利用正交设计优化小苍兰ISSR-PCR反应体系

通过L16(45)正交试验,研究了镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度这5个因素在4个水平上对ISSR-PCR的影响,建立了适合于小苍兰ISSR-PCR的反应体系。优化体系为:25μLPCR反应体系中含有1×Taq酶缓冲液(10 mmol.L-1KCl,8 mmol.L-1(NH4)2SO4,10 mmol.L-1Tris.HCl,pH9.0,0.05%NP-40),2 mmol.L-1MgCl2,0.06 U.μL-1Taq酶,0.4μmol.L-1引物,4.0 ng.μL-1模板DNA,dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.6 mmol.L-1。利用温度梯度PCR,确定了最适宜的退火温度为51.5℃。该优化体系的建立为下一步对小苍兰进行ISSR分子标记奠定了基础。

光质对小苍兰茎尖试管培养的影响

以小苍兰茎尖为外植体，分别置于白光（４００～６９０ｎｍ）、红光（５９０～６９０ｎｍ）、黄光（５２０～６４０ｎｍ）、蓝光（４００～５３０ｎｍ）、绿光（５００～５９０ｎｍ）和黑暗下培养，研究不同光质对小苍兰茎尖试管培养的影响。结果表明：白光下愈伤组织及芽的分化速度最快，芽的分化率和生物量最高，试管苗叶片数多、生长良好，但愈伤组织诱导率及根分化受到明显的抑制；红光下根的分化速度最快，根分化率及综合培养力最高；蓝光对愈伤组织诱导率、叶绿素含量以及试管苗的干重／生物量有明显的促进；绿光和黑暗对茎尖的分化与生长均有不利影响，试管苗出现玻璃化现象。

小苍兰花色色素成分及稳定性分析

以小苍兰(Freesia refracta)16个不同花色品种及后代为试验材料,对花瓣色素用特征显色反应和紫外-可见光谱扫描,分析其色素的成分和花色素苷的稳定性。结果表明,小苍兰花色的色素属于类黄酮化合物,含黄酮和花色素苷类物质,可能含有异黄酮,不含黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、查耳酮和橙酮,其中黄色系品种及后代还含有类胡萝卜素。避光下小苍兰花色素苷的稳定性要强于光照;温度对花瓣色素的稳定性有一定的影响。

小苍兰种质遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR(Inter Simple Sequence Repeat)分子标记对12份小苍兰(Freesia refracta)种质进行了遗传多样性分析研究。从34条ISSR引物中筛选出了12条适宜的引物。这12条引物中每条引物可扩增出5～11条DNA片段,共扩增了96个条带,其中多态性片段62条,平均每条引物可产生5.2条多态性片段,多态性条带比率(PPB)为64.6%。经NTSYS-pc分析,12份小苍兰种质间的遗传距离(GD)的变化范围为0.123～0.907,平均为0.442。根据Nei’s相似系数建立了UPGMA聚类图,在相似系数为0.56时,可将紫色花系的小苍兰种质与其它种质分开,形成两个组。结果表明,ISSR分子标记可有效地分析小苍兰种质资源的遗传多样性和亲缘关系,为小苍兰的杂交育种和新品种保护提供理论基础。

香雪兰外植体形态学极性决定的体细胞胚胎发生

在含有２ｍｇ／ＬＩＡＡ和３ｍｇ／ＬＢＡＰ的改良Ｎ６培养基上，香雪兰（ＦｒｅｓｉａｒｅｆｒａｃｔａＫｌａｔ）花序外植体经直接体细胞胚胎发生途径再生出新的植株。在这一形态发生过程中，一个引人注意的现象是，所有的体细胞胚都出现在花序轴切段的原形态学下端（称为胚发生端，ＥＥ），而在形态学上端（称为非胚胎发生端，ＮＥＥ）无体细胞胚形成。这一形态发生的极性与地心引力的方向和外植体在培养基上的放置位置无关。在培养的早期，仅于胚发生端观察到了起始细胞的分裂。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明，在培养了１ｄ的外植体的胚发生端出现了两个特殊的多肽成分，而在非胚发生端则未检测到这两种多肽。高效液相色谱分析表明，培养前外植体切段两端的内源激素（ＩＡＡ）的含量无显著差别。但经过一段时间的培养，胚发生端的ＩＡＡ含量明显高于非胚发生端的ＩＡＡ含量，表明内源激素在体细胞胚胎发生的诱导过程中起着关键的作用。在香雪兰体细胞胚胎发生诱导的过程中，由于花序轴切段两端在分子水平和生理水平上均存在差异，使这一系统有可能成为研究体细胞胚胎发生机理的有用实验材料。

不同氮磷钾配比追肥对盆栽小苍兰生长发育的影响

从花芽开始分化到花莛抽出,用氮、磷、钾不同配比的营养液浇施小苍兰,观测株高、花期、花朵数、球重等指标,研究其对盆栽小苍兰生长发育的影响。结果表明:氮、磷、钾的适宜比例可促进植株的高生长,增加总花朵数,提高盆栽小苍兰的观赏性。氮、磷、钾浓度分别为100、100、100mg.L-1时,可促进植株的生长,有利于花枝的伸长;氮、磷、钾浓度分别为100、200、100 mg.L-1时,有利于总花朵数的增加;氮、磷、钾浓度分别为200、50、100 mg.L-1时,有利于新球球重的增加;氮、磷、钾浓度分别为100、501、00 mg.L-1时,有利于新球球径的增加。

