红螯螯虾幼虾对4种水稻农药耐受性研究

为了解稻田常用的生物农药或杀虫剂对红螯螯虾大规格幼虾的毒性效应,测定了中生菌素、氯虫·噻虫嗪、噻唑锌和井冈霉素A对其的急性毒性反应。结果表明:4种农药对红螯螯虾大规格幼虾96 h半致死浓度分别为19.66、1.65、1132.83、2092.07 mg/L。安全浓度分别为5.65、1.27、260.40、248.11 mg/L,根据耐受性和行为特征观察发现,4种药物对于4 cm左右的红螯螯虾幼虾的毒性大小依次为氯虫·噻虫嗪>中生菌素>噻唑锌>井冈霉素A,根据国家标准(GB/T16310.5—1996),噻唑锌和井冈霉素A对于4 cm红螯螯虾幼苗属于无毒农药,中生菌素属于微毒农药,而氯虫·噻虫嗪为中毒农药。本试验明确了红螯螯虾幼虾对水稻常用农药的耐受性,为红螯螯虾-水稻综合种养过程中的病害防治工作提供参考。

淡水与半咸水养殖红螯螯虾肌肉营养成分研究

为探究养殖水体盐度对水产养殖动物的肉质营养的影响,对使用同种饲料养殖的2种红螯螯虾(淡水与半咸水)进行肉质基本营养成分、脂肪酸组成及含量、氨基酸组成及含量分析。研究结果表明,半咸水组虾肌肉的粗蛋白、粗脂肪、灰分、水分、氨基酸总含量以及不饱和脂肪酸的含量均低于淡水养殖组,而必需氨基酸占总氨基酸的比例、饱和脂肪酸以及油酸含量均高于淡水组。2种不同养殖环境的红螯螯虾肌肉的氨基酸组成中,含量最高的2种均为精氨酸、谷氨酸,该研究为不同养殖环境提升红螯螯虾养殖品质提供理论依据。

红螯螯虾雌雄间性个体性腺转录组特征分析

为研究红螯螯虾雌雄间性个体与正常个体之间的差异,对红螯螯虾雌雄间性个体和正常个体的精巢和卵巢运用Illumina Novaseq 6000进行转录组测序,同时借助生物信息学开展功能基因预测和基因表达对比分析。通过测序和组装,共获得83.79 Gb质控碱基,各样品质控碱基均达到6.29 Gb以上,Q30碱基百分比在94.25%以上,组装得到的Unigene个数为53077,转录本个数为73588。基因/转录本与6大数据库比对上的比例为18.17%~36.07%。基因表达分析结果表明:样本间共表达的Unigene数为3543个,不同个体卵巢的表达量相关系数最大,不同个体精巢的表达量相关系数次之,卵巢和精巢之间表达量相关系数最小;正常个体的卵巢和精巢与不同雌性间性个体的精巢和卵巢的基因表达量存在差异,累计差异表达的基因有310个。研究认为,红螯螯虾雌雄间性个体不仅在外部形态上与正常个体存在差异,在性腺的转录水平上也存在着差异,且不同类型的雌雄间性个体与正常个体之间的差异程度不同。

3种稻田除草剂对克氏原螯虾的急性毒性效应

为探明稻田常用除草剂对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)的急性毒性效应,采用半静态试验方法,研究氢氟草酯(茎叶除草剂)、五氟磺草胺(芽前除草剂)和氟酮磺草胺(芽前除草剂)3种除草剂商品制剂对克氏原螯虾幼虾的急性毒性效应。结果表明:氢氟草酯、五氟磺草胺对克氏原螯虾幼虾的96 h半致死浓度(LC50)分别为0.602 5 mg∕L、40.622 5 mg∕L,氟酮磺草胺对克氏原螯虾的96 h半致死浓度大于100 mg∕L。3种农药对克氏原螯虾幼虾的毒性大小依次为:氢氟草酯>五氟磺草胺>氟酮磺草胺,其中氢氟草酯对克氏原螯虾幼虾的毒性等级为高毒,五氟磺草胺和氟酮磺草胺对克氏原螯虾幼虾均为低毒。研究认为,五氟磺草胺和氟酮磺草胺可在稻-虾共作生产中按常规剂量使用,而氢氟草酯按常规剂量(推荐使用最高剂量为0.209 9 mg∕L)使用可能存在较大的风险,应注意施用方法和对施用剂量的控制。

