组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对多发性骨髓瘤细胞MM1R的抑制作用

本研究探讨新一代组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589单药或者联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米,对多发性骨髓瘤(MM)细胞的抗瘤效应。采用MTT法检测LBH589(10、20、50 nmol/L)及50 nmol/L分别联合硼替佐米(10、20 nmol/L)作用于人多发性骨髓瘤MM1R细胞24,48 h后的细胞增殖抑制作用;采用流式细胞术检测LBH589对MM1R细胞周期和细胞凋亡的影响;采用Western blot分析LBH589(10、20、50 nmol/L)作用MM1R细胞24 h后组蛋白H4乙酰化的程度。结果表明,LBH589单药及与硼替佐米联合均能够抑制MM1R细胞增殖,并与药物浓度和作用时间呈正相关。MM1R细胞经药物作用48 h后,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期及S期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期,同时可见MM1R细胞的凋亡率增加,作用呈浓度依赖性,且LBH589与硼替佐米联合作用均较单药作用更加明显(均P<0.001);Western blot分析显示,不同浓度LBH589作用MM1R细胞24 h后组蛋白H4乙酰化的程度上调,呈浓度依赖性。结论:LBH589能够抑制MM1R细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,且与硼替佐米联合对骨髓瘤细胞有协同作用。

苦参碱诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡及其对细胞黏附分子表达的影响

为了探讨苦参碱诱导多发性骨髓瘤(MM)RPMI8226细胞凋亡及其对细胞黏附分子表达的影响,将苦参碱与RPMI8226细胞共培育,采用CCK-8法观察细胞生长,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,PI单染色法检测细胞周期,双染色流式细胞仪检测细胞膜表面CD44、CD44v6、CD54和CD106的表达。结果表明,苦参碱对RPMI8226细胞具有明显的生长抑制作用,呈量效和时效关系;苦参碱能诱导RPMI8226细胞凋亡,其发生率随着药物浓度增加而增加;细胞周期分析显示G0/G1期细胞相对增多,S期相对减少,但G2/M期细胞数无明显改变;苦参碱作用于RPMI8226细胞48小时导致CD44和CD54表达减少,但CD44v6和CD106表达无明显改变。结论:苦参碱通过诱导凋亡和细胞周期阻滞抑制RPMI8226细胞的生长,同时降低CD44、CD54等细胞黏附分子表达。

白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞的体外抗癌作用

目的研究白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞体外抗癌作用,探讨其抗癌作用的分子机制。方法用MTT法检测白藜芦醇对骨髓瘤细胞系RPMI-8226和KM3增殖的影响;Annexin-V/PI双标流式细胞术检测白藜芦醇对RPMI-8226细胞凋亡的影响;PI单标流式细胞术测定白藜芦醇对RPMI-8226、KM3细胞DNA分布的影响;Western-blotting方法检测白藜芦醇对RPMI-8226细胞Bcl-2、Bax、XIAP、c-IAP-1、c-IAP-2蛋白表达的影响。结果白藜芦醇对RPMI-8226和KM3细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑制增殖作用呈时效和量效关系。25～100μmol/L白藜芦醇作用24h可诱导RPMI-8226细胞凋亡,100μmol/L作用24h时KM3细胞凋亡率达(26.5±2.7)%。白藜芦醇处理组RPMI-8226及KM3细胞周期均发生变化,细胞周期被阻滞于S期和G0/G1期。白藜芦醇以时间依赖方式下调抗凋亡蛋白Bcl-2、XIAP、c-IAP-1、c-IAP-2的表达,并可上调促凋亡蛋白Bax的表达,但白藜芦醇对各蛋白作用的动力学不同。结论白藜芦醇可通过调控细胞周期进程、诱导细胞凋亡而有效抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡与调节Bcl-2和IAP家族蛋白的表达有关。

β-榄香烯抑制人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖的实验研究

目的研究β-榄香烯对人骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法用噻唑蓝(MTT)法检测β-榄香烯对骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖的影响;Annexin V/PI双标流式术检测β-榄香烯对骨髓瘤RPMI-8226细胞周期、细胞凋亡的影响;Hoechst33342/PI双染荧光显微镜观察β-榄香烯处理后骨髓瘤RPMI-8226细胞形态学变化。结果β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有显著抑制作用,呈浓度和时间依赖性。β-榄香烯处理后,与对照组相比G0/G1细胞比例显著升高,而S、G2/M细胞比例降低。β-榄香烯作用48 h可诱导骨髓瘤细胞凋亡,凋亡率随药物浓度而递增。结论β-榄香烯可有效抑制人骨髓瘤细胞增殖;其抑制作用与细胞周期阻滞和细胞凋亡激活有关。

