基于ERK5信号通路探讨薯蓣健脾益智合剂对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨薯蓣健脾益智合剂对血管性痴呆(VaD)大鼠海马神经元凋亡的影响以及相关作用机制。方法:采用改良双侧颈总动脉结扎(2-VO)法建立VaD大鼠模型,将120只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和治疗组,每组30只。治疗组予以10 mL/(kg·d)薯蓣健脾益智合剂灌胃,正常组、假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃,持续8周。观察大鼠一般状态,并于造模后第7天及造模后治疗4、8周分别进行行为学检测,苏木精-伊红(HE)染色观察海马神经元组织学改变,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色观察海马神经元凋亡情况,免疫组织化学法检测丝分裂原活化蛋白激酶K2(MEKK2)、丝分裂原活化蛋白激酶K3(MEKK3)和丝裂原激活蛋白激酶5(MEK5)、细胞外信号调节激酶5(ERK5)表达的变化,蛋白免疫印迹法检测MEKK2、MEKK3和MEK5、ERK5的蛋白表达。结果:与正常组及假手术组比较,模型组行为学表现差异显著,变性神经元增加,神经元凋亡率增加(P<0.01),MEKK2、MEKK3和MEK5、ERK5的表达减少;与模型组比较,治疗组行为学表现改善,变性神经元减少,神经元凋亡率降低(P<0.05或P<0.01),MEKK2、MEKK3和MEK5、ERK5表达增加。结论:薯蓣健脾益智合剂可能通过上调ERK5信号通路,抑制海马神经元凋亡,促进海马神经元的修复进而治疗VaD。

白藜芦醇激活细胞外信号调节激酶5信号蛋白促进小鼠MC3T3-E1细胞增殖

背景:细胞外信号调节激酶5信号蛋白对生物体的存活不可或缺,白藜芦醇能通过多种途径促进成骨细胞增殖,但其是否能通过细胞外信号调节激酶5信号蛋白调控成骨细胞功能还需进一步验证。目的:探究细胞外信号调节激酶5对MC3T3-E1细胞增殖以及相关分泌蛋白的调控作用,进一步验证白藜芦醇通过激活细胞外信号调节激酶5完成上述过程。方法:小鼠MC3T3-E1前成骨细胞分别用完全培养基、XMD8-92(细胞外信号调节激酶5抑制剂)、表皮生长因子(细胞外信号调节激酶5激活剂)和白藜芦醇单独干预及XMD8-92+表皮生长因子、白藜芦醇+XMD8-92干预后,通过Western blot检测各组细胞内细胞外信号调节激酶5、磷酸化细胞外信号调节激酶5蛋白,增殖相关蛋白Cyclin D1、CDK4、PCNA,以及成骨细胞分泌蛋白骨保护素、核因子κB受体活化因子配体的表达情况,使用细胞免疫荧光染色检测各组细胞外信号调节激酶5、骨保护素和核因子κB受体活化因子配体荧光强度,使用EdU染色检测各组细胞增殖情况。白藜芦醇干预MC3T3-E1细胞的适宜浓度及时间由细胞形态学观察和CCK-8实验确定。结果与结论:①细胞外信号调节激酶5信号蛋白的激活能有效促进MC3T3-E1细胞增殖、上调骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比值;②白藜芦醇干预MC3T3-E1细胞的适宜浓度及时间为5μmol/L,24 h;③白藜芦醇可以激活细胞外信号调节激酶5信号蛋白,进而促进成骨细胞增殖,并上调骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比值;④研究结果表明,白藜芦醇可以通过激活细胞外信号调节激酶5信号蛋白促进MC3T3-E1细胞增殖,并通过激活细胞外信号调节激酶5信号蛋白上调骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比值。