小苍兰“上农金黄后”球茎组织培养的初步研究

以小苍兰优良品种“上农金黄后”的小籽球为外植体,研究了植物生长调节剂对其球茎离体培养及植株再生的影响。结果表明,植物生长调节剂对小苍兰“上农金黄后”小球茎离体培养有着较明显作用,生长素NAA与2,4-D对愈伤组织及不定芽的诱导作用相近,以较低浓度与BA组合诱导效果良好。最佳诱导培养基为MS+BA 2.0mg.L-1(单位下同,略)+NAA 0.2～0.5;最佳生根培养基为MS+NAA 0.2+0.25%活性炭。

小苍兰切花保鲜技术研究

[目的]研究不同保鲜剂对小苍兰切花瓶插寿命和观赏品质的影响。[方法]研究8-羟基喹啉(8-HQ)、柠檬酸(CA)、硫代硫酸钠(STS)和氯化钙(CaC l2)等化学药剂的不同组合处理对小苍兰切花的保鲜效果。[结果]结果表明,在9个保鲜剂组合中,T8(300 mg/L8-HQ+150 mg/L CA+2 g/L CaC l2)保鲜效果最好,可以使花茎挺直、增大,明显延长小苍兰的瓶插寿命。[结论]保鲜剂处理对小苍兰切花的水分平衡有明显的改善作用。

PP333对盆栽小苍兰生长发育的影响

分别采用浸泡法和喷施法用多效唑(PP333)水溶液对盆栽小苍兰进行处理,测定并比较其生长指标,以确定PP333对小苍兰生长发育的影响。结果表明:(1)小苍兰高度生长在定植后2个月内基本完成,对照组高度生长增量比处理植株大;(2)浓度低时,PP333浸泡时间长有利于其矮化;浓度高时,浸泡时间短有利于植株矮化;用60 mg/L PP333浸泡种球10 h的植株矮化效果最好;(3)用不同浓度的PP333溶液喷施处理,小苍兰的生长量均受到一定程度的抑制,其中以120 mg/L的矮化处理最为明显。

不同化学药剂预处理对小苍兰切花的保鲜效应

实验研究了STS、BA、8-HQ、蔗糖等化学药剂不同配方对小苍兰切花预处理的保鲜效果。对预处理的切花经置于鲜花专用箱内模拟贮运24小时后,取出于自来水中瓶插,观测其鲜重变化、瓶插寿命、单朵花期以及开花率。结果表明,处理E(BA1 0Mm+8-HQ250mg/L+蔗糖10%),能明显提高小苍兰切花的瓶插品质其保鲜效果较好。

水稻籼粳亚种杂交1代的光合光抑制特性

用４个粳稻品种，５个籼稻品种进行正反交，得到１６个籼粳杂交Ｆ１，测定其光合光抑制特性。结果表明：通常籼稻对光抑制的敏感性大于粳稻，但籼稻中也有耐性强的品种。籼粳杂交稻Ｆ１的光抑制介于双亲之间，并偏向其母本。光抑制程度与ＰＳⅡ活性一致，其机理与双亲核编码的ＳＯＤ诱导活性和母本质体编码的Ｄ１蛋白量有关。比较釉粳杂交稻“３０３７／０２４２８”和税型杂交稻“汕优６３”的光抑制特性发现，在光抑制条件下，籼粳杂交稻ＳＯＤ诱导活性和Ｄ１蛋白量保持能力较高，因而ＰＳⅡ和光合能力表现比较稳定。因此，为培育耐光抑制的籼粳杂交稻，筛选耐性强的品种作母本是籼粳亚种配组的重要原则。

香雪兰种子胚的组织培养和植株再生

香雪兰的成熟胚和未成熟胚切段，在含有ＩＡＡ２ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ０３ｍｇ／Ｌ和ＢＡＰ０５ｍｇ／Ｌ的改良Ｎ６培养基上可形成半透明的瘤状愈伤组织。将这种愈伤组织培养于含有ＮＡＡ０３ｍｇ／Ｌ、ＢＡＰ０５ｍｇ／Ｌ和ＫＴ０５ｍｇ／Ｌ的ＭＮ６培养基可分化出丛生芽。生根培养基为含ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ的改良Ｎ６培养基。相同的外植体可在ＭＮ６＋ＩＡＡ２０ｍｇ／Ｌ＋ＢＡＰ３０ｍｇ／Ｌ培养基上通过体细胞胚胎发生途径直接形成小植株。讨论了外源激素对香雪兰种子胚离体培养的作用。