龙葵总提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株的作用

目的:研究龙葵总提取物对U266细胞的细胞毒作用及其机制。方法:U266细胞株与龙葵总提取物共同培养,用CCK 8试剂检测细胞毒作用;用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡。结果:龙葵总提取物对U266细胞有细胞毒作用,半数抑制(质量)浓度约为117mg/L;龙葵总提取物影响U266细胞周期,G0 /G1 期细胞减少,S期、G2 /M期细胞增加,凋亡细胞增加。用AnnexinV/PI染色及TFAR19染色流式细胞仪检测,均显示细胞凋亡与龙葵总提取物有剂量依赖关系。结论:龙葵总提取物对U266细胞有体外细胞毒作用,其作用机制部分是诱导细胞凋亡。

β-榄香烯抑制人骨髓瘤细胞增殖

目的:研究从温郁金中提取的β-榄香烯对人骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖;AnnexinV/PI双标流式术检测细胞周期、细胞凋亡;Hoechst33342/PI双染荧光显微镜观察β-榄香烯处理后骨髓瘤RPMI-8226细胞形态学变化。结果:β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有显著抑制作用,呈浓度和时间依赖性。与对照组相比G0/G1细胞比例显著升高,而S、G2/M细胞比例降低。β-榄香烯作用48h可诱导骨髓瘤细胞凋亡,凋亡率随药物浓度而递增。结论:β-榄香烯可有效抑制人骨髓瘤细胞增殖;其抑制作用与细胞周期阻滞和细胞凋亡激活有关。

冬凌草甲素对多发性骨髓瘤细胞细胞周期和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨冬凌草甲素(oridonin,Ori)对人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响及其涉及机制。方法利用MTT比色法检测Ori对细胞增殖活性的影响;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot技术检测p65核蛋白水平。结果 Ori能明显抑制RPMI 8226细胞增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性;能同时引起细胞G2/M细胞周期阻滞、细胞凋亡和p65核蛋白水平下降;吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)抑制核因子κB(NF-κB)活性后进一步促进了Ori所致的细胞G2/M细胞周期阻滞和凋亡。结论 Ori能明显抑制RPMI 8226细胞增殖,引起G2/M细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡,该效应与NF-κB活性抑制相关。

MEK抑制剂AZD8330对多发性骨髓瘤抗肿瘤作用的初步研究

本研究探讨MEK抑制剂AZD8330对多发性骨髓瘤细胞IM9及NCI-H929细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。使用不同浓度AZD8330处理NCI-H929及IM9细胞48 h,用CCK-8检测细胞活力,并计算出48 h的IC50;分别用5、10及100 nmol/L的AZD8330处理上述两种细胞,然后用PI标记流式细胞术分析细胞周期的变化;Western blot方法检测细胞周期相关蛋白cyclin D及cyclin E;分别用10、100、1000及2000 nmol/L的AZD8330处理骨髓瘤细胞,AnnexinV/7-AAD双标记法分析细胞凋亡,并应用Western blot方法检测凋亡相关蛋白caspase-3。结果表明,AZD8330可显著抑制NCI-H929及IM9的细胞活力,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性,IM9细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)为19.88±2.7 nmol/L,NCI-H929细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)为29.3±2.03 nmol/L。细胞周期结果显示,两种骨髓瘤细胞均发生G1期阻滞;AZD8330处理后cyclin D水平显著增高,但是cyclin E水平降低,促使细胞发生G1期阻滞。AnnexinV/7-AAD结果显示,随着AZD8330浓度增加,细胞凋亡数量也相应增多,并且活化的caspase-3蛋白水平增高。结论:MEK抑制剂AZD8330可有效抑制骨髓瘤细胞NCI-H929和IM9的增殖,使细胞周期阻滞于G1期,并促进细胞发生凋亡。

