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Production of Transgenic Pig Clone Embryo Expressed the Red Fluorescent Protein by Using the Somatic Cell Nucleus Transplantation Technology
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作者 康锦丹 尹熙俊 +4 位作者 赵明辉 梁爽 刘希 李文学 崔成哲 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第2期287-290,307,共5页
[Objective] The research aimed to lay the foundation for producing the transgenic clone pig.[Method] The pig fetus fibroblast with the red fluorescent protein(RFP)gene that was transfected by the retrovirus was as t... [Objective] The research aimed to lay the foundation for producing the transgenic clone pig.[Method] The pig fetus fibroblast with the red fluorescent protein(RFP)gene that was transfected by the retrovirus was as the donor of nucleus transplantation.By using the somatic cell cloning technology,the development situation in vitro of clone embryo with RFP was studied.[Result] The fusion rate of RFP transgenic cell was 83.87% which had no significant difference with 80.56% of non-transgenic cell(P0.05).The blastula rate in vitro of RFP transgenic somatic cell reconstructed embryo was 8.67% which had no significant difference with 6.56% of non-transgenic cell(P0.05).After the reconstructed embryo of RFP transgenic somatic cell was transplanted into fifteen receptors,there was no conception individual.[Conclusion] The transgenic cell with the red fluorescent protein as the donor could successfully clone the transgenic embryo and obtain the transgenic blastula. 展开更多
关键词 TRANSGENE red fluorescent protein Nucleus transplantation Pig
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利用种子红色荧光标记鉴定转基因番茄后代
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作者 章力 魏凯 +9 位作者 李珊珊 宁宇 路菲菲 王孝宣 国艳梅 刘磊 李鑫 杜永臣 李君明 黄泽军 《山东农业科学》 北大核心 2024年第4期1-8,共8页
转基因技术有助于番茄基因功能研究和遗传改良,其中转基因后代的筛选是一个非常重要但工作量大的环节。本研究基于番茄油体蛋白基因家族序列分析和番茄基因表达数据库SGN-TEA搜索结果,克隆了一个种子特异且高水平表达的油体蛋白基因SlOL... 转基因技术有助于番茄基因功能研究和遗传改良,其中转基因后代的筛选是一个非常重要但工作量大的环节。本研究基于番茄油体蛋白基因家族序列分析和番茄基因表达数据库SGN-TEA搜索结果,克隆了一个种子特异且高水平表达的油体蛋白基因SlOLE1(Solyc06g034040)。利用无缝克隆的方法将红色荧光蛋白基因TagRFP的编码区序列插入到SlOLE1基因的终止密码子前,形成一个嵌合基因SlOLE1-TagRFP。将嵌合基因插入到pBI121双元载体,构建植物表达载体pSlOLE1-TagRFP,利用农杆菌介导法转化番茄品种‘Money Maker’,T_(0)代植株的自交种子在荧光显微镜下呈现出明亮红色荧光或无荧光。PCR分子标记进一步验证发现,红色荧光种子萌发的幼苗均存在TagRFP序列,表明在种子阶段检测红色荧光筛选转基因番茄后代的准确率为100%。由此,本研究建立了一种利用SlOLE1-TagRFP嵌合基因,可以通过种子红色荧光可视化分析,简单快速、低成本地鉴定转基因番茄后代的方法。 展开更多
