快速龋病活跃性检测—刃天青药片的研究

目的研制一种能快速检测龋活性的刃天青成品药片,预测龋活跃性与幼儿乳牙龋蚀状况的相关性,为幼儿龋病预防工作提供一种成品化的预测方法。方法用研制的检测龋病活跃性的刃天青药片,和日本R.Dtest成品药片对照,分别检测大连市1019名4-6岁幼儿口腔情况并观察其纸片变色程度与龋失补牙数(dmft)的关系,评价与龋失补牙数(dmft)的相关性。结果本试验研制的刃天青药片变色程度与龋失补牙数(dmft)呈正相关关系(r=0.441,P<0.01),与对照组(r=0.364,P<0.05)无显著性差异(P>0.5);灵敏度为91.39%,特异性为20.65%,阳性预测值70.84%。结论本试验所研制的刃天青药片,灵敏度,准确率高,与日本R.Dtest成品药片相一致,可反映受试者的患龋现状。

2种方法测定氧化铜纳米颗粒对新生大鼠脑微血管内皮细胞毒性的比较研究

目的:比较实时细胞分析技术(RTCA)和刃天青法测定氧化铜纳米颗粒(CuO-NPs)对新生大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的细胞毒性的异同。方法:采用RTCA法确定BMECs细胞毒性实验的最佳细胞接种数量及染毒时间。分别用1.5、0.75、0.38、0.19、0.09 mg/mL的CuO-NPs染毒BMECs,以无细胞的培养液为对照组(0 mg/mL),分别以RTCA法及刃天青法比较其细胞毒性。通过比较2种方法所获得的IC_(50)值判断2种毒性测试方法的相关性。结果:每孔2.5×10~3个细胞为BMECs最佳接种浓度,接种后40h为最佳染毒时间。RTCA检测结果表明1.5、0.75 mg/mL的CuO-NPs染毒BMECs后约2 h开始细胞活性降低,并在染毒4 h内全部死亡。通过刃天青法分别在染毒3、12、24、36、48 h进行测定,得到与RTCA相似的结果,即1.5和0.75 mg/mL组的细胞毒性最大,且CuO-NPs对BMECs的细胞毒性呈剂量依赖性趋势。相关性分析结果显示2种方法所获得IC_(50)值相关系数为0.999,P=0.000,具相关性。配对t检验结果显示,差异无统计学意义(t=1.125,P=0.323)。从计算IC_(50)的R^2值来看,RTCA拟合曲线法R^2值高于刃天青法R^2值。结论:CuO-NPs体外作用于BMECs具有剂量依赖性的细胞毒性,RTCA方法与刃天青法测定BMECs细胞毒性结果具有相关性,RTCA方法所得结果可能更为准确,更适合于CuO-NPs的细胞毒性研究。

3种三七根腐病致病菌的抑菌植物筛选

【目的】筛选出对3种三七根腐病致病菌具有强抑菌效果的拮抗植物,为制定三七根腐病绿色安全的防控措施提供科学依据。【方法】针对三七根腐病的3种致病菌[假单胞杆菌属(Pseudomonas sp.,菌株号B857)、无色杆菌(Achromobacter marplatensis,菌株号B562)和产碱菌属(Candidimonas sp.,菌株号B2681)],选用16种常见草本植物进行乙醇超声波提取,用二倍稀释法稀释成5个浓度梯度进行平板打孔抑菌试验,测量抑菌直径并计算毒力回归方程及致死中浓度(LC50),采用刃天青微孔板法观测16种植物提取液对3种病原菌的最小抑菌浓度(MIC),筛选出抑菌效果强的植物进行田间三七苗覆盖试验,观测其对三七出苗及农艺性状的影响。【结果】毒力测定结果显示,大狼毒对3种病原菌均非常敏感,LC50均小于0.100 g/mL;紫茎泽兰和黄花蒿对B857和B562非常敏感,LC50均小于0.100 g/mL;苦蒿、艾草和万寿菊对B857非常敏感,鬼针草对B562非常敏感,LC50均小于0.100 g/mL。MIC测定结果表明,万寿菊、苦蒿和紫茎泽兰对3种病原菌的抑菌效果较强,其中,万寿菊对3种病原菌的综合效果最强,对B562和B2681的MIC低至1.875 mg/mL,对B857的MIC为3.750 mg/mL;苦蒿对B857和B562的MIC为1.875 mg/mL;紫茎泽兰对B2681的MIC为1.875 mg/mL,对B562和B857的MIC为3.750 mg/mL。田间化感作用试验结果表明,万寿菊覆盖方式的三七出苗率最高,为75.86%,苦蒿覆盖方式的出苗率最低,为65.43%;3种植物覆盖方式对三七茎粗、叶长和叶面积无显著影响(P>0.05),对三七苗株高有显著促进作用(P<0.05,下同)。万寿菊和苦蒿覆盖方式致使三七苗叶宽变窄,且与对照差异显著。【结论】万寿菊和紫茎泽兰对3种三七根腐病致病菌的综合抑菌效果较强,且对三七生长无显著化感作用,万寿菊可直接采收后作为覆盖物返田利用,紫茎泽兰需烘干打粉后施用。刃天青微孔板法可作为植物源提取物最小抑菌浓度的测定方法。

响应面法优化五脉百里香挥发油超临界CO_2萃取条件及抑菌活性分析

目的:研究五脉百里香挥发油超临界CO_2最优萃取条件,并对挥发油成分进行抑菌活性分析。方法:采用超临界CO_2萃取技术,在单因素实验的基础上,利用中心组合(Central Composite Design)设计原理进行响应面分析,确定萃取的最佳条件;并用刃天青显色法对挥发油进行大肠杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度测定。结果:五脉百里香挥发油的最佳提取条件为萃取温度45℃、萃取压力28 MPa、萃取时间2.72 h(163 min);对大肠杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度分别为2.17、1.09、0.54 mg·m L-1。结论:响应面法对五脉百里香挥发油超临界CO_2进行条件优化的方法合理可行,可提高对药材挥发油的提取率;对挥发油进行大肠杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度测定,发现对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最显著。

刃天青微量板法对沙门氏菌的抗菌敏感性试验

采用刃天青微量板法检测多株沙门氏菌对抗生素的耐药性,得到最小抑菌浓度(MIC)。通过肉眼观察和荧光检测都可判定沙门氏菌的耐药性,判定时间仅需5 h,刃天青法与微量肉汤稀释法检测得到的耐药性结果一致。其中用颜色观察能更清晰明确地分辨出耐药折点,荧光检测可以动态地反映细菌随时间变化的生长情况。刃天青微量板法具有简便、快速、灵敏度高的特点,能确定抗生素的耐药性和精确耐药MIC值。

对改良的三种最小抑菌浓度测试方法的探讨

对传统以肉眼观察浑浊程度判断最小抑菌浓度的测试方法进行了改良,探讨了浊度法、红四唑(TTC)显色法和刃天青显色法3种方法对连翘提取液MIC结果判断的影响。结果表明,刃天青显色法最优。