三省藕虾养殖模式水环境质量监测研究及成本核算

为有效解决目前渔业养殖水体存在的高污染、高排放问题,确保水产品的品质和产量,提出藕虾养殖模式。通过测定TP、TN、NH_(3)-N、Chl-a等主要水质指标,对湖北省、安徽省和江苏省藕虾养殖模式水环境质量和成本核算进行分析总结。结果表明,藕虾养殖模式随养殖时间的延长,养殖水体中的TP、TN、Chl-a、COD_(Mn)等水质理化指标均呈上升趋势。在整个养殖过程中,养殖水体的综合营养状态指数呈先上升后降低的趋势。兴化沙沟和扬州宝应3号藕虾共作养殖池的经济效益偏高,扬州宝应藕虾共作1号、2号和3号养殖池的环境效益较低。扬州宝应藕虾共作区3号养殖池经济效益高,且环境效益低于其他养殖池,从综合效益看,推荐小龙虾养殖密度为300 kg/hm^(2)、藕的种植密度为4500 kg/hm^(2)的藕虾养殖模式。

Identification of quantitative trait loci for growth traits in red swamp crayfish(Procambarus clarkii)

Genetic breeding is an important approach to improve the economic traits of aquaculture animals.Unfortunately,the genetic basis for important economic traits of red swamp crayfish,including growth-related traits,has not yet been reported.In the present study,two full-sib families and two natural populations were employed to identify quantitative trait loci(QTLs)for growth-related traits of red swamp crayfish.In total,28 QTLs for five growth-related traits,including body weight,body length,carapace length,carapace width,and abdomen length,were repeatedly identified in more than two families/populations,by means of association analysis;nine of these displayed a heterosis effect.The phenotypic variations of the five investigated traits explained by the 28 QTLs ranged from 4.2%to 19.0%.Eight additive and three heterosis QTLs were further successfully validated using comparative analysis of favoured alleles between the small and big size crayfish groups in the natural population.In conclusion,this study investigated the genetic basis of growth-related traits in red swamp crayfish,which is of great significance for their application in the future molecular breeding of the species.

雌雄红螯螯虾染色体核型比较分析

为获得精确的染色体数目、臂长信息等数据来辅助红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)染色体水平的基因组组装,同时也为深入了解其细胞遗传学特征,特对雌、雄红螯螯虾的染色体核型差异进行分析。以红螯螯虾肝胰腺和精巢组织为材料,筛选秋水仙素最佳作用时长,采用低渗和空气干燥的方法制备染色体标本,分别从雌雄红螯螯虾的肝胰腺组织中获得有丝分裂相,从精巢组织中获得减数分裂相。共统计36个雌、雄个体有丝分裂相的染色体数目和36个雄虾减数分裂相的二价体数目。结果表明:雌、雄红螯螯虾染色体数目出现频率最高的均为200,分别占39.3%、50.0%,二价体数目出现频率最高的为100,占50%。从中选取染色体形态清晰、着丝粒可识别的有丝分裂中期相进行核型分析,发现雌、雄红螯螯虾染色体在核型分组上的结果一致,核型公式为n=100=36(m)+33(sm)+14(st)+17(t),未发现异型染色体。独立样本t检验结果显示,雌、雄红螯螯虾的各组型染色体长度和染色体臂比无显著差异(P>0.05)。本研究首次比较了雌、雄红螯螯虾染色体核型数据,丰富了红螯螯虾细胞遗传学基础研究和十足目动物染色体核型信息,为其遗传育种工作提供了基础数据,为红螯螯虾染色体水平的基因组组装提供了可靠的参考数据。