关键词 番茄 种子 红色荧光蛋白 油体蛋白 转基因鉴定
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不同交配型拟轮枝镰孢菌荧光蛋白标记菌株的构建
3
作者 张峰程 张君 +1 位作者 李凡 郭维 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期35-43,共9页
【目的】构建不同交配型的拟轮枝镰孢菌(Fusarium verticillioides)荧光蛋白标记菌株,为研究拟轮枝镰孢菌的侵染、定殖、有性生殖等提供基础材料。【方法】通过聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)介导的原生质体转化法分别将荧光蛋白基... 【目的】构建不同交配型的拟轮枝镰孢菌(Fusarium verticillioides)荧光蛋白标记菌株,为研究拟轮枝镰孢菌的侵染、定殖、有性生殖等提供基础材料。【方法】通过聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)介导的原生质体转化法分别将荧光蛋白基因eGFP和mCherry导入不同交配型的拟轮枝镰孢菌FvLNF15-11和FvSHF19-37菌株,并比较荧光标记菌株与野生型菌株间的生长特性、有性生殖和致病力差异。【结果】经PCR检测获得了带有荧光标记的菌株,激光共聚焦显微镜观察表明eGFP基因和mCherry基因分别在FvLNF15-11和FvSHF19-37菌株的分生孢子和菌丝中成功表达。与野生型菌株相比,荧光标记菌株的生长发育、子囊壳形成和致病力均无明显差异。【结论】构建了拟轮枝镰孢菌不同交配型eGFP和mCherry荧光标记菌株,不仅为研究拟轮枝镰孢菌在寄主体内的侵染、定殖等提供了材料,也为研究该菌的有性生殖过程积累了基础。 展开更多
关键词 拟轮枝镰孢菌 PEG介导 绿色荧光蛋白 红色荧光蛋白 交配型
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红色荧光蛋白DsRed2基因在大肠杆菌中的表达和观察及其在本科实验教学中的应用 被引量:10
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作者 邢万金 赵宇航 +1 位作者 任仕超 包晓红 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期548-551,601,共5页
用PCR方法从质粒pDsRed2-1中扩增获得DsRed2,亚克隆到pMD19-T载体上,然后酶切将DsRed2分别插入到原核表达载体pET-Trx和pGEX-4T1上,转入E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达.在LB平板培养基上或液体培养基中直接观察菌体颜色,最后用SDS-P... 用PCR方法从质粒pDsRed2-1中扩增获得DsRed2,亚克隆到pMD19-T载体上,然后酶切将DsRed2分别插入到原核表达载体pET-Trx和pGEX-4T1上,转入E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达.在LB平板培养基上或液体培养基中直接观察菌体颜色,最后用SDS-PAGE检测DsRed2蛋白的表达.结果显示构建的重组载体pET-Trx-DsRed2和pGEX-GST-DsRed2在E.coli中成功表达,且不形成多聚体.LB平板培养基上和IPTG诱导24h后的液体培养基中都能直接观察到红色荧光,说明DsRed2可以作为原核表达系统的报告基因. 展开更多
关键词 原核表达 红色荧光蛋白 Dsred2 实验教学
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利用GFP/RFP双荧光指示载体鉴定特异性启动子功能 被引量:6
5
作者 尹涛 秦巧平 +2 位作者 张上隆 刘敬梅 陈大明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2106-2110,共5页
在基因表达定位或启动子调控模式的研究中,多以gusA作为报告基因。但由于部分组织中高内源GUS背景活性或转化手段的限制,使判断基因表达定位或调控时存在很大误差。为了解决上述问题,本实验将报告基因绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(R... 在基因表达定位或启动子调控模式的研究中,多以gusA作为报告基因。但由于部分组织中高内源GUS背景活性或转化手段的限制,使判断基因表达定位或调控时存在很大误差。为了解决上述问题,本实验将报告基因绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)融合构建双荧光标记瞬时表达载体pBI221-RFP/GFP。该载体以CaMV35S启动子驱动GFP确定转化效率,通过鉴定阳性个体的红色荧光活性分析目的基因或启动子的表达模式。并通过番茄E8和西瓜AGPL1果实特异启动子验证了该载体在启动子调控模式研究中的应用可行性。结果表明pBI221-RFP/GFP是一个可以在基因和启动子功能验证中应用的高效瞬时表达载体。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 红色荧光蛋白 瞬时表达载体 特异性启动子
