Genetic Predisposition to Retinoblastoma (Rb)

Determination of 8 cytogenetic indicators in 14 cases of Rb,their 21 parents and 14 normal controls revealed various degrees ofchromosome instability and nondisjunction in the patients and their parents,indicating the presence of genetic neoplastic predisposition to neoplasm inRb patients.Eye Science 1993;9:149-152.

Rb基因诱导视网膜母细胞瘤移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的观察外源性Ｒｂ基因对视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞凋亡的影响。方法建立裸鼠眼玻璃体腔ＲＢ移植瘤模型及构建Ｒｂ基因的逆转录病毒表达载体Ｐｂａｂｅ－Ｒｂ，用脂质体Ｄｏｓｐｅｒ介导法将Ｒｂ基因导入裸鼠ＲＢ移植瘤，采用流式细胞术（ＦＣＭ），光镜、电镜及ＴＵＮＥＬ细胞凋亡原位末端标记法进行ＲＢ细胞凋亡的检测。结果Ｒｂ基因在ＲＢ移植瘤内表达至少持续７天。ＦＣＭ检测发现在Ｒｂ基因转染后第４天，各实验组治疗眼ＲＢ中均可检测到凋亡细胞峰，凋亡细胞百分率高于对照眼；第２０天，各实验组治疗眼细胞凋亡百分率与对照眼比无差异（Ｐ＞０．０５）。透射电镜下可见到典型的早期凋亡细胞及晚期凋亡小体形成。ＴＵＮＥＬ方法可在荧光显微镜下见到发黄绿色荧光的凋亡细胞，光镜下可见到紫红色的被标记的凋亡细胞。结论Ｒｂ基因可诱导ＲＢ移植瘤细胞凋亡，这可能是Ｒｂ基因体内抗癌的又一作用机制。

Rb和P-Rb在乳腺癌组织中的表达及其在癌细胞上皮间质转化中的意义

目的:分析视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)基因和磷酸化Rb(P-Rb)在人乳腺癌组织中的表达及在乳腺癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的意义。方法:选取2009年1月至2009年8月在河北医科大学第四医院进行手术切除的65例乳腺癌患者标本,利用免疫组织化学法检测乳腺癌组织中Rb、P-Rb、上皮细胞标记物CDH1和间质细胞标记物Vimentin的表达状况,分析二者表达与乳腺癌患者临床病理学指标和预后的关系。利用real-time PCR及Western blotting方法检测在TGFβ诱导的EMT过程中Rb及P-Rb的表达变化。结果:乳腺癌组织中,Rb和P-Rb蛋白表达阳性率分别为55.38%和50.77%。P-Rb蛋白表达与乳腺癌患者的肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移状况呈正相关。CDH1和Vimentin蛋白表达阳性率分别为76.92%和43.08%。CDH1蛋白表达与乳腺癌患者的肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移状况呈负相关。Vimentin蛋白表达与乳腺癌患者的肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移状况呈正相关。Rb及P-Rb蛋白表达均与CDH1蛋白表达呈正相关,与Vimentin蛋白表达呈负相关。P-Rb蛋白表达阳性的乳腺癌患者的总五年生存率明显低于P-Rb蛋白表达阴性的患者;CDH1蛋白表达阳性的乳腺癌患者的总五年生存率明显高于CDH1蛋白表达阴性的患者,Vimentin蛋白表达阳性的乳腺癌患者的总五年生存率明显低于Vimentin表达阴性的患者。在TGFβ诱导的HMLE细胞发生EMT的过程中,Rb的表达显著下降,P-Rb的表达显著上升。结论:Rb的磷酸化失活影响了乳腺癌细胞上皮间质转化的过程,与乳腺癌的转移密切相关。

