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Molecular methods for detection of pathogenic viruses of respiratory tract——A review
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作者 Md.Shahidul Kabir 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2018年第5期237-244,共8页
Human respiratory system is harbored by a vast array of transient and normal microbial flora.A number of pathogenic viruses were diagnosed from samples in different occasions from mild to severe infections of respirat... Human respiratory system is harbored by a vast array of transient and normal microbial flora.A number of pathogenic viruses were diagnosed from samples in different occasions from mild to severe infections of respiratory tract.Molecular methods were developed for detection of these viruses during last two decades.Nucleic acid amplification methods were introduced for rapid and accurate diagnosis of pathogenic viruses.Multiplex detection systems were employed to identify a panel of pathogenic viruses,which requires specialized kits and instruments in some cases.This review summarizes different types of molecular approaches which were developed with time and applied for the detection of pathogenic viruses associated with infections of the respiratory system. 展开更多
关键词 respiratory system virus Molecular method detection
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中药热熨法治疗儿科疾病的研究进展
2
作者 陈珂竹 张伟 《中国中西医结合儿科学》 2024年第6期485-488,共4页
随着中医药在儿科领域中的发展,中医外治法在儿童疾病的治疗中拥有了越来越重要的地位,而热熨法作为中医传统外治法之一,经过各代医家的传承与发挥及与现代医学的结合与创新,逐渐由日常保健走向临床治疗。文章通过对中药热熨法历史沿革... 随着中医药在儿科领域中的发展,中医外治法在儿童疾病的治疗中拥有了越来越重要的地位,而热熨法作为中医传统外治法之一,经过各代医家的传承与发挥及与现代医学的结合与创新,逐渐由日常保健走向临床治疗。文章通过对中药热熨法历史沿革、作用机制、临床应用等方面的论述,讨论了中药热熨法在儿科中应用的可行性及合理性,并整理了其实际临床应用情况的相关文献,为其在儿科领域进一步发展提供理论支持及临床应用参考。 展开更多
关键词 功能性便秘 脾常不足 脾虚食伤中药热熨法 外治法 儿科疾病 儿童
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呼吸道合胞病毒检测方法比较 被引量:39
3
作者 赵林清 钱渊 +2 位作者 王之樑 朱汝南 邓洁 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期20-24,共5页
为使临床治疗更及时有效 ,以通过不同方法的比较得到更快速、敏感、特异的早期从临床标本中检测呼吸道合胞病毒的方法。对收集的80份疑为病毒性急性下呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本应用不同方法进行了RSV检测 ,包括病毒分离、间接免疫... 为使临床治疗更及时有效 ,以通过不同方法的比较得到更快速、敏感、特异的早期从临床标本中检测呼吸道合胞病毒的方法。对收集的80份疑为病毒性急性下呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本应用不同方法进行了RSV检测 ,包括病毒分离、间接免疫荧光、巢式PCR及核酸杂交。80份标本都进行了病毒分离及巢式PCR ;80份标本沉淀分为两组 ,第1组32份 (32/80份 )进行间接免疫荧光 ;第2组48份 (48/80份 )进行杂交。结果显示 ,80份标本中除外9份在病毒分离过程中出现污染 ,RSV分离组阳性标本22份 (22/71份 ,31.0% ) ;间接免疫荧光组阳性标本14份 (14/32份 ,43.8 % ) ;核酸杂交组阳性标本22份 (22/48 ,45.8 % ) ,其中A亚型13份 ,B亚型9份 ;巢式PCR检测方法中共有66份 (66/80份 ,82.5 % )有目的基因片段扩增 ,A亚型45份 ,B亚型21份。结果表明 ,从临床标本中检测RSV以巢式PCR灵敏度最高 ;杂交法与免疫荧光法阳性率大致相同 ;病毒分离特异性好 ,但由于其他原因导致了分离率低。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 检测方法 巢式PCR 核酸杂交