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GFP和RFP报道基因在人体不同细胞中转导率的比较研究 被引量:6
6
作者 罗毅 辛毅 +5 位作者 张颖 汪劲松 王世强 李景超 高飞 黄益民 《北京生物医学工程》 2011年第1期20-25,共6页
目的比较慢病毒载体介导的绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)报道基因在人体不同细胞中的转导率,为再生医学和组织工程学研究中报道基因的选择提供依据。方法将构建的GFP和RFP慢病毒载体分别转染人骨髓间充质干细胞(hMSC)、人脐静... 目的比较慢病毒载体介导的绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)报道基因在人体不同细胞中的转导率,为再生医学和组织工程学研究中报道基因的选择提供依据。方法将构建的GFP和RFP慢病毒载体分别转染人骨髓间充质干细胞(hMSC)、人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)和人肺泡上皮细胞株(A549)。4d后,用流式细胞仪检测GFP和RFP的转导率,并利用激光共聚焦显微镜观察GFP和RFP的表达特征。结果 GFP和RFP在hMSC、Eahy926和A549三种细胞间的转导率均有显著性差异(P(0.01);在hMSC或Eahy926或A549的同种细胞中GFP和RFP的转导率也有显著性差异(P(0.01);RFP在部分Eahy926和A549细胞局部高表达。结论慢病毒载体介导的GFP和RFP报道基因在人体不同细胞中的转导率明显不同。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白(GFP) 红色荧光蛋白(rfp) 转导率
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用无终止子的RFP报告基因捕获水稻终止子研究 被引量:5
7
作者 李军 瞿绍洪 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期758-763,共6页
基因捕获技术已被广泛应用于植物功能基因组学研究。文章构建了水稻PolyA捕获载体pLJ19,该载体含有用于检测转化事件的绿色荧光蛋白报告基因(GFP)及用于进行PolyA捕获的无终止子的红色荧光蛋白报告基因(RFP),在水稻转化愈伤组织阶段筛... 基因捕获技术已被广泛应用于植物功能基因组学研究。文章构建了水稻PolyA捕获载体pLJ19,该载体含有用于检测转化事件的绿色荧光蛋白报告基因(GFP)及用于进行PolyA捕获的无终止子的红色荧光蛋白报告基因(RFP),在水稻转化愈伤组织阶段筛选同时含有GFP及RFP的转化愈伤组织并进行RFP插入位点T-DNA侧翼序列(FST)分析可获得水稻终止子序列。将pLJ19转化粳稻品种‘日本晴’的胚性愈伤组织,获得了17个具有PolyA捕获事件的愈伤组织。FST序列分析表明6个T-DNA插入在水稻基因组序列中,其中有5个T-DNA插入在水稻基因3’端附近。结果表明,pLJ19载体可用于水稻终止子捕获研究中,可为水稻终止子研究提供研究方法和材料。 展开更多
关键词 基因捕获 终止子 红色荧光蛋白 水稻
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利用RFP标记进行水稻籼粳杂种偏分离的遗传分析 被引量:3
8
作者 刘中来 李军 瞿绍洪 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期189-192,共4页
为了研究水稻籼粳杂种偏分离的遗传基础,用转化红色荧光蛋白(RFP)的7个粳稻株系与籼稻杂交,以整合在不同基因组位点的RFP为可视遗传标记,对F1花粉及F2植株进行遗传分析。根据‘7F5’转基因系的研究结果,在粳稻‘日本晴’和籼稻‘9311’... 为了研究水稻籼粳杂种偏分离的遗传基础,用转化红色荧光蛋白(RFP)的7个粳稻株系与籼稻杂交,以整合在不同基因组位点的RFP为可视遗传标记,对F1花粉及F2植株进行遗传分析。根据‘7F5’转基因系的研究结果,在粳稻‘日本晴’和籼稻‘9311’杂交的遗传背景中,水稻基因组chr02:33465170位置附近存在一个花粉偏分离位点。‘9A2’转基因系组配的籼粳杂种产生1∶1(RFP+∶RFP-)比例的花粉,并且其F2植株群体发生偏分离,说明相应RFP位点(chr04:29587748)附近有一个控制F2植株偏分离的连锁位点,该位点的遗传机制与F1的花粉比例无关。RFP标记提高了籼粳杂种花粉及后代植株的研究效率,为探索偏分离遗传机理提供了新的研究手段。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 转基因水稻 籼粳杂种 偏分离
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含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建 被引量:2
9
作者 郭超 Alexander Endler +2 位作者 张敬 石红军 张军 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2008年第1期17-20,共4页
