超声波法提取红三叶草总异黄酮的研究

通过单因素考察及正交实验优化了用超声波法提取红三叶草总异黄酮的实验条件,并与醇提法进行了比较。正交实验结果显示,当超声功率为250W、超声时间为40min、超声温度为70℃、溶剂浓度为60%、料液比为20g/mL时,红三叶草总异黄酮得率和含量分别达47.52mg/g和21.46%。与醇提法相比,分别提高了22.25%和72.93%。

红三叶根浸提液的化感潜力初探

试验以普通红三叶种子为受体,选取新鲜红三叶植株的根,设计了0.025、0.05、0.075、0.10、0.15、0.20g/mLDW六个不同浓度的水浸液,研究了红三叶根浸提液对其自身种子的化感影响。结果表明:红三叶存在化感作用,且根浸提液的化感作用强度不同。总体来讲,不同浓度的红三叶根浸提液对种子的发芽率、发芽势影响作用微弱;红三叶根浸提液对种子的幼根发育具有极强的抑制作用(P<0.01),且比对发芽率、发芽势的作用明显;红三叶根浸提液对子叶重量无显著影响(P>0.05)。

红三叶(Trifolium pratense L.)浸提液对种子的化感效应

以普通红三叶种子为受体,采用培养皿滤纸法,初步研究了红三叶对6种不同浓度(0.025,0.05,0.075,0.10,0.15,0.20g/mL)叶浸提液的化感响应。结果表明,红三叶的叶浸提液对其种子的发育具有不同程度的化感影响。红三叶不同浓度的叶浸提液对种子发芽势表现出"低促高抑"的浓度效应,而对发芽率表现出一定的抑制作用;红三叶不同浓度的叶浸提液对胚根长具有极强的抑制作用(p<0.01),而对下胚轴长既具有抑制作用又有促进作用,且在一定浓度范围内表现出"低促高抑"的现象。

微波辅助萃取红三叶草总异黄酮的研究

通过单因素及正交实验优化了微波法提取红三叶草总异黄酮的实验条件。正交实验结果显示,当微波功率为800W、微波时间为6min、微波温度为70℃、溶剂浓度为55%、液固比为10mL/g时,红三叶草总异黄酮得率和含量分别达27.78mg/g和7.72%。与醇提法、超声波法提取相比,微波法提取具有用时短、溶剂消耗少、选择性好及操作方便等特点。

均匀设计优化微波-超声波法提取红车轴草总黄酮的研究

采用均匀设计法,固定微波-超声波条件(超声波250W,微波用温控),以乙醇为溶媒,以总黄酮含量为指标,考察了料液比、溶媒浓度、提取温度、提取时间对提取总黄酮的影响,并对红车轴草总黄酮提取工艺进行优化。结果发现,最佳提取工艺为乙醇浓度85%、提取温度80℃、提取时间70min、料液比1∶15。

水花生不同部位水浸液对红三叶种子萌发的影响

以草坪草红三叶为受体,初步研究了水花生不同部位(根、茎、叶)、不同浓度(0、10、20、30、40 g/L和50 g/L)的水浸液对其的化感作用。结果表明:与对照相比,所有部位的水花生水浸液对红三叶的发芽率及幼苗生长(根长和苗长)均表现出相同的趋势,即随着水浸液浓度的增加,三者所受的抑制作用也有所增强;而在同一浓度下,水花生水浸液对红三叶种子萌发及幼苗生长的影响强度顺序均为茎>叶>根。

红车轴草提取物对脂多糖应激断奶仔猪生长性能和炎性介质的影响

为研究红车轴草提取物(RCE)对脂多糖(LPS)应激的断奶仔猪生长性能和炎性介质的影响,本试验选用30头健康、平均体重为(6.86±0.14)kg的(21±1)日龄(杜×长×大)断奶仔猪,按照随机区组设计设5个处理,每个处理6个重复,每个重复1头仔猪.5个处理组仔猪分别饲喂基础日粮(非应激空白对照组)、基础日粮+LPS(LPS组)、基础日粮+LPS+0.05%RCE(0.05%RCE组)、基础日粮+LPS+0.10%RCE(0.10%RCE组)、基础日粮+LPS+0.20%RCE(0.20%RCE组).试验期21 d.在试验第7、14天,LPS组和0.05%、0.10%、0.20%RCE组仔猪每千克体重注射80μg LPS,空白对照组注射等量的生理盐水.结果表明:(1)试验第1-7天(即LPS应激前),与空白对照组、LPS组相比,0.10%RCE组仔猪的日增重显著升高(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05),而0.05%和0.20%RCE组的日增重和料重比与空白对照组、LPS组相比无显著差异(P>0.05);试验第7-21天(即注射LPS两次之后),与空白对照组相比,LPS组的日增重和日采食量显著降低(P<0.05),料重比显著提高(P<0.05),而0.05%、0.10%和0.20%RCE组的日增重和日采食量有所下降,但差异不显著(P>0.05).(2)在第7、14天注射LPS后,与空白对照组相比,LPS组仔猪血清中的IgG含量显著降低(P<0.05),血清中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子TNF-α的含量均显著提高(P<0.05).与LPS组相比,0.05%RCE组的IgG、IL-6和TNF-α含量差异不显著(P>0.05);0.10%和0.20%RCE组的IgG含量均显著提高P<0.05),IL-6和TNF-α含量均显著降低(P<0.05);以添加0.10%RCE缓解仔猪应激效果最为明显,与LPS组相比,IgG含量提高38.65%(P<0.05),IL-6含量降低32.81%(P<0.05),TNF-α含量降低24.68%(P<0.05).可见,日粮中添加RCE可在一定程度上缓解LPS刺激导致的断奶仔猪生长性能和炎性细胞因子分泌的改变,以添加0.10%RCE效果最好.