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一种病毒性哮喘模型制作方法的建立及评价 被引量:16
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作者 童黄锦 范欣生 +2 位作者 许惠琴 王露 崔姣 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期349-352,共4页
目的评价用呼吸道合胞病毒(RSV)诱导鸡卵白蛋白(OVA)致敏,建立小鼠急性病毒性哮喘模型的方法及效果。方法BALB/c小鼠100只,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS/PBS)对照组、PBS/RSV组、RSV/RSV组、OVA/PBS组和OVA/RSV组5组。应用OVA多点注射致敏... 目的评价用呼吸道合胞病毒(RSV)诱导鸡卵白蛋白(OVA)致敏,建立小鼠急性病毒性哮喘模型的方法及效果。方法BALB/c小鼠100只,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS/PBS)对照组、PBS/RSV组、RSV/RSV组、OVA/PBS组和OVA/RSV组5组。应用OVA多点注射致敏、OVA气道雾化吸入结合RSV滴鼻激发复制急性病毒性哮喘模型。观察小鼠哮喘急性发作症状;动物体描箱法测定乙酰胆碱(Ach)激发条件下气道反应性(以肺阻力RL表示);支气管肺泡灌洗液(BALF)作细胞分类计数;HE染色观察肺组织病理变化。结果①以45、135、405μg/mL Ach激发时,与其他各组比较,OVA/RSV组RL均显著升高(P均<0.01);②BALF中炎性细胞分类计数,与其他各组比较,OVA/RSV组的细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞均显著升高(P均<0.01);③OVA/RSV组的肺组织病变程度重于其他各组(P均<0.01)。结论RSV诱导OVA致敏的方法建立小鼠急性病毒性哮喘模型是成功的。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 支气管哮喘 急性模型 方法及评价
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3种治法对RSV诱导的肺炎小鼠炎性细胞因子的表达及TLR-4/NF-кB信号通路调控研究 被引量:8
5
作者 王雪峰 王思源 +3 位作者 岳志军 南春红 吴振起 平静 《辽宁中医杂志》 CAS 2014年第3期385-387,I0001,共4页
目的:探讨3种治法代表方剂对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导引起肺炎的小鼠血清IL-6、IL-8及肺组织Toll样受体4(TLR4)、细胞核转录因子(NF-кB)的影响,揭示其治疗机制。方法:将Wister小鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组、银翘散组、玉屏... 目的:探讨3种治法代表方剂对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导引起肺炎的小鼠血清IL-6、IL-8及肺组织Toll样受体4(TLR4)、细胞核转录因子(NF-кB)的影响,揭示其治疗机制。方法:将Wister小鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组、银翘散组、玉屏风散组、银屏散组。于感染前3 d,玉屏风散组、银屏散组连续给予玉屏风散(7.5 g·kg·d-1)3 d;除正常组以外,50μL 10 LD50病毒液滴鼻建立呼吸道合胞病毒感染的小鼠RSV肺炎模型。感染2 h后,银翘散组、银屏散组继续给予银翘散治疗(10 g·kg·d-1),连续给药3 d;采用ELISA法检测各组小鼠血清中IL-6、IL-8含量,免疫组化法检测分析肺组织TLR4、NF-кB P65蛋白的表达。结果:与正常组比较,RSV感染诱导小鼠肺组织中TLR4蛋白表达上调,增加NF-кB的活化(P<0.05),使血清中IL-6、IL-8水平升高(P<0.05)。银翘散组、玉屏风散组、双表法组测得IL-6、IL-8含量以及TLR4、NF-κB P65表达相较于模型组显著减弱(P<0.05)。与利巴韦林组比较,双表法组减弱尤为突出(P<0.05)。结论:3种治法对于治疗RSV肺炎均有显著疗效,尤其以双表法疗效更佳。其作用机制可能与抑制炎症因子IL-6、IL-8分泌及阻断TLR4/NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒(RSV) 3种治法 病毒性肺炎 ELISA 免疫组化
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牛呼吸道合胞体病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量:13
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作者 王红 朴范泽 侯喜林 《动物医学进展》 CSCD 2008年第11期1-4,共4页