目的构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究。方法质粒pDsRed2-N1中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启... 目的构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究。方法质粒pDsRed2-N1中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启动子、DsRed2蛋白基因片段并将其克隆至RNA干扰载体pSilencerU6,得到pDsRed2-SilencerU6质粒,利用脂质体转染技术将其转染HEK293T细胞,荧光显微镜、FACS检测转染效率。结果DsRed2蛋白编码基因序列BbsⅠ点突变正确,成功构建pDsRed2-SilencerU6载体,其在HEK293T细胞中可显著表达红色荧光蛋白,利用脂质体转染技术,转染效率达70.61%。结论成功构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6并在哺乳动物细胞中表达,为今后开展RNA干扰研究提供了基础。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 Dsred2 RNA干扰 U6启动子
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表达红色荧光蛋白DsRed报告基因的逆转录病毒载体的构建和在肝干细胞体内示踪中的应用 被引量:1
10
作者 李文林 苏娟 +2 位作者 陶欣荣 Joseph T Lau 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期240-242,共3页
目的:建立表达红色荧光蛋白DsRed的逆转录病毒载体,并对肝原始细胞进行体外标记和体内示踪研究。方法:将pDsRed1 1载体中的DsRed片段克隆到逆转录病毒载体pLNCG C1中构建了pLNCG DsRed载体。将该载体导入Phoenix包装细胞,进而采用乒乓... 目的:建立表达红色荧光蛋白DsRed的逆转录病毒载体,并对肝原始细胞进行体外标记和体内示踪研究。方法:将pDsRed1 1载体中的DsRed片段克隆到逆转录病毒载体pLNCG C1中构建了pLNCG DsRed载体。将该载体导入Phoenix包装细胞,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67 细胞系。结果:利用PT67 细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝原始细胞系。将这些DsRed标记的肝原始细胞移植到小鼠损伤肝脏中,4周后可以在再生肝脏中清晰地观察到具有红色荧光的外源细胞。结论:由于肝脏组织没有红色自发荧光,用DsRed标记肝原始细胞进行肝内示踪时背景干扰小。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 基因.报告 逆转录病毒载体 肝干细胞
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RFP转基因小鼠模型的建立
11
作者 张景锋 霍永 +3 位作者 卫恒习 李莉 高凤磊 张守全 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期24-26,30,286,共5页
为了建立组织广泛表达红色荧光蛋白(red fluorescence protein,RFP)的转基因小鼠,为肿瘤和干细胞等研究提供动物模型,试验从pdsred-express2-n1载体上酶切后获得线性化的CMV-Dsred基因片段,将CMV-Dsred基因注入ICR小鼠受精卵雄原核内,... 为了建立组织广泛表达红色荧光蛋白(red fluorescence protein,RFP)的转基因小鼠,为肿瘤和干细胞等研究提供动物模型,试验从pdsred-express2-n1载体上酶切后获得线性化的CMV-Dsred基因片段,将CMV-Dsred基因注入ICR小鼠受精卵雄原核内,获得的仔鼠利用活体荧光蛋白观察系统、PCR和Southern-blot的方法进行分子水平的检测,同时用后代小鼠的组织制作冰冻切片在荧光显微镜下观察。结果表明:荧光蛋白活体成像系统检测到组织广泛表达红色荧光蛋白的小鼠,阳性小鼠基因组中均检测到Dsred基因的整合,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠道、子宫、肌肉、脂肪和皮肤等组织器官中均检测到红色荧光蛋白。说明成功获得了组织广泛表达红色荧光蛋白转基因小鼠模型。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白(rfp) 载体 构建 原核注射 转基因 小鼠模型
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pDsRED-LC3真核表达载体的构建及其在肝癌细胞系HepG2中的表达和定位
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作者 彭琬昕 孙瑶湘 +3 位作者 陈琛 金洁 邵根宝 王嫘 《南京师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期84-88,共5页