力达霉素诱导人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡和周期阻滞

目的研究力达霉素(LDM)的抗骨髓瘤作用,并探讨抗骨髓瘤的作用机制。方法处于对数增殖期人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞随机分为空白对照组及0.1、0.5和1 nmol/L LDM组,用MTS法和流式细胞术检测细胞增殖率、细胞周期分布和凋亡情况,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白和周期相关蛋白的表达量。结果细胞培养48 h后,不同浓度LDM组细胞增殖数显著低于空白对照组数(P<0.05),LDM组S期和G2/M期的细胞数显著高于对照组数(P<0.05),细胞凋亡率显著高于空白对照组数(P<0.05),LDM的增殖抑制作用和凋亡诱导作用呈剂量依赖性。不同浓度LDM组细胞caspase-3、caspase-7、caspase-9和poly ADP-ribose polymerase(PARP)的蛋白被切割明显高于对照组(P<0.05),P21和P27蛋白的表达量明显高于对照组数(P<0.05)。结论 LDM能诱导人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞凋亡并诱导S期和G2/M期阻滞,其诱导凋亡和周期阻滞的机制有待于进一步深入研究。

MCUR1在多发性骨髓瘤中的作用

目的探讨线粒体钙单向转运体调节分子1(MCUR1)在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达变化,观察其对MM细胞周期、凋亡的作用,初步分析其内在分子机制。方法设瞬时转染MCUR1干涉片段1和2的人MM细胞系RPMI 8226细胞作为实验组(命名为si MCUR1-1和si MCUR1-2细胞),阴性干涉片段转染的RPMI 8226细胞(命名为si Ctrl细胞)作为对照组;实时定量PCR测定MCUR1在MM患者及正常对照者骨髓单个核细胞中的表达水平;实时定量PCR和Western blot检测MCUR1沉默效果;用CCK-8法和流式细胞计量术分别测定沉默MCUR1后细胞增殖、细胞周期和凋亡,Western blot检测MCUR1沉默后p53及其下游分子表达变化。结果与对照者相比,MCUR1在MM患者中的表达显著升高(P<0. 05); MM细胞系RPMI 8226中干扰MCUR1后,与对照组相比,细胞增殖显著减慢(P<0. 05),G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,细胞凋亡比例增加;与对照组相比,干扰MCUR1组细胞内p53、BAX蛋白表达增加,BCL2、cyclin D1和cyclin E蛋白表达减少。结论 MCUR1在MM患者中表达上调,MCUR1通过抑制p53通路进而促进MM细胞增殖。

新型STAT3抑制剂齐福斯尼对多发性骨髓瘤细胞凋亡及细胞周期的影响

目的探讨新型信号转导与转录激活因子-3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)抑制剂齐福斯尼(kifocitanib,KIF)对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞系OPM2和U266凋亡及细胞周期的影响。方法采用台盼蓝染色法,检测KIF对OPM2、U266细胞的存活率及增殖的影响;Annexin V/PI双染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测细胞周期。结果 KIF对OPM2、U266细胞具有明显的生长抑制作用,并且呈现剂量依赖性和时间依赖性抑制作用,KIF使OPM2、U266细胞停滞于G0/G1期,具有诱导细胞凋亡的作用。结论 KIF阻滞MM细胞增殖,诱导细胞凋亡,具有抗MM的活性。

白花蛇舌草提取物抗多发性骨髓瘤细胞机制研究

目的探讨白花蛇舌草提取物(HDE)抗多发性骨髓瘤细胞的机制。方法取对数生长期RPMI 8226及NCI-H929细胞,分别按终浓度1.25、2.50、5.00、7.50、10.00、12.50μM加入As2O3,按终浓度12.5、25.0、50.0、75.0、100.0、125.0nM加入硼替佐米,按终浓度25、50、75、100、125、150μg/mL加入HDE。MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果不同浓度As2O3、硼替佐米及HDE对RPMI 8226及NCI-H929细胞增殖的抑制作用具有浓度及时间依赖性;HDE浓度为50~75μg/mL对细胞抑制作用最为明显。100nM硼替佐米作用于RPMI 8226及NCI-H92924h,分别使G2/M期所占比例升至70.10%、73.99%,150μg/mL HDE作用于RPMI 8226及NCI-H92948h,分别使G0/G1期所占比例升至45.15%、36.18%,而10μM As2O3作用于NCI-H92924h,使G0/G1期所占比例升至40.59%;3种药物均可诱导细胞凋亡,150μg/mL HDE作用于RPMI 8226及NCI-H92948h,凋亡率为(14.44±0.50)%、(24.90±0.76)%。结论HDE可能通过诱导RPMI 8226及NCI-H929细胞凋亡及阻滞细胞周期来抑制骨髓瘤细胞增殖。

白藜芦醇通过上调SIRT1/RUNX2表达促进多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞成骨分化