根据GenBankTM上发表的牛呼吸道合胞体病毒核衣壳蛋白N基因序列,设计合成了一对特异性引物,扩增大小为596bp的目的片段,通过特异性试验、敏感性试验和重复性试验建立了牛呼吸道合胞体病毒的RT-PCR检测方法。所建立的牛呼吸道合胞体病毒... 根据GenBankTM上发表的牛呼吸道合胞体病毒核衣壳蛋白N基因序列,设计合成了一对特异性引物,扩增大小为596bp的目的片段,通过特异性试验、敏感性试验和重复性试验建立了牛呼吸道合胞体病毒的RT-PCR检测方法。所建立的牛呼吸道合胞体病毒的RT-PCR方法与牛腺病毒、牛副流感病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛无浆体均无交叉反应,该方法的敏感性可达1TCID50。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异性强和重复性好等特点,可作为牛呼吸道合胞体病毒检测的一种方法。 展开更多
关键词 牛呼吸道合胞体病毒 反转录一聚合酶链反应 检测
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呼吸道合胞病毒A与B亚型多重荧光PCR检测方法的建立及应用 被引量:3
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作者 刘文宽 周荣 +4 位作者 陈德晖 檀卫平 邱淑燕 许多 李潇 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第10期751-754,共4页
目的建立一种新的呼吸道合胞病毒(RSV)分型检测方法,用于快速检测和监测。方法针对RSV G基因设计引物、探针,并引入人β-actin基因(ACTB)作为内参质控,建立RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法。使用多种常用呼吸道病原体及体外转录RNA产... 目的建立一种新的呼吸道合胞病毒(RSV)分型检测方法,用于快速检测和监测。方法针对RSV G基因设计引物、探针,并引入人β-actin基因(ACTB)作为内参质控,建立RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法。使用多种常用呼吸道病原体及体外转录RNA产物考核其特异性和灵敏度。并对2015年1月至12月广州两家医院的儿童急性呼吸道感染患者进行检测。结果所建立的多重检测方法未见非特异性反应。RSV-A、RSV-B和ACTB分别可检测低至4、8和12 copies/μL的RNA模板,且分别在10~1×10^(10)copies/μL、100~1×10^(10)copies/μL和100~1×10^(10)copies/μL时具备良好的线性关系,线性相关系数r2均大于0.99。儿童急性呼吸道感染患者监测中,RSV-A为期间优势亚型。结论本研究所建立的RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法,具有较好的特异性、灵敏度、可操作性,可用于相关研究。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 呼吸道合胞病毒A亚型 呼吸道合胞病毒B亚型 荧光定量PCR 多重检测
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同时检测美洲型及欧洲型PRRSV的多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:12
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作者 施开创 莫胜兰 +3 位作者 张步娴 屈素洁 赵日浪 钟诚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期810-814,共5页
为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp... 为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp2基因(338 bp/248 bp)、第3对引物扩增欧洲型病毒株ORF5基因(614 bp)。经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分美洲型经典病毒株、HP-PRRSV株以及欧洲型病毒株的多重RT-PCR检测方法。该方法可以特异扩增3种病毒的基因,其重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝;而与猪的其它重要病原均无交叉反应。应用该方法检测176份临床疑似病料样品,结果 PRRSV阳性45份,其中美洲型变异病毒株41份、经典病毒株4份,未检测到欧洲型病毒株。表明本研究建立的多重RT-PCR检测方法可以用于PRRSV的快速鉴别诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型病毒株 欧洲型病毒株 多重RT.PCR 检测方法
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鸭跖草不同提取方法提取物的体外抗病毒实验研究 被引量:6
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作者 袁琦 侯林 +3 位作者 刘相文 陈亚乔 张晓平 田景振 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2017年第7期1755-1758,共4页