BMSCs外泌体miR-181通过靶向调控ERK5促进股骨骨折小鼠的成骨分化

目的:探讨BMSCs外泌体(BMSCs-Exos)对其体外成骨分化的调控作用,以及miR-181通过靶向ERK5实现的机制,并研究BMSCs-Exos和过表达miR-181对小鼠股骨骨折愈合的影响。方法:通过动态光散射(DLS)技术和Western blot法表征BMSCs-Exos,qRT-PCR和Western blot检测miR-181和ERK5表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181对ERK5的调控。使用Western blot和ELISA检测蛋白表达和ALP活性。在小鼠股骨骨折模型中注射miR-181 mimic或BMSCs-Exos,通过骨痂体积(CV)、骨体积分数(BV/TV)和相关蛋白评估骨折愈合效果。结果:BMSCs-Exos的粒径范围为50~150nm,Zeta电势为-25.69±2.88mV,表面标志物CD9、CD63、CD81显著表达。BMSCs-Exos组中miR-181表达上调(P<0.05),ERK5表达下调(P<0.05);mimic上调了miR-181表达并降低ERK5蛋白表达(P<0.05)。BMSCs-Exos转运miR-181通过靶向调控ERK5促进BMSCs体外成骨分化(P<0.05),且BMSCs-Exos和过表达miR-181均促进小鼠股骨骨折愈合(P<0.05)。结论:BMSCs-Exos通过转运miR-181、靶向调控ERK5促进BMSCs体外成骨分化,并有助于小鼠股骨骨折愈合。

氟暴露下SH-SY5Y细胞ERK5信号转导通路的改变

目的检测ERK5信号通路中磷酸化的细胞外信号调节激酶5(P-ERK5)及P-ERK5在氟暴露下SH-SY5Y细胞中的表达,探讨ERK5信号通路与氟暴露下SH-SY5Y神经损伤机制的关系。方法用不同剂量氟化钠(NaF,0.000、0.100、0.200、0.300、0.400、0.500、1.000、2.000、3.000、4.000及5.000 mmol/L)处理SH-SY5Y细胞24 h及48 h,采用CCK8实验筛选出低和高剂量氟中毒浓度;再以正常组SH-SY5Y细胞为参照,用低、高剂量氟化钠剂量分别处理SH-SY5Y细胞24 h和48 h,采用实时荧光定量PCR检测处理48 h时各组细胞的ERK5 mRNA水平,用Western blot检测P-ERK5、ERK5蛋白表达水平。结果染氟处理后,0.500、1.000 mmol/L NaF处理SH-SY5Y细胞24 h及48 h细胞的存活率均低于正常对照组(P<0.05),可作为低剂量组和高剂量组的染氟剂量;染氟48 h时,对照组、低剂量组和高剂量组SH-SY5Y细胞中ERK5的mRNA表达水平分别为1.00±0.00、0.85±0.08、0.94±0.21,组间比较均无统计学意义。染氟24 h时,P-ERK5蛋白高氟组较低氟组和正常组表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),而染氟48 h时,染氟组P-ERK5蛋白表达升高,各组间比较均有统计学意义(P<0.05),染氟24 h和48 h正常组、低氟组、高氟组P-ERK5蛋白表达水平分别为(0.20±0.05、0.28±0.04、0.50±0.18)、(0.28±0.01、0.46±0.02、0.61±0.08);染氟24 h后,总ERK5蛋白升高,高氟组较低氟组、正常组有意义(F=14.731,P<0.05),而染氟48 h后,染氟组较正常组升高有统计学意义(F=17.877,P<0.05),染氟24 h和48 h总ERK蛋白表达水平分别为(0.34±0.04、0.36±0.05、0.67±0.12),(0.55±0.02、0.72±0.03、0.78±0.08)。结论ERK5信号通路中P-ERK5蛋白及ERK5蛋白在慢性氟中毒时被激活,随着染氟时间与染氟剂量增加其表达水平出现逐渐升高,其可能参与代偿性神经保护机制对抗氟的神经毒性作用。