本实验根据已知的人MAP-LC3序列,以人脑胶质瘤U251细胞cDNA为模板扩增出去除终止密码子的MAP-LC3片段,定向克隆至红色荧光融合蛋白载体pDsRed-N1质粒中,构建了重组质粒pDsRed-LC3.将pDsRed-LC3转染HepG2细胞,48 h后用Western Blot、激... 本实验根据已知的人MAP-LC3序列,以人脑胶质瘤U251细胞cDNA为模板扩增出去除终止密码子的MAP-LC3片段,定向克隆至红色荧光融合蛋白载体pDsRed-N1质粒中,构建了重组质粒pDsRed-LC3.将pDsRed-LC3转染HepG2细胞,48 h后用Western Blot、激光共聚焦显微镜检测融合蛋白在细胞内的表达和分布情况,并观察血清饥饿时细胞发生自噬的情况.结果表明:(1)成功构建pDsRFP-LC3真核表达载体,该载体能在人肝癌细胞中表达;(2)血清饥饿应激实验证明,该载体可以良好地指示自噬泡的形成过程,为研究肿瘤细胞的自噬发生情况提供了一个重要而方便的工具. 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 MAP-LC3 自噬 肝癌
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RFP-AWP1原核表达载体的构建及表达特性研究
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作者 曹永宽 莫永炎 +3 位作者 薛刚 王培红 姜勇 田伏洲 《华西医学》 CAS 2008年第4期701-703,共3页
目的:建立红RFP-AWP1融合基因的原核表达载体,研究其表达蛋白特性。方法:将克隆的人AWP1(associated with protein kinase Crelated kinase 1,AWP1)和水母的红色荧光蛋白(redfluorescence protein,RFP)的cD-NA插入到原核表达载体pET-17... 目的:建立红RFP-AWP1融合基因的原核表达载体,研究其表达蛋白特性。方法:将克隆的人AWP1(associated with protein kinase Crelated kinase 1,AWP1)和水母的红色荧光蛋白(redfluorescence protein,RFP)的cD-NA插入到原核表达载体pET-17b的多克隆位点(mutiple clone sites,MCS)中,经AWP1 cDNA的PCR鉴定和E.coli DE3中的表达鉴定后,E.coli DE3表达AWP1-RFP融合蛋白,荧光显微镜观察其表达特性及与GST-beads的pull-down实验。结果:成功构建了载体pET-AWP1-DsRed1,在大肠杆菌中获得了高效表达的AWP1-RFP融合蛋白,其活菌液在荧光显微镜下呈火山熔岩状的亮红色,干固的细菌呈斑片状红色荧光;AWP1-RFP融合蛋白可与GST-beads结合,并在激发波长为508nm的条件下呈红色荧光,而在波长为488 nm激发光条件下可见橙黄色荧光。结论:在体外验证了AWP1-RFP融合蛋白具有可视性表达的特点,同时发现其能与GST-beads结合,为pull-down AWP1及其相关蛋白提供了一条新途径,为研究AWP1-RFP融合蛋白在真核细胞中的表达、定位及蛋白-蛋白相互作用等具有指导意义。 展开更多
关键词 AWP1 红色荧光蛋白 GST-beads 大肠杆菌
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小鼠PDL1-Red2融合蛋白真核表达载体的构建、表达及其效应
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作者 廖雯君 孙晶 +2 位作者 朱慧芬 张金元 沈关心 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1068-1071,共4页
目的:小鼠跨膜型PD-L1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因真核表达载体的构建、表达与鉴定,及其效应初步研究。方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染NIT细胞株,以流式细胞术(FCM)和倒置相差荧光显微镜检测融合蛋白的表达;采用混合淋... 目的:小鼠跨膜型PD-L1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因真核表达载体的构建、表达与鉴定,及其效应初步研究。方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染NIT细胞株,以流式细胞术(FCM)和倒置相差荧光显微镜检测融合蛋白的表达;采用混合淋巴细胞培养,以FCM测定脾细胞的增殖反应。结果:融合基因在转染的真核细胞中获得表达,并呈膜分布,转染PD-L1/pDsRed2-N1的细胞对淋巴细胞增殖反应有一定的抑制作用,表明PD-L1/pDsRed2-N1融合蛋白中分子标签未影响PD-L1的结构及其生物学活性。结论:PD-L1与DsRed2融合基因载体构建成功,表达的融合蛋白具有生物学活性。 展开更多
关键词 PD-L1 红色荧光蛋白 融合基因 混和淋巴细胞培养
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远红荧光蛋白HcRed基因的原核和真核表达及鉴定