目的:为建立鸭跖草抗病毒谱-效相关评价系统,对鸭跖草不同提取方法提取物体外抗病毒活性进行筛选,最后选择鸭跖草75%乙醇冷浸提取物抗呼吸道合包病毒(RSV)活性和鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)活性进行下一步研究。方... 目的:为建立鸭跖草抗病毒谱-效相关评价系统,对鸭跖草不同提取方法提取物体外抗病毒活性进行筛选,最后选择鸭跖草75%乙醇冷浸提取物抗呼吸道合包病毒(RSV)活性和鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)活性进行下一步研究。方法:采用体外抗病毒实验CPE法结合MTT染色法,以半数治疗浓度(EC50)和半数细胞毒性浓度(TC50)并以治疗指数TI值作为评价指标,观察鸭跖草不同提取物对肠道病毒71型(EV71)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。结果:中药材鸭跖草对于肠道病毒71型(EV71)病毒未见明显效果;75%乙醇冷浸的鸭跖草浸取液对呼吸道合胞病毒(RSV)病毒有较好的抗病毒效果,并且测得鸭跖草75%乙醇冷浸浸取液抗呼吸道合胞病毒(RSV)的治疗指数为21.1,阳性对照药治疗指数为29.8;采用蒸馏水提取的鸭跖草提取液对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)病毒有较好的抗病毒效果,且测得鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的治疗指数为19.6,阳性对照药治疗指数为36.7。结论:鸭跖草在抗呼吸道合胞病毒(RSV)和单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)有一定的效果,为进一步进行鸭跖草抗病毒研究和建立鸭跖草谱-效模型提供了科学依据和数据支持。 展开更多
关键词 鸭跖草 不同提取方法 体外抗病毒 单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1) 呼吸道合胞病毒(RSV) 肠道病
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金标法和直接免疫荧光法检测呼吸道合胞病毒的比较 被引量:5
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作者 郭虹 金正江 胡兴文 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第3期51-52,共2页
目的 金标法和直接免疫荧光法检测呼吸道合胞病毒的方法比较.方法同时用金标法和直接免疫荧光法检测350例儿童患者的鼻咽拭子中呼吸道合胞病毒.结果 350例中,直接免疫荧光法检出173例阳性,阳性率为49.4%;金标法检出121例阳性,阳性率为34... 目的 金标法和直接免疫荧光法检测呼吸道合胞病毒的方法比较.方法同时用金标法和直接免疫荧光法检测350例儿童患者的鼻咽拭子中呼吸道合胞病毒.结果 350例中,直接免疫荧光法检出173例阳性,阳性率为49.4%;金标法检出121例阳性,阳性率为34.6%,两种检测方法灵敏度比较差异有统计学非常显著性意义(P<0.01),但两种检测方法的检测结果一致性检验,kappa=0.702,基本一致.结论 直接免疫荧光法比金标法的灵敏度高,两种检测方法的检测结果基本一致. 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 金标法 直接免疫荧光法
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中西医结合治疗合胞病毒肺炎的临床、病理及发病机制研究 被引量:22
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作者 阎田玉 周光延 +8 位作者 龚明敏 宗平平 侯安存 吕启圣 赵慧芬 胡淑德 孙本韬 郑企静 刘玉华 《中国中西医结合急救杂志》 CAS 1999年第11期489-492,共4页
目的:探讨合胞病毒(RSV)肺炎的临床流行病学特征、病理改变及发病机制,总结中西医结合治疗效果。方法:回顾性总结1981~1990 年收治的2 245 例肺炎病例,对其进行病原学检测及辨证分型治疗。结果:①RSV 肺炎738 例(32.9% ),1981~1985 ... 目的:探讨合胞病毒(RSV)肺炎的临床流行病学特征、病理改变及发病机制,总结中西医结合治疗效果。方法:回顾性总结1981~1990 年收治的2 245 例肺炎病例,对其进行病原学检测及辨证分型治疗。结果:①RSV 肺炎738 例(32.9% ),1981~1985 年平均28.7% ,1986~1990 年平均35.8% ,有上升趋势,且每2~3 年有一高峰;其流行病学特征基本可以反映北京地区RSV 肺炎发病情况。②对10 年间资料完整的623 例RSV肺炎进行分析显示其临床特点为年龄小(6 个月以内者占40% ~50% ),发病2~3 日达病程极期,喘憋较重,缺氧较明显。根据临床表现可分为喘息型和非喘息型,随访235 例发现喘息型RSV 肺炎组继发哮喘明显高于非喘息型组。③根据RSV 肺炎临床表现,按中医血瘀辨证分为4 型并制定不同方剂治疗,仅有1 例死亡,其余患儿痊愈和好转。④对RSV 肺炎血瘀证实质进行的研究发现,患儿甲皱微循环和舌质、舌苔有不同程度的异常,甲皱微循环障碍明显者弥散性血管内凝血(DIC)各项指标异常明显,红细胞变形能力随肺炎的恢复而提高至正常。⑤RSV 肺炎时机体的免疫功能下降。⑥RSV 肺炎模型小鼠感染第5 日肺脏在细支气管和肺泡病变达到高峰,第8 日病变减轻,坏死细胞周围大量嗜酸细胞及肥大细胞浸润呈爆炸式脱颗粒,并释放出颗粒分布在周围组? 展开更多