结肠癌患者癌组织中CDCA5的表达变化及机制

目的观察结肠癌患者癌组织及癌旁正常组织中细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)的表达水平,并探讨其在结肠癌发病中的机制研究。方法收集石家庄市人民医院住院治疗的结肠癌组织及癌旁组织各30份,采用免疫组织化学检测结肠癌组织及癌旁正常组织中CDCA5的蛋白水平,采用qRT-PCR、Western Blot检测结肠癌患者癌组织及癌旁正常组织中CDCA5的mRNA及蛋白表达水平,同时采用qRT-PCR和Western blot检测癌组织及癌旁正常组织细胞周期蛋白B1(cyclinB1)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、P21、半胱氨酸天冬氨酸酶-3(caspase3)mRNA及蛋白的表达。结果结肠癌患者癌组织中CDCA5在mRNA及蛋白水平明显高于结肠癌旁正常组织(P<0.01),癌组织相关基因cyclinB1、ERK、P21的mRNA及蛋白表达均显著增高(P<0.01),而caspase3表达显著降低(P<0.05或<0.01)。结论结肠癌组织中CDCA5高表达,可能通过上调cyclinB1、ERK、P21及下调caspase3参与结肠癌的发生发展。

苦参碱对骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的探讨苦参碱在MG-63细胞中促凋亡的作用及机制。方法实验分为0浓度组和10%苦参碱组,分别灌胃生理盐水和10%苦参碱制备大鼠含药血清,干预人成骨肉瘤细胞株MG-63。采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测c-myc、胱天蛋白酶9(caspase-9)基因的表达,采用免疫印迹(Western blot)法检测细胞外信号调节激酶5(ERK5)信号通路中相关蛋白Nur77、丝裂原激活蛋白激酶5(MEK5)及凋亡相关蛋白c-myc,caspase-9的表达水平。结果与0浓度组相比,10%苦参碱组能显著抑制MG-63细胞增殖,并促进其凋亡;荧光定量PCR实验结果表明,10%苦参碱组能抑制c-myc转录,并促进caspase-9转录;Western blot实验结果表明,在ERK5信号通路中,10%苦参碱组Nur77、MEK5及c-myc蛋白表达下调,而caspase-9蛋白表达上调。结论苦参碱可能通过干扰ERK5信号通路,调控c-myc,caspase-9等蛋白的表达,从而抑制MG-63细胞增殖,并促进其凋亡。

震荡流体剪切力通过ERK5信号通路促进成骨细胞增殖

目的探讨震荡流体剪切力(oscillatory shear stress,OSS)通过ERK5信号通路在诱导成骨细胞增殖中发挥的作用。方法对成骨MC3T3-E1细胞进行不同的处理,分为正常组、OSS组、XMD8-92组和OSS+XMD8-92组。采用MTT实验分别测定4组细胞的增殖活性并绘制生长曲线;蛋白免疫印迹法分别检测P-ERK5、ERK5和Cyclin D1等蛋白水平变化。结果 OSS可显著增加成骨MC3T3-E1细胞增殖活性,但此效应可被ERK5高选择性抑制剂XMD8-92阻断。OSS可显著上调Cyclin D1的表达,而XMD8-92可显著下调OSS诱导的Cyclin D1的表达。结论 OSS通过激活ERK5信号通路促进成骨细胞增殖,Cyclin D1是ERK5信号通路下游的重要靶点基因。