视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb_(44)抑癌基因的表达

目的检测视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞系ＨＸＯＲｂ４４中抑癌基因Ｒｂ的表达状况，为进一步研究ＲＢ的发病机制，利用抑癌基因Ｒｂ进行ＲＢ的基因治疗提供实验依据。方法用ＳＰ免疫组织化学（ＩＨＣ）及流式细胞术（ＦＣＭ）间接免疫荧光法对Ｒｂ基因的表达进行定性、形态学定位及定量检测。结果ＩＨＣ法检测显示：正常视网膜组织中Ｒｂ蛋白呈阳性反应，位于细胞核呈棕黄色；ＨＸＯＲｂ４４中Ｒｂ蛋白表达阴性。ＦＣＭ检测显示：正常人淋巴细胞Ｒｂ蛋白表达量是ＨＸＯＲｂ４４细胞的３．７１倍，ＨＸＯＲｂ４４中Ｒｂ蛋白表达量极低。结论ＲＢ细胞系ＨＸＯＲｂ４４中存在野生型Ｒｂ基因的功能失活，Ｒｂ基因的突变失活与ＲＢ的发生密切相关。

抑癌基因p16及Rb在肺癌细胞中表达的实验研究

目的研究中药组方对小鼠肺癌细胞的抑制作用及其分子机制。方法将小鼠Lewis肺癌细胞复苏后,于小鼠右腋窝皮下传代后构建小鼠Lewis肺癌模型30只,随机分为3组,各10只,雌雄各半。接种后第2d开始灌胃,中药治疗组予中药稀释液(相当于生药量60g/kg),替加氟组予替加氟稀释液(相当于替加氟药量78mg/kg),0.9%氯化钠注射液组予0.9%氯化钠注射液,各组均为0.4mL,每日1次灌注。观察中药组方、替加氟和0.9%氯化钠注射液对各组瘤体大小的影响,并用免疫组化方法检测不同组别间抑癌基因p16和Rb蛋白的表达情况,比较各实验组的变化。结果治疗3周后,中药治疗组和替加氟组小鼠皮下肿瘤平均质量均比0.9%氯化钠注射液组小(P<0.01);中药治疗组、替加氟组抑瘤率均>40%,2组比较差异无统计学意义(P>0.05),说明中药组方具有一定的抑制肿瘤生长的作用。0.9%氯化钠注射液组p16的标记指数(LI)、Rb-LI显著低于中药治疗组和替加氟组(P<0.01,P<0.01)。镜下可见,p16、Rb蛋白阳性细胞在各组中表达不一,0.9%氯化钠注射液组阳性细胞呈棕黄色,细胞形态较完整,数量较少,呈散在分布;中药治疗组和替加氟组阳性细胞呈棕黄色,深浅不一,细胞形态相对不完整。结论中药组方对小鼠Lewis肺癌的细胞生长具有抑制作用,其机制可能与中药激活抑癌基因,影响细胞周期的发生和阻断细胞脱氧核糖核酸(DNA)合成有关。

MCM2和Rb蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨微小染色体维持蛋白2(MCM2)和视网膜母细胞瘤易感基因(Rb)在胃癌组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组化法检测MCM2和Rb蛋白在20例正常胃黏膜、30例非典型增生、80例胃癌组织中的表达,并以标记指数(labellingindex,LI)量化其表达。结果:MCM2和Rb蛋白在正常胃黏膜、非典型增生和胃癌组织中的表达之间均有显著性差异(P<0.05);两者的LI在胃癌组织中表达与临床分期、浆膜浸润、术后复发、肝转移及淋巴结转移密切相关(P<0.05),与肿瘤大小及组织学类型无关(P>0.05)。胃癌组织中MCM2和Rb的LI表达呈显著负相关(r=-0.321,P=0.004)。结论:MCM2表达升高和Rb蛋白表达下降与胃癌的发生及发展密切相关,检测MCM2和Rb有助于判断胃癌恶性程度及预后。

Rb和MCM2蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨视网膜母细胞瘤易感基因(Rb)和微染色体维持蛋白2(MCM2)在前列腺癌发病机制中的作用及其临床意义。方法:应用免疫组化EliVisionTM plus二步法,检测49例前列腺癌(PCa)组织,20例良性前列腺增生(BPH)及10例正常前列腺组织(NP)中pRb蛋白与M CM 2的表达。结果:pRb在PCa,BPH与NP组织中的阳性表达率分别为44.90%,80%,90%,PCa中pRb的水平明显低于BPH(P<0.05)及NP(P<0.05),且与PCa病理分级(P<0.05)和临床分期(P<0.05)呈负相关。M CM 2在PCa,BPH与NP组织中的阳性表达率分别为67.35%,25%和10%,PCa中M CM 2的水平明显高于BPH(P<0.05)及NP(P<0.05),且与PCa病理分级(P<0.05)和临床分期(P<0.05)呈正相关。M CM 2表达与pRb表达呈负相关(rs=-0.596,P<0.01)。结论:Rb基因参与了前列腺癌的发生、发展过程,检测Rb基因和M CM 2有助于判定前列腺癌恶性程度及预后。