关键词 肺炎 合胞病毒 中西医结合治疗 病理 发病机制
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病猪肺组织中PRRSV抗原免疫组织化学Envision法的原位检测 被引量:3
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作者 杨鸿 钱君娣 +4 位作者 何启盖 马春全 卢玉葵 邓桦 曾振灵 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期237-240,共4页
为探讨肺组织中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原的定位诊断方法,制备了兔抗PRRSV抗体,采用免疫组织化学Envision法对疑似PRRS病猪肺组织中的病毒抗原进行了定位和半定量检测。SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,制得的兔抗PRRS... 为探讨肺组织中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原的定位诊断方法,制备了兔抗PRRSV抗体,采用免疫组织化学Envision法对疑似PRRS病猪肺组织中的病毒抗原进行了定位和半定量检测。SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,制得的兔抗PRRSV IgG纯度较高,具有良好的特异性,可用于原位检测病猪肺组织中PRRSV抗原的分布;Envision法的检测结果显示,PRRSV抗原的阳性表达产物主要出现在肺巨噬细胞胞浆内,其次为肺泡上皮细胞和细支气管黏膜上皮细胞;通过对5份经RT-PCR检测确认的PRRS病猪肺组织进行检测,均有较高的阳性细胞表达,平均阳性细胞率为46.5%。证明Envi-sion法具有高敏感、低背景、快速简便的特点,可用于肺组织中PRRSV抗原的快速检测。 展开更多
关键词 ENVISION法 猪生殖与呼吸综合征病毒 检测
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猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究 被引量:5
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作者 杨素 沙才华 +6 位作者 顾海洋 董尚智 廖秀云 徐海聂 薄清如 罗宝正 陈伟生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期136-141,共6页
应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,... 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,该检测方法不需要复杂仪器,仅用一台普通恒温水浴锅,在等温条件(63℃)保温1 h,即可完成核酸扩增反应,加入核酸染料SYBR GreenⅠ后,用肉眼即可对试验结果进行准确判定,为田间和基层部门检测猪繁殖与呼吸综合征病毒提供了一种廉价、简便、快速、敏感、特异的新方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 RT-LAMP 检测方法 研究
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在树突状细胞中筛选与呼吸道合胞病毒诱发哮喘相关的长链非编码RNAs 被引量:5
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作者 孙淑宁 乔建瓯 韩肇庆 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第21期3229-3234,共6页
目的使用人类全转录组芯片检测呼吸道合胞病毒(RSV)诱发哮喘中的树突状细胞(DCs),以筛选差异表达的长链非编码RNAs(lncRNAs)。在lncRNAs转录调控层面研究RSV诱发哮喘的机制。方法设立HDC-BEAS+RSV组、HDC-RSV组和HDC-CONTROL组3组,其中H... 目的使用人类全转录组芯片检测呼吸道合胞病毒(RSV)诱发哮喘中的树突状细胞(DCs),以筛选差异表达的长链非编码RNAs(lncRNAs)。在lncRNAs转录调控层面研究RSV诱发哮喘的机制。方法设立HDC-BEAS+RSV组、HDC-RSV组和HDC-CONTROL组3组,其中HDC-BEAS+RSV组是将RSV感染的人支气管上皮细胞BEAS-2B和未成熟DCs通过Transwell共培养,HDC-RSV组是将RSV感染未成熟DCs,HDCCONTROL组是将RSV对照液感染未成熟DCs。使用affymatrix的HTA2.0芯片检测3组DCs中基因和lncRNAs的表达差异,并对其进行聚类分析、GO分析和Pathway分析。结果筛选出有差异表达的25个基因和29个lncRNAs,其中20个基因表达上调,5个基因表达下调,27个lncRNAs表达上调,2个lncRNAs表达下调。上调的基因主要涉及促炎免疫反应,例如信号转导、趋化因子信号传导途径、细胞因子受体相互作用等。结论我们筛选出了RSV诱发哮喘中差异表达的lncRNAs,为进一步在lncRNA转录调控层面研究RSV诱发哮喘的机制奠定基础。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 哮喘 树突状细胞 长链非编码RNA