纳米金抑制Ang-2和RGS-5表达导致裸鼠肝癌血管正常化

目的:观察纳米金在一定时间窗内,对裸鼠H22肝癌组织中血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)、G蛋白信号调节蛋白-5(RGS-5)表达及肝癌血管正常化的影响。方法:6周龄BALB/c裸鼠48只,从右腋皮下注入H22肝癌细胞,肿瘤形成约3～4 mm大小,随机分为对照组(12只,注入生理盐水)和实验组(36只)。实验组从肿瘤周围及瘤内注入纳米金溶液0.2 mL(浓度为500 nmol/L),每天1次;连续给药3 d、7 d、11d后,分批处死12只,取肿瘤标本,用免疫化学染色法检测Ang-1、Ang-2及RGS-5的表达,并用电镜观察肿瘤血管壁周细胞形态。结果:(1)Ang-1在纳米金治疗后第3 d、第7 d及第11 d阳性率分别为16.7%、50.0%和16.7%,均高于对照组(8.3%),差异显著(P<0.05);其中实验组第7 d时Ang-1阳性率最高,与其在第3 d、第11d时比较,差异显著(P<0.05)。Ang-2在纳米金治疗后第3 d、第7 d及第11 d阳性率分别为33.3%、16.7%和41.7%,均低于对照组(58.3%),差异显著(P<0.05);其中Ang-2在第7 d时阳性率最低,与其在第3 d、第11 d时比较,显著差异(P<0.05)。(2)RGS-5在纳米金治疗后第3 d、第7 d和第11 d阳性率分别为33.3%、16.7%和50.0%,其中第7 d阳性率最低;低于对照组(50.0%)及第3 d、第11 d实验组,差异显著(P<0.05)。(3)不成熟周细胞覆盖率在纳米金治疗后第7 d时最低,为19.6%±4.3%,低于对照组(64.8%±11.7%)及第3 d(32.5%±7.9%)、第11 d(41.2%±9.1%)实验组,差异显著(P<0.05)。电镜观察见实验组裸鼠在纳米金治疗后第7 d血管外壁周细胞形态多数趋于正常,完整覆盖内皮细胞;而对照组周细胞形态大小不一、结构不完整,对内皮细胞覆盖少。结论:纳米金在其用药7 d时间窗内,能最大限度地通过抑制Ang-2和RGS-5在裸鼠肝癌组织中的过度表达,减少不成熟周细胞对新生血管的覆盖,使裸鼠肝癌血管正常化。

冠心康含药血清通过活化ERK5对ox-LDL负载的巨噬细胞胞葬作用的影响

目的:探讨冠心康通过活化ERK5抗动脉粥样硬化的潜在分子机制.方法:用ERK5抑制剂(ERK5-IN-1和XMD8-92)干预RAW264.7细胞,探讨ERK5失活对巨噬细胞胞葬作用的影响.用ox-LDL干预RAW264.7细胞建立巨噬细胞胞葬作用功能受损的细胞模型,然后在存在或不存在XMD8-92干预的情况下,用冠心康含药血清处理该细胞模型.流式细胞仪检测巨噬细胞的胞葬率,RT-qPCR和Western blot法检测巨噬细胞ERK5和C1qA的mRNA和蛋白的表达.结果:ERK5抑制剂XMD8-92和ERK5-IN-1均可抑制RAW264.7细胞的胞葬作用,抑制ERK5的活化和C1q A mRNA和蛋白的表达.冠心康含药血清可增强ox-LDL导致的受损的巨噬细胞胞葬作用,这一作用与冠心康活化ERK5和上调C1q A mRNA和蛋白的表达有关.结论:ERK5激酶的失活可通过下调C1qA的表达损伤巨噬细胞胞葬作用;冠心康可通过活化ERK5上调C1qA的表达,促进ox-LDL负载的巨噬细胞胞葬作用.

ERK5在结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌转移的关系

目的:检测和分析细胞外信号调节激酶5(ERK5)蛋白在原发性结直肠癌组织和癌旁正常黏膜组织中的表达情况及其与结直肠癌临床病理参数的关系,探讨ERK5的临床意义。方法:使用组织芯片和免疫组化的方法检测338例原发性结直肠癌癌组织和80例癌旁正常组织中ERK5的表达,分析ERK5表达与结直肠癌的临床病理参数及预后的相关性。结果:80例癌旁正常黏膜中,ERK5低表达59例(73.8%)、高表达为21例(26.2%);338例结直肠癌组织中ERK5低表达204例(60.4%)、高表达134例(39.6%);二者中的ERK5蛋白表达有显著差异(P<0.05)。在338例结直肠癌组织中,27例发生远处转移患者的癌组织中ERK5高表达率为63.0%,而311例未发生远处转移患者的癌组织中ERK5高表达率为37.6%,二者之间有显著差异(P<0.05)。但癌组织中ERK5的表达水平与患者性别、年龄、体重指数、肿瘤位置、T分期、N分期、TNM分期和分化程度无明显相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示在结直肠癌组织中ERK5高表达的病人总体5年生存率与低表达组无明显差异(P>0.05)。结论:ERK5蛋白在癌组织中的表达较癌旁正常组织高;发生远处转移的结直肠癌组织中ERK5蛋白的表达水平明显高于未发生远处转移的癌组织中ERK5水平。ERK5可能是一个促进肿瘤远处转移的因子。

