A Sensitive Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography Method for the Quantitative Determination of Milk Xanthine Oxidase Activity

A new reversed-phase high performance liquid chromatography method was developed to quantitate the activity of xanthine oxidase involved in milk fat globule membrane with xanthine as the substrate and the separation of product (uric acid). The increment of uric acid in the reaction system was used to calculate the total activity of XO. The optimized assay conditions, linearity of detection, recovery of uric acid and chromatogram were developed in text, indicating this method is simple, rapid and efficient. It is an alternative potential method for the determination of the activity of XO in milk.

RP-HPLC法对乳制品中主要牛奶蛋白的分离及定量测定

建立一种基于反相高效液相色谱(RP-HPLC)的分析方法,对牛奶及其乳制品进行定量分析。此方法可一次分离牛奶及乳制品中的7种主要蛋白成分(κ-CN、αs2-CN、αs1-CN、β-CN、α-La、β-LgB、β-LgA),解决了加工后乳制品中变性蛋白定量不准确的问题和κ-CN、αs2-CN以及乳清蛋白中α-La、β-LgB和β-LgA难以分离的困难。各组分分离度均大于1,达到基线分离,回收率达88.9%～97.1%,相对标准偏差为0.8%～5.1%。该方法不需对样品进行离心,在测定清蛋白组分时,也不需提前去除优势蛋白酪蛋白,与传统的检测方法相比,具有准确、灵敏和快速等特点,可用于牛奶及其乳制品的质量控制和定量检测。

RP-HPLC法测定蔬菜、水果及食用菌中9种农药残留的研究

建立了反相高效液相色谱同时测定蔬菜、水果和食用菌中9种农药（吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、甲基硫菌灵、嘧霉胺、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷、阿维菌素）残留的可变波长检测器检测的分析方法。样品经乙腈提取,PSA粉固相分散萃取净化,取净化液氮吹至近干后,以1 mL甲醇定容,采用C18（250 mm×4.6mm,5μm）色谱柱分离,以甲醇-乙腈（体积比3∶1）和水二元流动相梯度洗脱,采用紫外可变波长检测器（270,258,275,254,280,245 nm）检测,流速1.0 mL/min,柱温40℃。结果表明9种农药在0.05～10.0mg/L浓度范围内线性关系良好;相关系数均大于0.999;检出限为0.006～0.07 mg/kg;平均加标回收率为81.0%～115.2%,相对标准偏差（RSD）为0.5%～10.2%。该方法具有快速、灵敏、准确、重现性好以及操作简单等特点,适用于蔬菜、水果以及食用菌中上述9种农药残留的分析。

RP-HPLC法同时测定延胡索药材中延胡索乙素和原阿片碱

建立了反相高效液相色谱(RP HPLC)法同时测定延胡索药材中延胡索乙素与原阿片碱含量的方法,并对不同产地延胡索药材中延胡索乙素与原阿片碱含量进行了考察.结果表明,使用PhenomenexLunaC18色谱柱,甲醇 磷酸盐缓冲溶液(pH=7 68,V∶V=65∶35)流动相,在检测波长281nm下,测定延胡索乙素与原阿片碱的线性范围分别为0 13～4 68μg和0 09～3 24μg,平均回收率分别为101 86%和98 13%,RSD分别为1 42%和1 36%.结果表明,此法简便、准确、快速,可用于药材中延胡索乙素与原阿片碱含量的测定,也可用于含这两种生物碱的药材的质量评价;两种生物碱含量在不同产地及来源延胡索药材中有较大差别.