骨髓瘤骨病(myeloma bone disease,MBD)是多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)最主要的并发症之一。骨髓瘤骨病骨损伤发生的病因是肿瘤细胞浸润以及骨髓微环境改变等因素导致的破骨细胞活化和成骨细胞抑制。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)是成骨细胞的主要来源,促进BMSC的成骨分化可能是治疗骨髓瘤骨病的可行方法之一。白藜芦醇(resveratrol,RES)是一种天然多酚类植物激素。已有研究发现,白藜芦醇具有调节骨质代谢的功能。但白藜芦醇对多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞(MM-BMSC)成骨分化的作用和机制尚不明确。本研究成功分离、培养并鉴定了10例MM-BMSC。通过检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和骨钙素(osteocalcin,OCN)水平,以及茜素红染色发现,白藜芦醇具有促进多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用。生物信息学分析提示,沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)可能是白藜芦醇调控多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞成骨分化的靶基因。体外细胞研究发现,白藜芦醇可增加SIRT1表达(P<0.001),且用siRNA干扰SIRT1表达后多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性下降(P<0.05),骨钙素表达减少(P<0.01),茜素红染色矿化结节减少。多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞经白藜芦醇处理后,Runt相关转录因子2(runt related transcription factor 2,RUNX2)mRNA(P<0.001)和蛋白质(P<0.01)表达水平上升。应用siRNA干扰多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞SIRT1表达后,细胞RUNX2 mRNA(P<0.01)和蛋白质(P<0.05)表达均下降。综上所述,本研究发现,白藜芦醇通过上调SIRT1/RUNX2表达促进多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞成骨分化。白藜芦醇有可能成为骨髓瘤骨病治疗的潜在有效药物。

白桦脂酸对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226凋亡的诱导

为了探讨白桦脂酸对多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226的诱导凋亡作用,用MTT、Annexin-V/PI双标记流式细胞术、PI单标记流式细胞术和Hoechst33258染色分别检测白桦脂酸对RPMI-8226增殖抑制、凋亡诱导、细胞周期的作用和形态学变化。用RT-PCR技术检测加药后RPMI-8226凋亡相关基因bcl-xl和caspase3的表达的变化。结果表明:白桦脂酸对RPMI-8226作用24和48小时的IC50值分别为10.156±0.659和5.434±0.212μg/ml,在一定浓度范围内,白桦脂酸对其增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性。RPMI-8226细胞的凋亡率随药物浓度的增加而增加。细胞周期测定显示,随药物浓度的增加G0/G1期的细胞比例增高,处于S期的细胞比例减低,药物对G2/M期细胞影响不明显。Hoechst33258染色在荧光显微镜下可见药物处理组和对照组之间细胞形态的显著变化。RT-PCR测定示,随加药浓度的增加,bcl-xl基因的表达呈降低趋势,而caspase3基因的表达呈增高趋势。结论:在一定的浓度范围内,白桦脂酸可诱导RPMI-8226发生凋亡且呈时间剂量依赖性,该过程可能与其上调caspase3和下调bcl-xl基因的表达有关。白桦脂酸还可以影响RPMI-8226细胞系的G1/S期,使细胞阻滞在G0/G1期。

槲皮素对多发性骨髓瘤的抗肿瘤作用及其相关机制

目的:研究槲皮素对多发性骨髓瘤细胞NCI-H929增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:常规培养NCI-H929细胞,取对数生长期的细胞进行实验。用不同浓度槲皮素(50、100、200μmol/L)处理NCI-H929细胞24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况;用槲皮素100、200μmol/L处理NCI-H929细胞24 h后,使用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡水平,采用PI标记流式细胞术分析细胞周期的变化;采用Western blot法分析凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9、PARP、BCL-2和细胞周期相关蛋白P53、P21、P27、CDK4蛋白的表达水平,并检测ERK和AKT的活化情况。结果:不同浓度的槲皮素可显著抑制NCI-H929细胞的增殖,抑制效应随时间的延长和剂量的增大而增强。流式细胞术分析结果显示,槲皮素可显著诱导NCI-H929细胞凋亡,并诱导细胞发生G2/M期阻滞。Western blot实验结果显示,槲皮素能够活化caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP,进而抑制BCL-2的表达,促进P53、P21、P27蛋白的表达和抑制CDK4蛋白的表达,并降低ERK、AKT磷酸化水平。结论:槲皮素可有效发挥对骨髓瘤细胞NCI-H929的抗肿瘤作用,该作用可能是通过诱导细胞凋亡、促进细胞周期阻滞和下调ERK/AKT通路实现的。