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半巢式RT-PCR法检测呼吸道合胞病毒 被引量:2
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作者 茅海燕 卢亦愚 +4 位作者 汤宏峰 严菊英 李婵 谢荣辉 冯燕 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1448-1450,共3页
目的 建立快速、敏感、特异的人呼吸道合胞病毒 (Respiratorysyncytialvirus ,RSV)检测方法。 方法 根据RSVF基因的保守序列设计 3条引物 ,建立半巢式RT -PCR(semi-nestedRT -PCR)检测方法。用该方法检测12 5例患急性下呼吸道感染的... 目的 建立快速、敏感、特异的人呼吸道合胞病毒 (Respiratorysyncytialvirus ,RSV)检测方法。 方法 根据RSVF基因的保守序列设计 3条引物 ,建立半巢式RT -PCR(semi-nestedRT -PCR)检测方法。用该方法检测12 5例患急性下呼吸道感染的婴幼儿的鼻咽吸引物 (nasopharyngealaspirates,NPA)标本 ,同时对标本进行病毒分离和直接免疫荧光法检测。结果 该半巢式RT -PCR灵敏度为 0 .1TCID50 ,用该方法在 12 5例标本中共检出RSV阳性标本 6 3例 ,阳性率 5 0 .4 %。结论 建立快速、敏感、特异的RSV半巢式RT -PCR检测方法 。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 半巢式RT-PCR 核酸检测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒一步多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:2
16
作者 吴锦艳 田宏 +6 位作者 尚佑军 陈妍 魏衍全 侯相民 赵娜 何建辉 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1485-1490,共6页
本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一步多重RT-PCR检测方法。通过多序列比对以及反应条件的优化,从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490bp的引物,并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒... 本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一步多重RT-PCR检测方法。通过多序列比对以及反应条件的优化,从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490bp的引物,并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒和组织毒、田间样品及临床症状相似的疾病猪瘟和猪伪狂犬病毒做了检测;并对田间及实验室样品进行符合率试验,对阳性样品进行重复性试验。与常规RT-PCR法进行比较,证明该方法比常规RT-PCR法敏感性提高了10倍;而且利用该方法可使检测时间大大缩短;特异性试验证实该方法无交叉反应;阳性和阴性样本的符合率均为100%;3次阳性样品重复性检测结果完全相同;稳定性试验显示该试剂盒至少可保存1年以上。本研究所建立的PRRSV一步多重RT-PCR检测方法的敏感性高、特异性强、操作简便、省时、结果重复性好,不仅适用于临床病例尤其低微含量样品的诊断,而且在筛查隐形带毒动物及兽医检疫方面具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 一步多重RT-PCR 检测方法
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清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1 mRNA基因表达的影响 被引量:2
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作者 李琳 袁斌 +3 位作者 于希忠 徐建亚 赵长江 吴琴琴 《中国中医急症》 2010年第10期1724-1726,共3页
目的探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的影响。方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定... 目的探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的影响。方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法测定各组HELF TGF-β1表达变化。结果病毒对照组较正常细胞组TGF-β1下降至1/3,清肺口服液含药血清组可显著升高TGF-β1水平至RSV感染细胞的2倍。利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对TGF-β1表达有一定的影响。结论 RSV感染可使HELF细胞TGF-β1mRNA表达水平显著下降;清肺口服液可调节TGF-β1 mRNA表达,减缓RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一。 展开更多