北亚热带区红三叶自毒效应潜势初探

试验以昆明小哨示范牧场红三叶种子为受体,分别选取红三叶茎、叶、花3个部位,设计了0.025g/mL、0.05g/mL、0.075g/mL、0.10g/mL、0.15g/mL、0.20g/mL不同浓度的浸提液,研究了红三叶不同部位不同浓度浸提液对其自身种子下胚轴长、幼苗长和幼根长的化感影响。结果表明:红三叶存在具有浓度效应的自毒作用,且不同部位不同浓度的浸提液化感作用强度不同;红三叶浸提液对下胚轴长产生促进作用;而对幼根长和幼苗长产生不同程度的抑制作用,且对幼根的抑制作用更明显。

红三叶草提取物中四种异黄酮的HPLC检测方法

本研究的目的是建立一种可以同时测定红三叶草提取物中大豆苷元、染料木素、刺芒柄花素和鹰嘴豆素A含量的高效液相色谱检测方法。采用χBridge C18(250 mm×4.6 mm,5μm,Waters)色谱柱,以甲醇(A)和10 mmoL磷酸氢二钠溶液(B)为流动相,流速为1 mL/min,进样量为10μL,在不同的洗脱梯度、检测波长和柱温下检测四种异黄酮的含量。确定了最佳色谱条件:柱温为40℃,检测波长为270 nm,洗脱梯度为:0~5 min,20%~40%A;5~20 min,40%~75%A;20~23 min,75%~100%A;23~26 min,100%A;26~26.5 min,100%~20%A;26.5~35 min,20%A。结果表明:四种异黄酮在浓度为1~50μg/mL时具有良好的线性关系(R2>0.999),保留时间稳定,精密度和稳定性的相对标准偏差(RSD)均小于2%,加标回收率为96%~100.10%。建立的检测方法符合分析方法学评价的要求,可用于同时检测红三叶草提取物中的鹰嘴豆素A等四种异黄酮。

红车轴草提取物对db/db小鼠糖脂代谢的影响

探讨红车轴草异黄酮提取物(red clover extract,RCE)对雄性db/db 2型糖尿病小鼠糖脂代谢的影响。选用6周龄db/db实验小鼠,随机分成三组,每组4只。每日一次定时定量灌胃,每周测其血糖水平。结果表明,用10和50 mg/kg/day剂量的RCE处理小鼠5 w后,血糖水平分别比未处理组显著降低了40.90%(P<0.01)和50.38%(P<0.001),血清甘油三酯比未处理组降低了47.57%(P<0.01)和43.47%(P<0.01),血清总胆固醇比未处理组降低了35.59%(P<0.05)和35.19%(P<0.05)。同时实时荧光定量RT-PCR结果显示50 mg/kg/day RCE处理组db/db小鼠肝组织APOC3的mRNA表达水平比未处理组显著下降了54.9%(P<0.05)。这些结果说明了红车轴草异黄酮提取物可能通过抑制肝APOC3的表达改善2型糖尿病小鼠的血脂水平。

纤维素酶提高红三叶草醇提物体外抗氧化活性的研究

红三叶草粉末经70%乙醇室温提取、43℃减压浓缩,过大孔吸附树脂柱,再先后用蒸馏水和70%乙醇洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压浓缩得红三叶草醇提物。为了提高红三叶草醇提物体外抗氧化活性,将红三叶草醇提物与纤维素酶在50℃恒温条件下反应30min,比较酶解前后红三叶草醇提物的清除DPPH自由基能力和还原力。结果表明:在相同的浓度下,经纤维素酶处理后的红三叶草醇提物抗氧化能力要高于未被处理的红三叶草醇提物。

顶空气相色谱法测定红三叶提取物中乙醇与正己烷溶剂残留量

目的:建立顶空气相色谱法测定红三叶草提取物中乙醇与正己烷残留量的测定方法。方法:以HP-INNOWax(30 m×0.25 mm,0.25μm)为色谱柱,FID检测器结合顶空进样器进行气相色谱分析。结果:在优化条件下,方法的线性较好,乙醇与正己烷的加标回收率分别为99.23%与98.77%,相对标准偏差小于5%。结论:本方法可以快速、准确的测定红三叶草提取物中的乙醇与正己烷的残留量。