视网膜母细胞瘤细胞系SO-Rb_(50)瘤细胞Rb基因突变动态变化研究

目的:研究SO-Rb50细胞系瘤细胞Rb基因突变的动态变化。方法:1.用 Southern blot杂交法分析 SO-Rb50细胞系第327代瘤细胞DNA。2.用PCR-SSCP法对SO-Rb50细胞系第415代及第713代瘤细胞的Rb基因27个外显子和1个启动子逐个筛查。3.将SO-Rb50细胞系的第775代克隆出3个细胞株:MC2、MC3及MC4。用PCR-SSCP-HA法对MC2、MC3及MC4第11代细胞和MC3第138代细胞的Rb基因的27个外显子逐个筛查。结果:SO-Rb50细胞系第327代细胞DNA缺失3.5Kb、2.9Kb及1.0Kb的三条带,证明SO-Rb50细胞系瘤细胞Rb基因缺失。第415代瘤细胞Rb基因第23外显子少一条单链;第713代第25外显子发生新的突变。SO-Rb50细胞系第775代的3个克隆株MC2、MC3及MC4的第11代细胞,只有MC4第24外显子突变;而MC3第138代第24外显子突变,提示MC3经多次传代后第24外显子发生新突变。结论:SO-Rb50细胞系在长期培养传代过程中,瘤细胞的Rb基因突变有动态变化。眼科学报2001;17:111～113。

Plk1和Rb在皮肤鳞状细胞癌中的表达及意义

目的检测保罗样激酶1(Plk1)及视网膜母细胞瘤基因蛋白(Rb)在皮肤鳞状细胞癌(CSCC)及正常皮肤组织中的表达情况,探讨两者在CSCC发生发展中的作用,以期为CSCC早期筛查提供重要线索,同时寻求治疗的新靶点。方法采用免疫组化Elivision法检测20例CSCC和20例正常皮肤组织中Plk1和Rb的表达情况。结果在CSCC中Plk1蛋白的阳性表达显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);Rb蛋白的阳性表达显著低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Plk1和Rb参与了CSCC的发生发展过程。

Cyclin D1、p16及Rb在视网膜母细胞瘤中的表达及其相关性

目的探讨Cyclin D1、p16、Rb在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测Cyclin D1、p16及Rb在46例常规石蜡包埋的视网膜母细胞瘤标本中的表达,并在生物学行为及分化程度不同的视网膜母细胞瘤之间进行比较。结果正常视网膜组织与视网膜母细胞瘤组织中CyclinD1、p16及Rb蛋白表达差异有极显著性意义(P<0.01);视网膜母细胞瘤中,Rb与p16、Cyclin D1表达之间无明显相关性(P>0.05);p16表达率在生物学行为不同的视网膜母细胞瘤之间差异显著,30例视神经未浸润组视网膜母细胞瘤的p16阳性表达率明显高于16例视神经浸润组(P<0.05);Rb及p16蛋白表达阳性率随组织学分级降低而下降,分化组与未分化组视网膜母细胞瘤中Rb及p16蛋白表达率差异有极显著性意义(P<0.01)。结论p16、Rb、Cyclin D1在视网膜母细胞瘤发生发展中起着重要作用。Cyclin D1的过表达与p16和Rb的表达缺失或失活是视网膜母细胞瘤发生的重要分子事件,p16蛋白失表达可能与其视神经浸润能力有关,Rb及p16蛋白失表达则与其分化程度相关。

胃癌组织端粒酶逆转录酶和Rb基因表达及其临床意义

目的 :探讨端粒酶逆转录酶 (humantelomerasereversetranscriptase ,hTERT)、Rb蛋白在胃癌中表达。方法 :应用SP法检测了 5 0例胃癌标本 ,2 5例胃癌前病变组织 ,11例正常胃黏膜组织。结果 :胃癌组hTERT阳性率为 86 0 %。胃癌组Rb表达阳性率为 5 8 0 %。hTERT活性表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈显著正相关 ,P <0 0 5。Rb表达与胃癌淋巴结转移、临床分期呈显著负相关 ,P<0 0 5。hTERT表达与Rb表达呈显著负相关 ,P <0 0 5。结论 :hTERT表达与胃癌的发生高度相关 ,检测hTERT有助于胃癌的早期诊断 ;