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作者 何志强 薛渊 +8 位作者 石燕 杨恒 赵银霞 王楷文 周成林 王胜军 邵启祥 焦志军 许化溪 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2010年第1期17-20,共4页
目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模... 目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模板,通过PCR获得目的基因,并分别连接于PET28a(+)原核载体和PIRES真核载体。经PCR、酶切鉴定后,原核载体转化大肠埃希菌,经IPTG诱导表达;真核载体用脂质体转染DC2.4,G418筛选出克隆后,应用RT-PCR和流式细胞仪进行检测。结果:扩增出687 bp的HcRedCDS区序列,构建了原核和真核表达载体PET28a(+)/HcRed和PIRES/HcRed,分别于大肠埃希菌和DC2.4细胞系中成功表达。结论:成功构建HcRed基因的原核、真核表达载体,并分别在工程菌和细胞系中成功表达,为后续基因及融合蛋白的筛选、示踪和体内观测奠定了基础。 展开更多
关键词 远红荧光蛋白Hcred 树突状细胞系2.4 原核表达
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红色荧光蛋白(RFP)基因在转基因青鳉中的表达 被引量:10
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作者 龙华 尾里建二郎 +1 位作者 若松佑子 松岛良次 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期97-99,共3页
以青 (Oryziaslatipes)为实验动物 (基因型bR ,体色红橙色 ,体长 2~ 3cm) ,以载体 pBluescriptSK +为原始质粒。构建含有青延伸因子 lα A(EF lα A )基因启动子和红色荧光蛋白 (RFP)基因的表达载体。用限制性内切酶Alw 4 4Ⅰ酶... 以青 (Oryziaslatipes)为实验动物 (基因型bR ,体色红橙色 ,体长 2~ 3cm) ,以载体 pBluescriptSK +为原始质粒。构建含有青延伸因子 lα A(EF lα A )基因启动子和红色荧光蛋白 (RFP)基因的表达载体。用限制性内切酶Alw 4 4Ⅰ酶切上述载体质粒 ,显微注射实验证实 ,线状DNA比环状DNA在转基因青受精卵和鱼苗中更易表达。立体荧光显微镜检测结果表明 ,RFP基因的表达率和转基因鱼苗的存活率均较高 ,与绿色荧光蛋白 (GFP)基因一样 ,红色荧光蛋白 (RFP) 展开更多
关键词 红色荧光蛋白基因 显微注射 基因表达 青Jian rfp基因 报告基因
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Tgf2转座系统在转RFP基因斑马鱼上的应用 被引量:2
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作者 吴芳 叶星 +4 位作者 邹曙明 张莉莉 孙成飞 田园园 白俊杰 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期647-654,共8页
提高目的基因的转植效率与可遗传效率是转基因鱼研制的关键点之一。本研究利用近年开发的金鱼转座子系统进行转基因斑马鱼的研制,探讨其在转基因鱼上应用的可行性。通过PCR方法,改造Tgf2转座子供体质粒pTgf2-EF1α-eGFP,将肌球蛋白轻链... 提高目的基因的转植效率与可遗传效率是转基因鱼研制的关键点之一。本研究利用近年开发的金鱼转座子系统进行转基因斑马鱼的研制,探讨其在转基因鱼上应用的可行性。通过PCR方法,改造Tgf2转座子供体质粒pTgf2-EF1α-eGFP,将肌球蛋白轻链2启动子(mylz2)与红色荧光蛋白基因(RFP)定向插入其中,构建可在肌肉组织特异性表达红色荧光蛋白的Tgf2转座子供体质粒pTgf2-Mylz2-RFP。通过显微注射,将Tgf2转座子供体质粒与Tgf2转座酶mRNA共注射于斑马鱼(Danio ririo)受精卵中,共注射受精卵972粒,出膜后存活的仔鱼803尾,其中携带外源基因的仔鱼为615尾,阳性率为76.6%。转红色荧光蛋白基因斑马鱼首代F0培育至性成熟,将其中的10尾F0斑马鱼分别与野生型斑马鱼进行配对繁殖,其中1个组合产生了体表呈现均匀红色荧光的F1个体,因此RFP在F0的整合率为10%。将红色荧光F1个体培育至性成熟并与野生型鱼配对繁殖,F2的阳性个体占69%。本研究结果说明,由Tgf2转座子介导的转基因技术,可有效提高目的基因的转植效率与整合效率,在转基因鱼构建以及相关研究中具有开发应用前景。 展开更多
关键词 Tgf2转座子 斑马鱼 转基因 红色荧光蛋白 整合率
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共培养体系中高红色荧光蛋白(RFP)标记结肠癌细胞的检测技术 被引量:2
