橡胶灵芝菌内参基因筛选与分析

【目的】分析评价不同胁迫处理的橡胶灵芝菌候选内参基因的稳定性,为探索橡胶灵芝菌基因的功能及其侵染橡胶树的分子机制等提供参考。【方法】以5个非生物因子(温度、盐、氧化、pH、干旱)和1个生物因子(生防细菌)胁迫下的橡胶灵芝菌作为材料,提取RNA并反转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR技术,扩增6个候选内参基因(UBC、ACT、RPL6、β-TUB、APT、28s),利用分析软件geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder根据基因表达的稳定性对基因进行排序,选择最适合不同胁迫的内参基因组合。【结果】所有样品RNA均为清晰的两条带,且6个候选内参基因的熔解曲线为明显单一峰。结合geNorm、NormFinder、Bestkeeper和RefFinder对其进行表达稳定性分析发现,温度胁迫下基因表达稳定性为UBC>ACT>RPL6>β-TUB>28s>APT,盐胁迫下基因表达稳定性为ACT>RPL6>UBC>APT>β-TUB>28s;氧化胁迫下基因表达稳定性为UBC>ACT>28s>APT>β-TUB>RPL6;pH胁迫下基因表达稳定性为RPL6>UBC>APT>ACT>β-TUB>28s,干旱胁迫下基因表达稳定性为ACT>UBC>β-TUB>RPL6>APT>28s,生物胁迫下基因表达稳定性为UBC>ACT>RPL6>28s>APT>β-TUB。【结论】结合所有候选基因稳定性和胁迫条件,推荐基因ACT和UBC作为在干旱、氧化、温度和生物胁迫下的内参基因,基因ACT和RPL6为盐胁迫下的内参基因,UBC和RPL6为pH胁迫下的内参基因。本研究结果为不同胁迫下橡胶灵芝菌相关基因的表达研究提供了合适的内参基因。

生防菌YC89在不同甘蔗品种中定殖及防治赤腐病的研究

为明确贝莱斯芽胞杆菌YC89在不同甘蔗品种中的定殖特性及其对赤腐病的生防效果,本研究通过抗生素标记法获得遗传特性和拮抗活性稳定的利福平标记菌株YC89R,然后通过浇灌法对其在不同甘蔗品种中的定殖特性进行探究,同时评价了YC89菌株对4个不同甘蔗品种抗赤腐病的防效研究。定殖试验结果表明,菌株YC89在4个甘蔗品种中的根际、根、茎和叶中均能定殖,并且在接种后的30 d仍能回收到标记菌株,其中在根际中的定殖能力最强,其定殖量为8.66×10^(5)~7.03×10^(6) cfu/g,叶中定殖量最少,菌株含量为0.72×10^(3)~3.54×10^(4)cfu/g,菌株在新台糖22号和粤糖93-159中的定殖能力较强。盆栽防效试验结果表明,YC89菌株对新台糖22赤腐病的防效最好,防治效果可达到61.11%。综上表明,YC89菌株在防治甘蔗赤腐病方面具有较高的潜在应用价值。

草莓红中柱根腐病病原菌的鉴定和生长特性

随着草莓种植面积逐年扩大,红中柱根腐病的危害程度逐渐加重,该病害病原菌种类多样,是一种难以控制的土传病害,对草莓生产造成严重损失。2023年3月,笔者在天津市西青区辛口镇草莓种植基地发现大面积植株萎蔫枯死,根部横切后,主根截面木质部呈红褐色腐烂状。本研究采用组织分离法,从6株草莓病株的根组织分离出5株形态一致的菌株,菌落圆形、白色,背面呈暗粉红色,边缘为淡粉红色。大型分生孢子呈镰刀形,小型分生孢子呈卵圆形。致病性检测结果表明,菌株TN97接种草莓植株后,茎基部和根部出现相同的发病症状。通过提取致病菌株TN97的基因组DNA,扩增和测序rDNA-ITS和EF-1α基因,经NCBI的BLASTn比对分析表明,2个基因(PP257645和PP297566)与层出镰孢菌(Fusarium.proliferatum)的相似性均为100%,系统发育分析也与F.proliferatum聚于同一分支。致病菌株TN97生长的最佳碳源和氮源分别是蔗糖和硝酸钾,最适生长温度是25℃,最适生长pH值范围为8~10。综上,本研究首次明确了天津地区草莓红中柱根腐病病原菌为层出镰孢菌,为该病害的诊断和防治提供科学依据。