RbAp46基因过度表达抑制K562白血病细胞的生长

目的探讨RbAp46基因对白血病细胞的作用机制。方法利用脂质体将全长RbAp46基因的cDNA片段及空载体PCB6+转入K562细胞株,分别进行生长曲线、软琼脂集落培养及细胞周期的检测,比较两者的差异。结果与空载体K562/PCB6+细胞比较,过度表达RbAp46基因的单克隆细胞株生长减慢,生长第4天,两者细胞数分别为(9.00±0.84)×105和(11.96±0.99)×105;集落减少[K562/RbAp46 vs K562/PCB6+为(131.67±15.57)vs(250.33±26.31),P<0.01];细胞周期改变主要表现为S期细胞减少[(48.88±4.35)vs(62.78±4.78),P<0.01)],G0/G1期细胞增多[(29.10±4.14)vs(22.40±2.43),P<0.05)]。结论作为抑癌基因,RbAp46通过抑制DNA合成而抑制K562细胞株的增殖。

单眼散发性视网膜母细胞瘤Rb基因缺失的研究

对12例单眼散发性视网膜母细胞瘤患者进行了Rb基因存在状态的检测,其中3例Rb基因剂量低于正常对照、2例有异常大小DNA片段出现、2例DNA片段部分缺失,并且1例体细胞Rb基因有扩增改变,这种改变为首次报导。

人视网膜母细胞瘤SO-Rb_(50)细胞系单克隆方法探索

目的:为了使培养细胞的遗传性状、生物学特性相似,利于多种实验研究,而对视网膜母细胞瘤SO-Rb_(50)细胞系进行克隆。方法:用多孔塑料板克隆细胞法,对SO-Rb_(50)细胞进行克隆及分离培养。结果:没有菊花团形成的Rb细胞克隆成功,而有菊花团的Rb细胞、连续三次克隆均不能成功。结论:提示分化好的Rb细胞难以克隆成功。眼科学报 1996;12:79—82。

Rb基因扩增与视网膜母细胞瘤发生的关系初步探讨

在对视网膜母细胞瘤病人的Rb 基因存在状态进行检测时,发现一例患者体细胞Rb 基因有明显扩增改变。Rb 基因在视网膜母细胞瘤患者中的扩增改变,为首次报导,是否意味着Rb 基因扩增与肿瘤发生有着某种关联。

大蒜素对人视网膜母细胞瘤Rb细胞中Bcl-2表达影响的研究

目的探讨大蒜素对人视网膜母细胞瘤Rb细胞的抑制作用,及其对Bcl-2表达的影响。方法人视网膜母细胞瘤Rb细胞株,经复苏,孵育,传代分为10个实验组。分别用不同浓度大蒜素(5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、25μg/ml、30μg/ml)、顺铂(3μg/ml)及大蒜素(15μg/ml)和顺铂(3μg/ml)联合处理人视网膜母细胞瘤Rb细胞,在不同时间(24h、48h、72h)观察Rb细胞的形态,并应用免疫细胞化学SP法检测不同处理条件下和各时间点Bcl-2的表达情况。结果人视网膜母细胞瘤Rb细胞在不同浓度大蒜素、顺铂以及大蒜素和顺铂联合作用下,细胞生长增殖受到抑制,与大蒜素空白液、培养液对照组的Rb细胞相比形态学变化明显。不同浓度的大蒜素均可以下调人视网膜母细胞瘤Rb细胞中Bcl-2的表达,大蒜素作用组与对照组两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。大蒜素下调Bcl-2的表达具有时间和剂量依赖性,随着大蒜素作用时间的延长,Bcl-2的表达依次下降。大蒜素(15μg/ml)和顺铂(3μg/ml)联合用药可增强对人视网膜母细胞瘤Rb细胞的生长抑制,与大蒜素(15μg/ml)、顺铂(3μg/ml)单独处理Rb细胞比较,下调Bcl-2的表达作用具有显著性差异(P<0.05)。结论人视网膜母细胞瘤Rb细胞中存在与细胞凋亡有关的Bcl-2蛋白低表达。大蒜素可抑制人视网膜母细胞瘤Rb细胞的生长,且抑制作用随药物作用浓度的增高和作用时间的延长而增强,具有时间和浓度依赖性。采用免疫细胞化学的方法检测人视网膜母细胞瘤Rb细胞中Bcl-2的表达,发现大蒜素作用组Bcl-2的表达较空白和溶剂对照组低,提示大蒜素抑制人视网膜母细胞瘤Rb细胞的生长与Bcl-2介导的细胞凋亡有关,大蒜素和顺铂联合用药作用强于单独用药,可进一步提高药物对肿瘤细胞的生长抑制。