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作者 陈孙霞 王晓庆 +2 位作者 徐晓恩 姜英华 刘锋 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期602-609,共8页
目的提高mCherry红色荧光蛋白(red fluorescence protein,RFP)在结肠癌细胞中的表达,从而可以通过检测共培养体系中细胞的荧光值来分析结肠癌细胞的增殖,以利于结肠癌肿瘤微环境的研究。方法用293FT细胞制备pBMN-mCherry病毒液。... 目的提高mCherry红色荧光蛋白(red fluorescence protein,RFP)在结肠癌细胞中的表达,从而可以通过检测共培养体系中细胞的荧光值来分析结肠癌细胞的增殖,以利于结肠癌肿瘤微环境的研究。方法用293FT细胞制备pBMN-mCherry病毒液。利用多次感染(1~4次)的方法提高RFP在结肠癌细胞系HT29、LoVo、SW620及HCTll6中的表达,经流式细胞仪检测得到不同感染次数细胞RFP标记的阳性率,并将高阳性表达RFP的结肠癌细胞HT29的荧光值与细胞数量关系进行比较,分析评价两者的线性关系。结果通过优化,荧光标记效率大幅度提高。结肠癌肿瘤成纤维细胞共培养中,荧光值与细胞数量线性关系R^2〉0.9;该方法成功用于检测共培养体系中单种细胞增殖。结论在结肠癌细胞和成纤维细胞的共培养体系中,结肠癌细胞的增殖可以通过检测细胞荧光值来分析。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白(rfp) 共培养 细胞增殖 结肠癌
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含DsRed类似生色团的红色荧光蛋白的发展及应用 被引量:4
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作者 王志芳 安建梅 孔建强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期197-206,共10页
自从绿色荧光蛋白(GFP)被发现以来,荧光蛋白在生物医学领域已经成为一种重要的荧光成像工具.随着红色荧光蛋白DsRed的出现,各种优化的DsRed突变体和远红荧光蛋白也不断涌现.其中荧光蛋白生色团的形成机制对改建更优的荧光蛋白变种影响很... 自从绿色荧光蛋白(GFP)被发现以来,荧光蛋白在生物医学领域已经成为一种重要的荧光成像工具.随着红色荧光蛋白DsRed的出现,各种优化的DsRed突变体和远红荧光蛋白也不断涌现.其中荧光蛋白生色团的形成机制对改建更优的荧光蛋白变种影响很大,对于红色荧光蛋白而言,大多数的红色荧光蛋白的生色团类型为DsRed类似生色团,在此基础上又出现了Far-redDsRed类似生色团.目前,含DsRed类似生色团的荧光蛋白主要有单体红色荧光蛋白、光转换荧光蛋白、斯托克斯红移蛋白、荧光计时器等.这些优化的荧光蛋白作为分子探针可以实现对活细胞、细胞器或胞内分子的时空标记和追踪,已经在生物工程学、细胞生物学、基础医学领域得到广泛应用.本文综述了含DsRed类似生色团的荧光蛋白的研究进展及其应用,以及由此发展起来的远红荧光蛋白在活体显微成像技术中的应用,并展望了荧光探针技术研究的新方向. 展开更多
关键词 Dsred类似生色团 远红荧光蛋白 荧光显微成像
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AsRed2示踪前列腺癌肺转移模型的建立 被引量:1
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作者 刘旭东 曾津 +5 位作者 徐珊 张涛 谢宏俊 马振坤 王新阳 贺大林 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期504-510,共7页
目的:使用携带红色荧光蛋白(AsRed2)的前列腺癌PC-3细胞(PR7细胞)建立可用活体荧光成像技术监测的前列腺癌肺转移模型。方法:分别采用MTT及Transwell实验比较前列腺癌PC-3与PR7细胞体外增殖、迁移及侵袭能力;将20只BALB/c裸鼠随机平均分... 目的:使用携带红色荧光蛋白(AsRed2)的前列腺癌PC-3细胞(PR7细胞)建立可用活体荧光成像技术监测的前列腺癌肺转移模型。方法:分别采用MTT及Transwell实验比较前列腺癌PC-3与PR7细胞体外增殖、迁移及侵袭能力;将20只BALB/c裸鼠随机平均分为4组,分别尾静脉注射不同浓度PR7细胞悬液200μl,A组:1×107/ml,B组:2.5×107/ml,C组:5×107/ml,D组:2.5×107/ml,并于1周后重复注射2.5×107/ml细胞悬液200μl。第2、4、6、8周分别用活体荧光成像技术检测各组肺转移灶形成情况。结果:前列腺癌PC-3细胞与PR7细胞体外增殖、迁移、侵袭能力均无明显差异(P>0.05);第4周D组40%裸鼠用活体荧光成像检测到肺转移灶;第8周,A组20%、B组60%、C组100%、D组100%裸鼠可检测到肺转移灶;通过病理检查证实肺转移灶形成。结论:通过尾静脉注射携带红色荧光蛋白的前列腺癌PR7细胞可成功建立用活体荧光成像技术监测的前列腺癌肺转移模型。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 活体荧光成像 前列腺癌 肺转移
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