橡胶树红根病病原菌rDNA-ITS序列鉴定

为了更好地对橡胶树红根病病原菌进行鉴定,从海南省和云南省发病严重的胶园采集病害样本、分离得到12个灵芝属菌株,并对其rDNA-ITS序列绘制Ganoderma属系统发育树。结果表明,采集得到的12个菌株中有11个鉴定为Ganoderma philippii、1个鉴定为G.gibbosum。

不同地区橡胶树红根病菌的生物学特性及室内毒力测定

橡胶树红根病是我国分布最广、危害最重的橡胶树根部病害。为明确我国海南和云南地区橡胶红根病菌的生物学特性及对杀菌剂的敏感性,采用十字交叉法研究了不同培养条件对病菌菌丝生长的影响,并测定了10种不同杀菌剂对病菌的抑制作用。结果表明,病原菌在玉米+橡胶根的培养基上生长最快,对温度、pH等适应范围广,温度在13～31℃,pH在3～10均能生长,最适生长温度为28℃,多数菌株最佳pH为7～9,且能利用多种碳氮源;不同的碳源中,果糖、半乳糖、麦芽糖、葡萄糖和甘露糖较适合该菌的生长;在供试氮源中,菌丝在酪氨酸、牛肉浸膏的基础培养基上生长最快,在色氨酸和尿素的基础培养基上生长最慢;光照对病菌有抑制作用,黑暗有利于菌丝生长;菌丝的致死温度为47℃,10 min。不同地区的病原菌株间药剂敏感性存在一定差异,戊唑醇抑菌效果最好,其EC_(50)为0.0312μg/mL,其次为嘧菌酯、十三吗啉、咪鲜胺和腈菌唑,EC_(50)分别为0.5581、0.6759、1.3763和1.5603μg/mL。

草莓红中柱根腐病病原菌的生物学特性

测定不同培养基、pH值、温度、光照条件、碳氮源对草莓红中柱根腐病病原菌菌丝生长和菌落颜色的影响。结果表明,该病的病原菌为疫霉菌Phytophthora fragariae,菌丝生长的最适培养基为察贝克氏培养基,最适温度为22℃,最适pH值为6,光照对该病原菌生长无影响,有无碳源对其生长影响差异显著,其中以蔗糖为碳源生长最好;蛋白胨为氮源生长最好,NH4C l生长最差。

牡丹的主要病害及其防治研究

红斑病、根腐病、根结线虫病是牡丹的主要病害,在山东菏泽牡丹栽培区普遍发生且危害严重,已影响到牡丹产业化的发展。在对牡丹的此3种主要病害进行深入系统研究的基础上,对所掌握的红斑病、根腐病、根结线虫病的病原物、发生发展规律及采取的防治措施进行了详细的报道。

草莓红中柱根腐病菌生物学特性研究

针对国内尚未见报道的茄腐镰孢菌引起的草莓红中柱根腐病,对其病原菌的生物学特性进行了初步研究。试验结果表明,病原菌在供试的6种碳源培养基和9种氮源培养基上生长均较良好,而在L-精氨酸上生长较慢。病菌菌丝在10-35℃范围内均能生长,最适生长温度为25℃;菌丝生长的pH值为3-12,最适pH为7。光照对菌丝生长影响不大。病菌分生孢子在供试的6种营养物质中均能萌发;萌发温度10-35℃,最适温度为27℃;pH值2-12范围内病菌孢子均能萌发,最适pH值为6;分生孢子致死温度为62℃、10 min。

我国对草莓炭疽根腐病的重视程度亟待提高

草莓炭疽根腐病是近年来发生较为普遍和严重的草莓病害,但对该病害的认识不足甚至存在误区。本文介绍了草莓炭疽根腐病与草莓红中柱根腐病在症状表现、病原菌种类及用药策略上的不同,并指出了国内草莓炭疽病发生和危害的特点,勿将炭疽根腐病误认为是红中柱根腐病。