人视网膜母细胞瘤细胞系SO-Rb_(50)克隆株染色体畸变的观察

目的:研究SO-Rb_(50)细胞系三个克隆株MC_2、MC_3、MC_4染色体畸变的差异。方法:对MC_2、MC_3、MC_4的第11代进行G-显带核型分析。结果:三个克隆株细胞的染色体数目和结构均有异常,出现不同类型的染色体畸变。细胞染色体核型分析见假二倍体核型,13号染色体畸变仅见于个别核型且在三个克隆株中畸变情况不同。发现5个标记染色体,其中标记染色体M_1出现频率最高,几乎见于每个细胞,是由1号染色体长臂部分重复构成(t(1;1)qter-p35::q24-ter);另外还有几个异常标记染色体M_2,M_3,M_4和M_5分别见于各个克隆株细胞。标记染色体M_4和M_5为2号染色体的变化,是在该细胞系染色体变化动态研究中首次发现。结论:SO-Rb(50)在体外培养连续传代后仍存在不同的克隆株,结合以往对该细胞系染色体畸变的动态研究,不同代数的瘤细胞染色体结构畸变有差异,进一步证明体外培养连续传代过程中染色体结构畸变呈动态变化。我们认为13号染色体的畸变不是Rb发生的唯一原因;1号染色体的变化与本细胞系的永生关系密切,其与Rb发生、发展的关系值得深入研究;其它染色体变化为继发改变。眼科学报1998;14:220～223。

视网膜母细胞瘤斑马鱼模型及rb1基因研究进展

视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,RB)是一种常见的发生于婴幼儿眼内的原发恶性肿瘤,大量的研究表明,rb1基因的改变是导致RB发生的主要原因。新型模式生物斑马鱼最近几年被开发成为研究RB的动物模型,本文在介绍rb1基因与RB疾病相关研究新进展的同时,综述了已有报道的RB斑马鱼模型建立方法,包括异种移植法、基因突变法和TALEN基因编辑法,并进一步将RB斑马鱼模型与已有报道的小鼠、大鼠、兔、非洲爪蟾RB动物模型进行了对比。

双眼视网膜母细胞瘤Rb基因缺失研究

利用Ｒｂ（Ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ）基因ＣＤＮＡ探针，采用ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ方法，检测５例双眼视网膜母细胞瘤患者及家系中相关人员共１９例外周血白细胞ＤＮＡ。２例患者体细胞出现Ｒｂ基因半合缺失，其中１例Ｒｂ基因半合缺失来自亲代生殖细胞，另１例Ｒｂ基因半合缺失可能发生于配子形成期。这一结果为以分子水平为基因的“二次突变论”提供了依据，并表明此方法在临床上有推广应用价值。文中还讨论了第二恶性肿瘤问题。

转染人Rb反义寡脱氧核苷酸对骨肉瘤细胞生长的影响

目的从分子水平研究Rb基因对骨肉瘤生长的影响,为骨肉瘤的基因治疗提供依据。方法用脂质体将人工合成的Rb反义寡脱氧核苷酸转入有Rb表达的人成骨肉瘤细胞。免疫组化方法检测肿瘤中Rb蛋白表达,MTT法检测细胞转染前后的增殖情况。同时流式细胞术检测细胞周期。结果转染Rb反义寡核苷酸后肿瘤细胞的Rb蛋白表达明显下降,G1期细胞比例减少,细胞增殖增加。结论转染Rb反义寡核苷酸的细胞,Rb蛋白表达明显降低,并引起肿瘤细胞增殖增加。