BMPs-ERK5信号通路调控人牙周膜干细胞成骨分化的研究

目的比较骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMP)2、7、9对人牙周膜干细胞﹙human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs﹚成骨分化的诱导作用,探讨BMPs-ERK5信号通路在成骨分化中的作用。方法首先采用组织块酶消化法分离培养原代h PDLSCs并鉴定,利用腺病毒载体介导的GFP、BMP2、BMP7和BMP9(Ad-GFP、Ad-BMP2、Ad-BMP7、Ad-BMP9)分别感染h PDLSCs,通过早期成骨分化指标碱性磷酸酶活性定性和定量检测、茜素红染色检测晚期成骨分化指标钙盐结节沉积情况、qRT-PCR检测细胞成骨分化相关基因骨钙蛋白和骨桥蛋白mRNA表达,比较发现BMP9对细胞成骨分化的作用最强;采用Ad-BMP9感染h PDLSCs 24 h后,检测BMP9作用PDLSCs后对ERK5磷酸化水平的影响和ERK5信号通路特异性抑制剂BIX02189预处理后BMP9-ERK5通路对h PDLSCs成骨分化的影响。结果 1分离培养的h PDLSCs为成纤维细胞样,呈漩涡状生长,抗波形蛋白表达阳性,抗角蛋白表达阴性,具有间充质属性和克隆形成能力。2BMP2、BMP7和BMP9均有促进细胞成骨分化作用,其中3组的碱性磷酸酶定量结果和成骨分化相关基因相对表达量与GFP组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),且BMP9效力最强。3Western blot检测显示BMP9增强p-ERK5的表达。而抑制剂BIX02189呈剂量依赖性地抑制p-ERK5的表达。BIX02189预处理细胞后、感染Ad-BMP9的结果显示,BMP9对细胞的促成骨作用较未处理组明显降低,其中BMP9组的碱性磷酸酶定量分析结果与成骨分化相关基因相对表达量与BIX02189处理组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 BMP9具有较强的促h PDLSCs成骨分化作用,ERK5信号转导途径在BMP9诱导h PDLSCs成骨分化过程中发挥了正向调节作用。

人肝癌多药耐药细胞中ERK5的表达

目的检测人肝癌多药耐药细胞(hepG2/ADM和BEL-7402/5-FU)及亲本细胞(hepG和BEL-7402)中ERK5的表达,探讨其对肝癌细胞多药耐药的影响。方法MTT法测定人肝癌多药耐药细胞株多种化疗药物的交叉耐药性,实时荧光定量PCR检测ERK5在人肝癌多药耐药细胞及亲本细胞中mRNA水平的表达,western-blotting检测ERK5蛋白水平的表达。结果hepG2/ADM对ADM、5-FU、CDDP的耐药指数分别为12.34、5.74、3.81;BEL-7402/5-FU对5-FU、VCR、OHP、MTX和ADM的耐药指数分别为15.32、10.08、5.85、6.74和3.26。与亲本细胞相比较,在hepG2/ADM细胞中ERK5mRNA和蛋白表达均升高,而在BEL-7402/5-FU细胞中ERK5mRNA表达降低,ERK5蛋白表达升高。结论ERK5的表达与人肝癌多药耐药的发生密切相关,为逆转治疗肝癌细胞多药耐药研究提供了新思路。

ERK5在胃腺癌组织中的表达及临床意义

目的检测和分析细胞外信号调节激酶5(ERK5)在人胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中蛋白和mRNA表达情况,探讨ERK5表达的临床意义。方法选取126例胃腺癌组织(胃腺癌组)和90例癌旁正常组织(正常组),采用免疫组织化学法检测两组ERK5蛋白表达,RT-PCR法检测ERK5 mRNA相对表达量,并分析ERK5蛋白、mRNA表达与胃腺癌临床病理参数的相关性。结果胃腺癌组及正常组ERK5蛋白表达阳性率及mRNA的相对表达量分别为92.8%、72.2%和(0.82±0.14)、(0.61±0.03),两组ERK5蛋白和mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。不同的病理分级分期的胃腺癌ERK5蛋白和mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),而不同的性别、年龄的胃腺癌ERK5蛋白、mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。Sperman等级相关分析法分析表明,ERK5蛋白和mRNA表达呈正相关(r=0.835,P<0.01)。结论胃腺癌组织中ERK5蛋白较癌旁正常组织高表达;分期越高分化程度越低及发生淋巴结转移的胃腺癌组织中ERK5的表达越高;提示ERK5和胃腺癌的恶性程度和转移密切相关。