4种种衣剂对红芸豆根腐病的防治效果

旨在筛选对根腐病防治高效的种衣剂,为红芸豆生产种植提供技术支撑。首先采用室内盆栽,比较出苗率、株高、根长、鲜重、干重等指标,筛选出对红芸豆生长发育安全的种衣剂,再经大田试验,比较不同时期病情指数、防治效果及增产幅度,筛选出防效理想的种衣剂。盆栽试验表明,35%多·福·克悬浮种衣剂、11%精甲·咯·嘧菌悬浮种衣剂、62.5 g/L精甲·咯菌腈悬浮种衣剂、12%甲·嘧·甲霜灵悬浮种衣剂对红芸豆生长均安全。大田试验表明,出苗后10天,11%精甲·咯·嘧菌悬浮种衣剂防治效果最高,达89.28%,12%甲·嘧·甲霜灵悬浮种衣剂、62.5 g/L精甲·咯菌腈悬浮种衣剂、35%多·福·克悬浮种衣剂的防治效果次之,分别为72.56%、67.79%、59.51%。测产结果表明,35%多·福·克悬浮种衣剂增产幅度最高,相比空白对照增产28.35%,11%精甲·咯·嘧菌悬浮种衣剂次之,增产19.64%,但二者差异不显著。综上所述,11%精甲·咯·嘧菌悬浮种衣剂对红芸豆生长安全且防效最高,有较好的应用价值,可与市面上常用的35%多·福·克悬浮种衣剂交替使用。

福建省草莓根腐病病原鉴定

为明确近年来福建省草莓根腐病(叶片紫红色)的病原菌,指导该病害的防控,从福建各地采集20个病样进行分离纯化,获得5个菌株,根据菌株及其分生孢子的形态特征,初步将分离获得的5个菌株鉴定为拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis sp.);选取真菌通用引物ITS1/ITS4对菌株的rDNA-ITS序列进行扩增并测序,5个菌株测得的ITS序列相同,通过与NCBI数据库同源性比对和系统进化树分析,该序列与Pestalotiopsis clavispora(登录号FJ517545.1)菌株的序列同源性最高。将分离获得的菌株回接到健康草莓植株上,表现出与田间相同的发病症状,重新分离能够得到相同的病原物。通过菌株形态特征、基因组ITS序列分析及致病性接种试验,鉴定出福建省草莓根腐病病原菌为棒形拟盘多毛孢(Pestalotiopsis clavispora)。

不同药剂对草莓红中柱根腐病的田间防效试验

本文以蒸馏水作对照,比较了5种化学药剂对红颜草莓红中柱根腐病的田间药效。根据5种药剂的推荐使用浓度对红颜草莓苗进行浸根处理,分别在浸根处理后9、12、15、18 d,调查统计不同处理的病情指数、防治效果。结果表明,在草莓感病期间,72%农用链霉素1 000倍液的防效为65.97%,99%噁霉灵4 000倍液的防效为59.07%,二者无显著差异,防效较好,防效高于其他3种药剂。

橡胶树红根病患病与健康植株根际土壤微生物结构及多样性分析

为探究红根病对橡胶树根际土壤微生物多样性的影响,分别以患红根病和健康橡胶树根际土壤为研究对象,采用Illumina MiSeq高通量测序,分析了样本间的微生物群落结构和组成差异;同时测定根际土壤理化性质,分析其与土壤微生物群落的相关性。结果表明:患红根病橡胶树根际土壤真菌多样性显著降低,OTU数量和Alpha多样性指数均低于健康橡胶树根际土壤;患病植株根际土壤细菌多样性略高于健康植株根际土壤;患病植株根际土壤中真菌的群落结构发生明显改变,细菌群落结构变化较小;在属水平上,共检测出289类土壤真菌、525类土壤细菌,病原菌Ganoderma在患病植株根际土壤中相对丰度高达31.32%,在健康植株根际土壤中未检测到;有机质、有效磷、速效钾含量和pH在健康植株根际土壤中含量高,碱解氮在患病植株根际土壤中含量高;相关分析结果显示,Ganoderma丰度与土壤有机质含量和pH呈显著负相关。该结果为揭示红根病发生的根际微生态机制及研发红根病综合防控技术提供理论参考。

药剂拌种防治木耳菜立枯病的定量效应研究

采用回归通用旋转设计对多菌灵（ｘ５）、瑞毒霉（ｘ４）、粉锈宁（ｘ１）、代森锰锌（ｘ３）和敌唑酮（ｘ２）五种药剂不同用量拌种防治木耳菜立枯病的效果进行了比较研究。结果表明，五种药剂控病效果大小顺序是ｘ５＞ｘ４＞ｘ１＞ｘ３＞ｘ２，多菌灵、瑞毒霉和粉锈宁在适宜用量下的防效分别为９９．２％、８１．４％和２６．８％。混用无明显增效作用。