关键词 清肺口服液 呼吸道合胞病毒 转化生长因子 β1 实时荧光定量PCR
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5种呼吸道病毒Array-ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 李裕昌 康晓平 +6 位作者 张雨 吴晓燕 张雪松 冉鑫 霍耐凡 贾佳 杨银辉 《生物技术通讯》 CAS 2015年第3期403-407,共5页
目的:建立能够同时检测常见呼吸道病毒的Array-ELISA方法。方法:未经标记的单克隆抗体作为捕获抗体在96孔板的微孔中点制成阵列,生物素标记的单克隆抗体作为检测抗体,与待检病毒反应后,利用电化学发光法放大反应信号,通过CCD传感器读取... 目的:建立能够同时检测常见呼吸道病毒的Array-ELISA方法。方法:未经标记的单克隆抗体作为捕获抗体在96孔板的微孔中点制成阵列,生物素标记的单克隆抗体作为检测抗体,与待检病毒反应后,利用电化学发光法放大反应信号,通过CCD传感器读取反应结果。结果:经过优化后,使用的抗体组合能够检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒和副流感病毒3型,其最低检测限分别为3.1×102、1.3×103、5×103、2.5×103和1.5×104TCID50/m L,各病毒之间未见交叉反应。结论:建立的Array-ELISA方法可用于检测以上5种病毒,具有较高的灵敏性和较强的特异性。 展开更多
关键词 Array-ELISA 甲型流感病毒 乙型流感病毒 呼吸道合胞病毒 腺病毒 副流感病毒3型 检测
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采用半巢式RT-PCR检测兰州地区住院肺炎患儿下呼吸道分泌物中的RSV 被引量:1
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作者 傅生芳 包红 +3 位作者 安红 张蓉芳 周旭 金玉 《微生物学免疫学进展》 2009年第2期33-35,共3页
从人呼吸道合胞病毒(hRSV)基因序列中高度保守的N基因处,设计了特异性半巢式引物,以反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法随机检测了46份兰州地区2007年春季住院肺炎患儿下呼吸道分泌物样本。结果46份样本中有19份扩增出了预期目的片段,... 从人呼吸道合胞病毒(hRSV)基因序列中高度保守的N基因处,设计了特异性半巢式引物,以反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法随机检测了46份兰州地区2007年春季住院肺炎患儿下呼吸道分泌物样本。结果46份样本中有19份扩增出了预期目的片段,对所有扩增产物进行基因序列测定。结果表明19份样本均有RSV感染,其检出率为41%,而且序列分析结果显示,所有RSV阳性样本均与RSVA亚型的同源性高于B亚型。 展开更多
关键词 半巢式RT-PCR 人呼吸道合胞病毒 检测
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同时检测PRRSV美洲型经典株、变异株和TJM-F92疫苗株的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立及应用 被引量:2
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作者 施开创 官家明 +4 位作者 胡杰 李凤梅 莫胜兰 陈汉忠 李军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期453-457,共5页
为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV美洲型经典株、变异株及弱毒活疫苗TJM-F92株的基因序列差异,设计了2对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分PRRSV美洲型经... 为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV美洲型经典株、变异株及弱毒活疫苗TJM-F92株的基因序列差异,设计了2对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分PRRSV美洲型经典株、变异株及TJM-F92疫苗株的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,与猪其他常见病毒无交叉反应;经典株、变异株、TJM-F92疫苗株重组质粒标准品的检出下限均为2.68拷贝/μL,比常规PCR敏感100倍;组内及组间重复试验的变异系数均小于1.5%。此外,该方法对324份疑似PPRSV感染的临床样品进行检测,结果显示PRRSV阳性114份,其中美洲型变异株105份、经典株6份、TJM-F92疫苗株3份,变异株和经典株混合感染4份。本研究建立的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可以为PRRSV美洲型野毒株、疫苗株的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型病毒株 TJM—F92疫苗株 多重TaqMan荧光定量RT—PCR 检测方法
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