黄芪甲苷基于MEK5/ERK5信号通路对阿尔茨海默病大鼠小胶质细胞活性的影响

目的研究黄芪甲苷基于丝裂原激活蛋白激酶5(MEK5)/细胞外信号调节激酶5(ERK5)信号通路对阿尔茨海默病(AD)大鼠小胶质细胞活性的影响。方法清洁级健康SD雄性大鼠60只,随机选取10只为正常组,其余50只建立AD模型,然后随机分为模型组、阳性对照组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组,每组10只。阳性对照组给予石杉碱甲(0.02 mg/kg)干预,正常组和模型组分别给予等体积的0.9%NaCl溶液,黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组分别给予15 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg的黄芪甲苷。各组均干预21 d,检测白介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,以及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、MEK5、ERK5表达。结果与正常组相比,模型组、阳性对照组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组IL-1、TNF-α水平及GRP78、CHOP、MEK5、ERK5表达升高(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组IL-1、TNF-α水平及GRP78、CHOP、MEK5、ERK5表达降低,且随剂量增加而降低(P<0.05)。结论黄芪甲苷基于MEK5/ERK5信号通路对AD大鼠小胶质细胞的活性具有抑制作用,可减少AD大鼠神经细胞的凋亡。

细胞外信号激酶蛋白5在卵泡刺激素介导的卵泡颗粒细胞甾体激素生成中的作用

目的研究细胞外信号激酶蛋白5(ERK5)在卵巢颗粒细胞甾体激素生成中的作用。方法采用Western blot检测在卵泡刺激素(FSH)刺激原代颗粒细胞甾体激素生成过程中ERK5的表达变化和激活情况,荧光共聚焦技术分析ERK5的亚细胞定位,腺病毒技术观察活化型ERK5和显性负性ERK5对颗粒细胞甾体激素生成的影响。结果 Western blot检测结果表明,FSH处理颗粒细胞后ERK5的表达随处理时间延长而下调,而ERK5活性形式的表达随处理时间延长而逐渐上升。荧光共聚焦技术分析结果显示,FSH的处理并没有明显影响ERK5在颗粒细胞中的定位。腺病毒技术观察结果发现,在细胞中联合感染活化型MEK5重组腺病毒和野生型ERK5重组腺病毒能促进FSH引起的细胞内StAR的表达升高和孕酮分泌,而显性负性ERK5重组腺病毒感染细胞则出现相反的效应。结论 ERK5可能促进了FSH介导的颗粒细胞甾体激素生成。

STAT5诱骗核苷酸对K562细胞中bcl-x启动子转录激活的调控

背景与目的:信号转导和转录活化因子5(signaltransducersandactivatorsoftranscription5,STAT5)组成性激活在慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)细胞恶性转化中起重要作用。本文研究STAT5诱骗核苷酸(decoyoligonucleotides,decoyODNs)对STAT5下游靶基因bcl鄄x转录激活的调控作用。方法:设计并合成decoyODNs、错配核苷酸(M鄄ODNs)和FAM标记decoyODNs。FAM鄄decoyODNs作为对照,在脂质体介导下转染白血病细胞K562,流式细胞仪(FCM)和倒置荧光显微镜检测FAM鄄decoyODNs的摄入情况。构建人bcl鄄x启动子的荧光素酶报告质粒pGL3b鄄bclxP,将其与decoyODNs或M鄄ODNs共转染K562细胞,检测转染后K562细胞中荧光素酶的表达。K562细胞分别转染decoyODNs和M鄄ODNs后,用RT鄄PCR检测bcl鄄xL表达,FCM检测细胞凋亡。结果:FAM鄄decoyODNs在终浓度0.04～4μmol/L范围内的摄入量呈剂量依赖性。24h时FAM鄄decoyODNs4μmol/L处理组转染效率高达99.1%,并在倒置荧光显微镜下也观察到细胞内有绿色荧光物质。decoyODNs处理组荧光素酶活性降低[(181.48±204.46)RLU/μgprotein],与对照组[(675.26±62.91)RLU/μgprotein]相比有显著性差异(P<0.05);而M鄄ODNs处理组细胞荧光素酶的活性[(632.07±98.95)RLU/μgprotein]与对照?