红芸豆根腐病拮抗内生细菌的筛选和鉴定

为获得对红芸豆根腐病菌具有良好拮抗效果的菌株,研究采用组织分离法,从苍耳中分离内生细菌,以红芸豆根腐病菌尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)为靶标菌,通过平板对峙法、形态特征观察和分子生物学方法进行拮抗细菌的筛选和鉴定,采用共培养法研究拮抗细菌对尖镰孢菌的抑制作用,并测定拮抗细菌抑菌谱及其对红芸豆种子萌发的影响。结果表明,从苍耳根、茎、叶中共分离得到36株内生细菌,从中筛选到对尖镰孢菌具有明显抑制作用的菌株xj-1-2。结合形态学和gyrB基因序列分析,结果将菌株xj-1-2鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis);xj-1-2能导致尖镰孢菌菌丝分枝增多,产孢量减少;在4、6、8 h时对孢子萌发抑制率分别为100%、79.45%、73.54%。该菌株具有广谱抑菌活性,对厚垣镰孢菌、三线镰孢菌、芬芳镰孢菌等8种病原真菌均具有不同程度的拮抗作用。分别用浓度为1×10^(7)、1×10^(8)、1×10^(9)cfu/mL的xj-1-2菌悬液和发酵液处理红芸豆种子后,发芽率和芽长与对照相比均无显著差异,说明xj-1-2对红芸豆生长具有安全性。从苍耳中分离筛选到具有广谱抑菌活性的贝莱斯芽孢杆菌xj-1-2菌株,为红芸豆根腐病的生物防治提供了菌种资源。

9种植物提取物对红芸豆根腐病菌的抑制作用

目的:筛选对红芸豆根腐病菌具有抑制作用的植物提取物,为红芸豆根腐病生物防治及新型植物源杀菌剂的开发提供理论依据。方法:以红芸豆根腐病病原菌立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)和尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)为供试菌株,采用菌丝生长速率法,对丁香、独活等9种植物乙醇提取物的抑菌活性进行测定。结果:在质量浓度为2.0mg·mL^-1时,细辛、百里香、秋葵、丁香提取物对立枯丝核菌抑菌活性较强,菌丝生长抑制率均为100%;丁香、细辛提取物对尖孢镰刀菌抑制效果较好,抑制率分别为100%、84.67%。室内毒力试验结果表明,丁香提取物对立枯丝核菌和尖孢镰刀菌抑制中浓度(EC50)分别为0.2766mg·mL^-1和0.2882mg·mL^-1。结论:丁香提取物可用于防治红芸豆根腐病,具有开发应用前景。

草莓红中柱根腐病的研究进展

草莓红中柱根腐病是由宿主特异性强的草莓疫霉菌(Phytophthora Fragaria)侵染所致。该病的发生呈逐年上升的趋势,特别是在连续种植草莓的重茬地块,严重时可造成整个草莓种植地的毁灭,已成为草莓产业发展的主要障碍之一。从草莓红中柱根腐病的发现与危害、病原菌的病原物生物学以及分子检测手段、病害症状及防治方法等方面全面阐述了国内外草莓红中柱根腐病的研究进展,并对今后的研究方向进行展望,以期为相关研究提供一些参考和理论依据。

海南3种相思树红根病病原菌的鉴定

为进一步明确引起海南相思树根腐病的病原灵芝菌种类,利用形态学与分子生物学鉴定手段对发生于海南的台湾相思(Acacia. confuse Merr.)、马占相思(A. mangium Willd.)和耳叶相思(A. auriculiformis A.Cunn. ex Benth.)等3种相思树上的红根病的病原灵芝菌进行了种类鉴定。从海南省海口、儋州、昌江等市县采集3种相思树红根病病原菌的担子果,对其进行形态学鉴定。采用组织分离法分离菌株,完成了3种病原菌的致病性测定,构建了基于ITS、SSU与LSU基因的多基因系统发育树,结合形态学与分子生物学鉴定结果,确定这3种相思树红根病病原灵芝菌均为热带灵芝[Ganoderma tropicum (Jungh.) Bres.]。

呼伦贝尔地区红三叶根腐病的发生危害与防治研究

2005～2006年通过田间调查与室内分离培养的方法，针对红三叶根腐病的发生与防治进行了研究，明确了红三叶草根腐病在呼伦贝尔的发生危害程度，病原菌种类及病原菌的特征，提出了综合防治措施，对指导生产有一定作用。

基于MAXENT的草莓疫霉红心病在中国的适生性分析

草莓疫霉红心病是草莓的重要病害,预防和控制该病害在中国扩展蔓延十分重要。本研究利用MAXENT生态位模型预测草莓疫霉红心病在中国的适生区并分析影响病害适生的环境变量,结果表明长江中下游流域草莓主产区是该病害的适生区。最冷季节平均温度、最干季度降水量和年平均温度是影响病害发展的主要因素。