氟苯尼考及氟苯尼考胺在克氏原螯虾体内药物代谢动力学

研究不同给药方式下,氟苯尼考及其代谢产物氟苯尼考胺在克氏原螯虾体内的药动学特征。在水温为(21±1)℃条件下,分别给予20 mg/kg体重单剂量血窦注射或50 mg/kg体重单剂量口灌给药,并于0.083、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12、18、24和36h时间点采集血淋巴,运用反相色谱法检测血淋巴中氟苯尼考及氟苯尼考胺的浓度,采用3p97软件的非房室模型统计矩方法分析药时数据。结果表明:血窦给药后,氟苯尼考的消除半衰期(t1/2)、表观分布容积[Vd(ss)]、总体清除率(CL)分别为8.26h、14.43 L/kg、1.21 L/kg.h,氟苯尼考胺消除半衰期和代谢率(MR)分别为20.28h、9.3%;口灌给药后,氟苯尼考达峰浓度(Cmax)、达峰时间(Tmax)、消除半衰期、生物利用度(F)分别为2.49 mg/kg、1.0h、10.01h、21.6%,氟苯尼考胺的消除半衰期和代谢率分别为16.0h、37.5%。氟苯尼考在克氏原螯虾体内的消除比氟苯尼考胺快,并能广泛地分布于身体各组织中;氟苯尼考在胃肠中吸收迅速,但其生物利用度不高,代谢率低。

淡水小龙虾主要过敏原原肌球蛋白基因的克隆、表达及其免疫活性鉴定

目的:克隆、表达淡水小龙虾肌肉中主要过敏原原肌球蛋白(tropomyosin),并对其免疫活性进行鉴定。方法:根据甲壳类的泛过敏原tropomyosin基因的高度保守性设计简并引物,通过RT-PCR克隆出淡水小龙虾虾肉中过敏原tropomyosin的全长基因。将该基因与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经诱导异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni2+亲和层析柱纯化后,用Western blot检测该重组蛋白的免疫活性。结果:序列分析显示该基因包括一个编码284个氨基酸的开放阅读框,与已知虾、蟹、龙虾等的过敏原tropomyosin基因有较高同源性(>80%)。根据过敏原的命名规则,将其命名为Proc 1,并提交GenBank数据库,登录号为FJ769183。重组小龙虾tropomyosin在大肠杆菌中能高效的表达,Western blot检测结果显示该重组蛋白具有良好的免疫活性。结论:研究成功表达了具有免疫活性的淡水小龙虾原肌球蛋白,为虾过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。

池塘和稻田养殖克氏原螯虾肠道微生物对比分析

为探究池塘和稻田养殖模式下克氏原螯虾肠道微生物组成的差异,采用16S rRNA高通量测序方法分析了对两种养殖模式下克氏原螯虾肠道的微生物多样性和群落结构。结果显示,所有样品共检出2007个种水平上的分类操作单元(operational taxonomic units,OTU),归属于37个门,其中池塘养殖克氏原螯虾的肠道微生物有1260个OTU,稻田养殖克氏原螯虾的肠道微生物有1840个OTU,两种模式下克氏原螯虾的肠道微生物共同的OTU有1093个;两种模式下的肠道微生物优势菌均为厚壁菌门,其中池塘模式中占比67.40%,稻田模式中占比为32.69%;对两种模式的克氏原螯虾肠道微生物进行Alpha多样性分析显示,池塘养殖克氏原螯虾肠道微生物多样性的Shannon、ACE和Chao指数均低于稻田养殖克氏原螯虾肠道微生物的指数,差异均达到极显著的水平;物种差异分析显示,在门水平上有21个门差异达到显著水平,其中有12个门差异达到极显著水平;在OTU水平上,有364个OTU差异达到显著水平,其中有106个OTU差异达到极显著水平。研究表明,池塘和稻田养殖克氏原螯虾肠道微生物在物种组成上、多样性上都存在明显差异,针对两种模式的养殖管理应有所区分,由于池塘模式下肠道微生物多样性较低,因此,需要更多地注重虾类健康状况动态,加强管理。

饲料中不同磷水平对红螯螯虾幼虾生长和体组成的影响

以秘鲁鱼粉、豆粕为蛋白源,鱼油和豆油为脂肪源,通过调节饲料中不同磷酸二氢钙水平形成7种不同磷水平(0.72%、0.85%、1.00%、1.16%、1.32%、1.47%和1.74%)的等氮等能饲料,并以此饲料投喂红螯螯虾幼虾(2.25±0.12)g8周。试验结果显示:饲料中不同磷水平对红螯螯虾幼虾的增重率、特定生长率、饲料系数和成活率都有一定的影响,增重率和特定生长率均随着磷水平的升高而升高,当总磷含量为1.34%时获得最佳特定生长率,而过高(1.74%)或过低(0.72%)的磷水平会显著影响幼虾的生长;饲料系数随磷水平的升高呈下降趋势;在1.00%～1.74%的磷水平之间成活率均为100%;随着磷水平的升高,全虾和肝胰脏粗脂肪含量逐渐降低,全虾粗灰分和总磷含量均逐渐升高,并且肌肉粗蛋白含量也呈一定的增长趋势;适宜的磷水平可以提高血浆碱性磷酸酶活性,而肝胰脏碱性磷酸酶活性随磷水平的升高而降低。综合幼虾的生长性能、营养成分等分析得出,体重在(2.25±0.12)g的红螯螯虾幼虾适宜的饲料总磷含量在1.32%～1.47%之间。