MicroRNA-15a抑制骨髓瘤细胞生长及其机制研究

目的:研究microRNA-15a(miR-15a)在多发性骨髓瘤(MM)细胞生长中的作用及可能机制。方法:慢病毒颗粒感染MM细胞株U266和RPMI8226,流式细胞术(FCM)分选获得稳定转染MM细胞株。CCK-8法检测miR-15a高表达前后MM细胞的增殖情况;AO/EB染色、Hoechst 33258荧光染色法及FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞凋亡的情况;FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞周期的情况;real-time PCR方法检测miR-15a高表达前后MM细胞miR-15a、BMI-1及BCL-2 mRNA的表达;Western blot方法检测miR-15a高表达前后MM细胞BMI-1蛋白表达。结果:获得高表达miR-15a的MM稳定转染细胞株。CCK-8结果显示miR-15a高表达可抑制M M细胞(U266和RPM I8226)的增殖;AO/EB、Hoechst 33258染色和FCM结果显示,miR-15a高表达可显著诱导MM细胞(U266和RPM I8226)的凋亡,U266和RPM I8226细胞高表达组与对照组细胞凋亡率分别为:90.52%vs37.08%,59.40%vs 44.17%;同时,miR-15a高表达可诱导MM细胞(U266和RPM I8226)G1期阻滞,G1期细胞分别为(41.50±0.64)%、(45.31±0.77)%。real-time PCR结果显示,在高表达miR-15a抑制骨髓瘤细胞生长的过程中BCL-2 mRNA表达显著降低,BMI-1 mRNA表达则没有改变,但是Western blot结果却显示BMI-1蛋白表达出现显著降低。结论:miR-15a高表达通过诱导骨髓瘤细胞周期阻滞和凋亡抑制骨髓瘤细胞生长,其机制涉及miR-15a在转录后水平对BMI-1、BCL-2基因的负调控。

补肾养骨汤诱导多发性骨髓瘤细胞株KM3的凋亡及机制探讨

目的探讨补肾养骨汤对人多发性骨髓瘤细胞株KM3细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法取对数生长期KM3细胞,分别加入5%、10%、20%的补肾养骨汤含药血清培养,培养12、24、48和72 h后,采用Cell CountingKit-8(CCK-8)法检测补肾养骨汤对KM3细胞增殖的影响;KM3细胞经过不同浓度含药血清培养72 h后,采用流式细胞术检测补肾养骨汤对KM3细胞周期和凋亡作用;RT-q PCR和Western blot检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)和核转录因子(NF)-κB的表达水平。结果补肾养骨汤抑制KM3细胞株的增殖,诱导KM3细胞株呈剂量依赖性凋亡,使KM3细胞周期停滞在G0/G1期,导致KM3细胞株Bcl-2、NF-κB表达下调,Bax表达上调。结论补肾养骨汤抑制KM3细胞的增殖,影响细胞周期,诱导其凋亡,此作用机制可能与Bcl-2、Bax和NF-κB表达异常有关。

雷帕霉素联合2-DG对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

背景多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是血液系统第二常见的恶性肿瘤,新药时代使骨髓瘤患者的生存得到极大改善,但仍不可治愈,需要探索新的治疗方法以进一步提高骨髓瘤的治疗效果。目的研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂雷帕霉素(rapamycin,Rapa)联合糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)对体外培养人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞周期和凋亡的影响。方法CCK-8法分析两药单独应用及联用对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖和毒性的影响,并通过CompuSyn软件计算合用指数(combination index,CI);利用流式细胞术检测Rapa和2-DG单药及联合作用下对骨髓瘤细胞周期和凋亡的影响;Western blot检测Rapa和2-DG单药及联合作用下骨髓瘤细胞周期调控分子CyclinD1、凋亡相关指标P53、Bax、Bcl-2的表达。结果CCK-8法显示多种不同浓度组合下Rapa联合2-DG作用48 h有显著的抗骨髓瘤协同作用,其CI值介于0.6~0.8,其中Rapa(50 nmol/L)和2-DG(0.5 mmol/L)合用的CI值为0.642,显示出很好的协同作用;流式细胞术显示联合应用Rapa(50 nmol/L)和2-DG(0.5 mmol/L)较空白对照组和单药组使细胞周期阻滞在G0/G1期、S期的比例下降,凋亡率明显升高(P均<0.05);Western blot结果显示Rapa(50 nmol/L)和2-DG(0.5 mmol/L)联用组促凋亡指标P53、Bax等表达增加,凋亡抑制指标Bcl-2表达下降(P均<0.05)。结论Rapa和2-DG联合应用可显著抑制RPMI8226细胞增殖,并显著增加其细胞凋亡,显示出较好的协同作用,对于进一步探索Rapa和2-DG在多发性骨髓瘤中的应用有一定的启示作用。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他抗小鼠骨髓瘤效应的实验研究