瓶插小苍兰切花保鲜液试验初探

以蔗糖、8-羟基喹啉(8-HQ)、抗坏血酸、柠檬酸、Ca(NO3)2等配制的保鲜液对小苍兰切花进行综合保鲜效果试验,调查各保鲜液对小苍兰瓶插寿命、水分平衡、鲜重变化、观赏值的影响。结果表明:4种保鲜液均能延长小苍兰切花的瓶插寿命,即显著提高日平均观赏值,改善小苍兰切花水分吸收状况。综合效果看,2%蔗糖+0.1%Ca(NO3)2+200 mg/L 8-HQ+100 mg/L柠檬酸的配方对于延缓小苍兰鲜切花的衰老最为有效,切花瓶插寿命比对照延长了4 d。

喷施水杨酸、硼酸和磷酸二氢钾对小苍兰生长发育的影响

以不同浓度的水杨酸、硼酸和磷酸二氢钾,分别处理小苍兰(Fressiarefracta)。研究其对株高、花序抽出时间、开花期、小花朵数、新球、子球质量和大小的影响。结果表明,叶面喷施高浓度水杨酸可延迟花期,影响开花一致性,但对小苍兰株高生长、新球和子球的生长无明显作用;硼酸影响花芽发育,质量浓度4000mg/L可延长花期;磷酸二氢钾处理能显著促进子球数量,质量浓度2000mg/L可延长花的观赏期。

香雪兰生长发育与矿质营养的吸收规律

对香雪兰(Freesia refracta Klatt)地上部、地下部的生长动态进行了试验研究,分析了各时期叶片和新球中N,P,K,Ca,Mg,Fe元素的吸收规律.结果表明,10月上旬栽植的香雪兰新球直径大小变化与干鲜重的变化规律基本一致,不同时期有不同的变化幅度.栽植后10～14周新球直径、干鲜重的增长较快,花期球茎干鲜重增长迅速,4月上旬到下旬球茎干鲜重及直径均达生长高峰.香雪兰地上部的生长高峰在生长发育的前期,地下部新球生长高峰出现在香雪兰花后.香雪兰生长期中N的含量最高,但N含量变化不大;对K的吸收大于对P的吸收,在新球充实生长后期,对P的需求量很大,4月上旬出现峰值.植株对Ca,Mg,Fe的吸收与地上部的生长发育有一定的联系.

香雪兰的直接与间接体细胞胚胎发生

香雪兰的体细胞胚胎发生可通过两种途径进行,即直接发生与间接发生。在直接发生方式中,体细胞胚直接来源于尚未完全分化的外植体表皮细胞;体细胞胚与母体组织以一种类似胚柄的结构相联系。间接发生方式中,体细胞胚的形成要经过一个愈伤组织阶段。以是否能形成体细胞胚分类,可将愈伤组织分为胚性和非胚性愈伤组织。以间接方式形成的体细胞胚是由胚性愈伤组织中的一种决定细胞发育来的。这种体细胞胚不具有类似胚柄的结构,而与母体组织共同形成一个复合体。体细胞胚具有自己独立的维管束系统,在脱离母体组织后能够独立发育成株。

几种植物体细胞胚胎发生标记蛋白的研究

利用ＳＤＳ一聚丙烯酰胺凝胶电泳对西洋参（ＰａｎａｘｑｕｌｎｇｕｅｆｏｌｉｕｓＬ．）、香雪兰（Ｆｒｅｅｓｎｉｒｅ－ｆｒａＫｌａｔｔ．）、光棘豆（ＯｘｙｔｒｏｐｏｌｅｐｔｏｐｈｙｌｌａＬ．）和草木气（Ｍｅｄｌ’ｃａｇｏｓｕａａｖｅｏｌｅｎｓＬ．）４种植物的胚性、非胚性愈伤组织及胚状体的可溶性蛋白组成进行了分析。结果表明，在这几种植物的胚性愈伤组织中均存在非胚性愈伤组织中没有的特异蛋白质。在西洋参和光棘豆中，这些胚性蛋白质在胚状体中也能检测到。另外，在香雪兰和光棘豆的非胚性愈伤组织中还发现了胚性愈伤组织中没有的蛋白质成分。特异性的胚性蛋白质可以作为分子标记来鉴别潜在的胚性培养物，跟踪胚胎发育，并为进一步探讨体细胞胚胎发生的基因调控和分子机制提供基础。

小苍兰生长发育与光照强度关系的研究

小苍兰经高、中、低三种不同强度的人工光照处理，结果表明，植株的高度随光强的降低而增高，叶面积、植株、根、新球的干重及花芽的数量均随光强的升高而增加。光照强度不影响小苍兰的花芽分化，在三种不同强度的光照下，均于第３５天分化了花芽。

一些化学药剂对香雪兰切花保鲜的影响

６－苄基腺嘌呤（６－ＢＡ）、硫代硫酸银（ＳＴＳ）、二氯化钴（ＣｏＣｌ２）、乙醇等化学药剂均可不同程度地影响香雪兰切花瓶插寿命和品质。其中，６－ＢＡ、ＳＴＳ对香雪兰切花的保鲜特别是品质改善方面效果明显，ＣｏＣｌ２的保鲜效果亦较好。