超高压处理对小龙虾脱壳及虾仁性质影响的研究

为提高小龙虾人工脱壳效率及虾仁的品质,脱壳前对小龙虾采用超高压处理,通过对比不同处理条件下脱壳时间、虾仁得率和虾仁完整性等方面的差异,综合评价超高压处理对小龙虾脱壳及虾仁性质的影响。结果表明:超高压处理较传统手工脱壳能显著(p<0.05)缩短小龙虾脱壳时间、提高虾仁得肉率,最佳脱壳条件为300 MPa保压1 min,此条件下脱壳时间较未处理过的脱壳效率提高65.46%,较水煮脱壳工艺提高47.37%。另外,得到的虾肉完整性好,硬度有所增加、耐咀性变大、而弹性变化不明显。研究结果为超高压技术应用于小龙虾的脱壳提供了参考。

克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

克隆克氏原螯虾主要过敏原原肌球蛋白的一个片段区基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫原性.提取克氏原螯虾总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆得到目的基因;将目的基因连入pMD19-T载体,提质粒酶切鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;利用Western-blotting和ELISA检测该重组蛋白的免疫原性.克隆获得目的基因,其片段长为291 bp,编码97个氨基酸.重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting和ELISA结果表明该蛋白与克氏原螯虾过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性.

克氏原螯虾暴发性疾病病原及其传播途径的初步研究

为了探讨克氏原螯虾(Procambarus clarkii)暴发性疾病的传染途径和致病病原,取呈现暴发性疾病典型症状的克氏原螯虾的组织与内脏,制作成螯虾肉糜后分为3份,分别采用抗生素除菌、不做任何处理和在100℃水浴锅中保持1 h等3种方法将螯虾肉糜处理后,连续投喂体重(5.6±0.3)g的幼年虾、体重(17.5±0.4)g的青年虾和体重(24.6±0.5)g的成年虾7 d后,继续饲养观察28 d,比较了各试验组螯虾的死亡率。结果表明,口服经过抗生素除菌和未经任何处理的患病螯虾组织能导致健康试验螯虾发病而死亡,而且青年虾和成年虾死亡数量较幼年虾多;与加热处理患病螯虾组织相比,未经处理的患病螯虾组织诱导健康克氏原螯虾发病率最高,抗生素处理组其次,这种结果预示着患病螯虾组织中存在能导致克氏原螯虾疾病发生的致病性病毒和细菌,而且健康的克氏原螯虾可以通过摄食带病原的患病虾受感染。采用盐酸多西环素对患病虾的治疗未显示出疗效。

克氏原螯虾家系建立及幼虾生长比较的初步研究

以克氏原螯虾太湖群体为基础群体,采用1雄对5雌进行定向交配,研究克氏原螯虾家系建立技术。共配48组,获得105尾抱卵虾,抱卵率(30 d)为44.2%,单个配组最高抱卵率为100%,孵化率为72.74%,幼虾培育成活率为96.25%±2.58%,建立了77个全同胞家系,其中父系半同胞家系有66个。以构建的家系为基础,进行雌雄亲本体长、体重和头胸甲长与幼虾数的相关性分析,分析虾苗2月龄养殖成活率与放养密度的相关性,选取23个家系在温室内进行标准化养殖和幼虾生长情况的分析和比较。结果表明,雌雄亲本的体长、体重和头胸甲长与幼虾数的相关性不显著;2月龄养殖成活率与放养密度呈负相关,但相关性不显著;温室内幼虾培育成活率为39%±8%,多数家系间幼虾生长性状差异不显著,家系内的体长差异系数较体重差异系数小。本研究积累了克氏原螯虾家系构建的相关技术,为进行克氏原螯虾家系选育奠定了基础。