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对小鼠骨髓瘤细胞SP2/0增殖的影响并探讨其作用机制。方法:用不同浓度SAHA处理SP2/0细胞24及48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡的变化;Western blot法检测不同浓度SAHA处理SP2/0细胞48 h后Caspase-3和p53蛋白表达水平变化。分别以尾静脉途径和皮下途径注射SP2/0细胞,建立非侵袭性和侵袭性荷瘤模型。建模后d 3开始,治疗组经腹腔注射SAHA,剂量为60 mg/(kg·d)(每周5次,连续3周),对照组腹腔注射SAHA溶剂。通过外周血涂片观察有无骨髓瘤细胞存在;每2 d观察皮下荷瘤小鼠局部肿瘤体积变化;计算抑瘤率,记录小鼠生存期。结果:不同浓度的SAHA处理SP2/0细胞24或48 h后的结果显示,SAHA对SP2/0细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性关系(r_(24h)=0.959;r_(48h)=0.985)。在SAHA体外作用下,SP2/0细胞周期分布结果显示G2期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低。浓度分别为0.8、1.2、1.6、2.0、2.4μmol/L的SAHA作用48 h后,SP2/0细胞早期凋亡率分别为8.14%±0.50%、21.08%±0.94%、27.30%±0.63%、55.58%±0.65%、72.22%±0.88%。Western blot检测显示,SP2/0细胞Caspase-3、p53蛋白表达水平随SAHA浓度增加而升高(r_(Caspase-3)=0.968;r_(p53)=0.984)。经尾静脉注射SP2/0细胞(1×106)的荷瘤方式,仅诱导出非侵袭性荷瘤小鼠模型;而同样数量的SP2/0细胞皮下注射则诱导出了侵袭性荷瘤小鼠模型。与对照组相比,SAHA治疗后,非侵袭性荷瘤小鼠外周血循环中的骨髓瘤细胞消失,侵袭性荷瘤小鼠瘤体生长速度缓慢,小鼠生存期延长。结论:SAHA显著抑制了小鼠骨髓瘤细胞增殖,其抑制效应与诱导骨髓瘤细胞周期阻滞及凋亡相关联,而其机制与SAHA能够上调Caspase-3和p53蛋白表达水平有关。

脂肪酸合成酶抑制剂抑制人多发性骨髓瘤细胞增殖及诱导其凋亡的研究

目的明确脂肪酸合成酶(FAS)在人多发性骨髓瘤(MM)细胞中的高表达;探讨 FAS 抑制剂抑制 MM 细胞增殖及诱导其凋亡的机制。方法通过 RT-PCR 方法检测 FAS 在 MM 细胞系U266、RPMI8226细胞中的表达;以 MM 细胞系 U266细胞为模型,MTT 法观察 FAS 抑制剂浅蓝菌素(cerulenin)对 U266细胞增殖抑制率;以流式细胞术检测经 cerulenin 处理后 U266细胞 Annexin V 的表达及细胞周期变化。结果 MM 细胞系 U266、RPMI8226细胞均有 FAS mRNA 的高表达,而健康献血员外周血单个核细胞(PBMNC)中不表达 FAS mRNA;cerulenin 对 U266细胞增殖有显著的抑制作用,并呈剂量-效应相关;20μg/ml 的 cerulenin 作用于 U266细胞12h,细胞早期凋亡率为56.9%,24h 细胞早期凋亡率为69.3%,而对照组分别为4.3%和1.8%(P<0.01);细胞周期 DNA 分析发现,20μg/mlcerulenin 作用于 U266细胞12h,S 期细胞从对照组的9.7%上升至20.3%,作用24h,S 期细胞上升为29.8%。结论 FAS 在 MM 细胞中高表达;FAS 抑制剂可抑制 U266细胞的增殖;DNA 合成阻止在 S期,其抑制增殖的作用可能是通过促进 U266细胞早期凋亡;FAS 可能是一个潜在的抗 MM 的靶位。