麦洼牦牛G蛋白信号转导调节因子5克隆及蛋白结构分析

采用RT-PCR方法扩增并克隆麦洼牦牛G蛋白信号转导调节因子5(regulator of G protein signaling 5,RGS5)基因序列,利用ClustalX 1.83和Mega 5.0软件构建系统进化树,并选用多种生物信息学软件进行序列分析和蛋白结构预测。结果表明,所得麦洼牦牛RGS5基因长度为863bp,包含1个546bp的完整开放阅读框,编码181个氨基酸,GenBank登录号为KJ867514。系统进化树分析发现,麦洼牦牛RGS5氨基酸序列与普通牛亲缘关系最近,其次是山羊和绵羊。RGS5基因编码的蛋白质分子质量为20.94ku,理论等电点(PI)为6.35,它是一种以α-螺旋为主,不含信号肽的非跨膜、不稳定性蛋白。三级结构预测显示,麦洼牦牛与人RGS5蛋白三级结构相似性高达90.51%。以上结果为深入研究RGS蛋白功能积累科学资料。

MAPK家族ERK5信号通路的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是生物体内重要的信号转导系统之一,其亚族主要包括细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和细胞外信号调节激酶5(ERK5)。近年来研究发现,ERK5对细胞的增殖、分化及调节细胞功能有重要作用,并参与一些疾病的发生和发展,故阐明ERK5通路的作用机制,将为一些疾病的诊治提供新的思路与方法。现重点对ERK5的蛋白结构、生物学功能以及与疾病的关系进行综述。

RGS5和ATP1B1基因与原发性高血压的相关性研究

目的探讨中国汉族人群中G蛋白信号调节因子5(RGS5)和ATP1B1基因功能区标签单核苷酸多态性(SNP)与原发性高血压的相关性及变异位点间的交互作用。方法选择启动子、外显子和3’UTR区符合最小等位基因频率在中国北京汉族人群中>5%、R2≥0.80的SNP。对906例原发性高血压患者(EH组)进行SNP位点的基因分型,以性别和年龄与EH组匹配的894名血压正常者作为正常对照组。观察不同基因型和等位基因频率在EH组和对照组中的分布,并采用MDR软件分析各位点之间的交互作用。结果最终3个标签SNP入选。EH组与对照组SNP位点基因型分布和等位基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05);由2个基因SNP位点组成的单倍型,在EH组和对照组的分布比较差异也无统计学意义(P>0.05)。交互作用分析显示,2个或3个位点模型比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论3个标签SNP与EH无明显相关性,并且可能不存在交互作用。

ERK5基因-322G/T多态性与散发性结直肠癌易感性的关系

目的:探讨有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路ERK5基因-322G/T(rs3866958)单核苷酸多态性与中国华南地区散发性结直肠癌(CRC)易感性的关系。方法:采用Taqman-MGB荧光探针法检测华南地区835例肠癌和908例正常对照的ERK5基因-322G/T单个核苷酸的多态性。结果:ERK5基因单核苷酸多态性位点-322G/T等位基因在结直肠癌患者和健康对照人群中分布差异无统计学意义(P>0.05),但在BMI≥24kg/m^2的肥胖人群中-322G/T的分布差异显著,与GG基因型相比,GT、TT基因型携带者的CRC发病风险下降42.4%(OR=0.576,95%CI 0.413-0.804,P<0.01)。结论:ERK5基因-322G/T单核苷酸多态性与结直肠癌发病无明显相关性,但可显著降低肥胖患者发病风险;-322T基因型是中国南方人群散发性结直肠癌肥胖患者的独立保护因素。