两种方式对红螯螯虾同步产卵影响的研究

对红螯螯虾采取雌雄分养和烫伤雌虾单侧眼柄两种方法进行处理,研究其对红螯螯虾卵巢发育和产卵率的影响,进而判断对同步产卵的影响。结果显示,雌雄分开放养对雌虾性腺发育有促进作用,其性腺指数显著高于幼虾刚离体的雌虾和试验结束时未产卵的雌虾,而肝胰腺指数低于试验初的雌虾,但14 d的单放时间偏长;单养14 d组和烫伤单侧眼柄组的产卵率分别为35%和50%,小于对照组(75%);雌虾交配前不需要蜕壳;幼虾离体的雌虾不再次交配也可以产卵,但不一定能孵出苗。研究表明,雌雄分养和烫伤雌虾单侧眼柄对于刚理出的产空雌虾的同步产卵促进作用不明显,生产上对于幼虾离体后的雌虾应立即雌雄配组。

盐酸土霉素对人工致病克氏原螯虾的治疗效果研究

用口服患病克氏原螯虾(Procamgbarus clarkii)组织、注射拟态弧菌(Vibrio mimicus)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的方法,人工感染健康克氏原螯虾致病后,定时投喂盐酸土霉素药物饵料,观察了药物饵料对人工致病克氏原螯虾的治疗效果。结果表明,投喂含有盐酸土霉素的药物饵料对人工注射V.mimicus和V.parahaemolyticus致病的克氏原螯虾有比较好的治疗效果,而对口服患病克氏原螯虾组织致病的克氏原螯虾的治疗效果比较差。但是,与口服患病克氏原螯虾组织致病后未用药物饵料治疗的对照组相比,投喂药物饵料对克氏原螯虾疾病发展有一定的控制作用。推测克氏原螯虾暴发性疾病的致病原因主要是由于致病病毒引起,而致病菌在克氏原螯虾体内的存在,可能导致混合感染而死亡率上升。

即食龙虾仁制品的研制

以龙虾仁为原料,PET/AL/PP复合蒸煮袋作包装材料,对即食龙虾仁制品的制作工艺和制品主要栅栏因子—水分活度(Aw)的调控进行了研究。旨在开发出一种即食的龙虾仁制品,它有良好的非制冷耐贮藏性,且避免了高温杀菌给产品带来的不利影响。

嗜水气单胞菌对克氏原螯虾免疫相关因子活性的影响

将嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）用灭菌生理盐水调节至1．5×10^4cfu／mL（I组）和1．5×10^5cfu／mL（Ⅱ组）的浓度后，注射法接种克氏原螯虾（Procambarus clarkii）（人工感染），定时检测供试克氏原螯虾的总血细胞数量（THCs）、淋巴液中酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶活性和抗茵活力等免疫相关因子活性的变化状况。结果表明，注射不同浓度的A．hydrophila后的8～48h之间，供试克氏原螯虾的免疫相关因子的活性发生了显著变化。2个试验组的克氏原螯虾在注射A．hydrophila后8～48h内，THCs和SOD活性显著低于注射生理盐水的对照组，其中I组克氏原螯虾的THCs和SOD活性分别于注射感染的12、24h降至最低值，于48、96h恢复至正常值；而Ⅱ组克氏原螯虾的THCs和SOD活性均于48h降至最低值，于96h逐渐恢复。I组克氏原螯虾在注射A．hydrophila后12-48h，溶菌活力、抗菌活力和PO活性均显著高于对照组，并分别于24、24、48h达到最大值，96h后恢复正常；而Ⅱ组克氏原螯虾在注射A．hydrophila后12-48h，溶菌活力、抗菌活力和PO活性均显著低于对照组，均于48h降至最低，96h后逐渐恢复接近正常值，但是仍然低于对照组。

“稻-虾”耦合养殖技术研究

在湖北省荆门市沙洋县毛李镇18.14 hm2的低洼稻田进行了"稻-克氏原螯虾"耦合养殖技术试验,在稻田中开挖环形沟、田间沟,并投放克氏原螯虾(Procambarus clarkii)亲虾,进行中稻(Oryza sativa L.)与克氏原螯虾同位耦合养殖技术试验。结果表明,中稻单产量9 559.4 kg/hm2,单产与普通中稻种植产量持平;克氏原螯虾平均单产量1 003.8 kg/hm2,平均纯利润为11 831.8元/hm2。