RP-HPLC法测定东北地区6种红树莓果实中有机酸组成

建立一种反相高效液相色谱法分离和测定6种红树莓果实中草酸、酒石酸、柠檬酸、DL-苹果酸和乳酸5种有机酸的方法。色谱条件为：采用Sino Chrom DS-BP C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.01 mol/L KH2PO4溶液（p H 2.60,97∶3,V/V）,流速0.6 m L/min,柱温30℃,检测波长210 nm。结果表明：在此条件下5种有机酸都被有效地分离,各种有机酸的质量浓度与峰面积在测定范围内呈良好的线性关系,标准曲线相关系数在0.999 3-0.999 9之间;精密度实验相对标准偏差在0.20%-1.53%（n=5）范围内;回收率为98.83%-105.42%,相对标准偏差为0.06%-1.00%。测得6种红树莓果实中有机酸以柠檬酸为主,含量为1 058.41-1 825.45 mg/100 g,草酸、乳酸、DL-苹果酸含量较低,未检测到酒石酸。该方法简单、高效、准确、重复性好,可用于红树莓果实中有机酸的分离测定。

RP-HPLC法测定苹果树枝 叶中根皮苷的含量

建立了一种快速测定苹果树枝、叶中根皮苷含量的RP-HPLC检测方法。色谱条件为Waters Symmetry C18柱(150mm×4·6mm,Φ5μm),流动相为甲醇和pH为2·6的磷酸水溶液(50∶50),等度洗脱,柱温为30℃,287nm紫外检测,流速为0·6mL·min-1,在10min内可实现苹果树枝、叶中根皮苷的快速分离。分析结果表明,根皮苷在0·30～4·50μg范围内呈良好的线性关系,相关系数R2=0·9993,加标回收率98·95%,RSD为1·22%,说明该方法准确可靠。

RP-HPLC法分析测定人参、西洋参、三七中的皂苷类化合物

利用反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)技术对人参、西洋参和三七不同方法提取物中的8种皂苷进行定量分析。采用乙醇回流、温浸法和超声辅助提取法提取3种药材中的有效成分,并结合高效液相色谱技术进行分析。结果表明:不同提取方法比较,超声辅助法所提取的3种药材中皂苷含量较高;3种五加科人参属的药材中,三七提取物中主要皂苷含量较高,人参提取物中的皂苷种类较多。

运用RP-HPLC同时测定火龙果中7种有机酸和Vc含量的方法研究

以紫红肉火龙果为试验材料,对影响有机酸分离的主要因素进行研究,最终建立了运用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时快速测定火龙果果实中草酸、酒石酸、苹果酸、乙酸、乳酸、柠檬酸、琥珀酸7种有机酸及Vc含量的方法。采用色谱条件为:柱温30℃,流速1 m L/min,色谱柱为Kromasil柱(250 mm×4.6 mm),波长215 nm,缓冲液0.05 mol/L H3PO4-Na2HPO4;测定结果显示,供试火龙果含有7种有机酸和Vc,苹果酸是其最主要的有机酸、其次是柠檬酸。此方法可以在10 min内完成1次测定,具有分析速度快、灵敏度高、重复性好等优点,为果实中有机酸及Vc的测定及相关代谢研究提供参考。

RP-HPLC法分析萱草属植物花蕾中游离氨基酸组成

目的:分析萱草属植物8个野生种和25个栽培品种花蕾中游离氨基酸的组成特性。方法:以邻苯二甲醛作为衍生试剂,采用柱前在线衍生反相高效液相色谱法对该属植物花蕾中游离氨基酸组成进行分析,利用主成分分析法对游离氨基酸进行综合评价。结果:供试样品游离氨基酸总量在6.864~21.219 mg/g之间;在萱草属植物花蕾中能检测出14~16种游离氨基酸,且含量存在差异;其中呈味氨基酸以Asp、Gly、Ser和Glu等鲜甜味氨基酸含量最为丰富。通过综合评价指数得出:萱草属植物中食用品种黄花菜、小黄花菜、北黄花菜和‘白花’萱草等的品质最优,‘金娃娃’萱草和‘春节’萱草的品质较优,‘馨口’和‘银光芙蓉’萱草的品质最差。

高粱原花青素的ESI-MS分析及其低聚体的RP-HPLC-MS/MS法分离鉴定

以高粱加工后的副产物——高粱外种皮为原料,采用电子喷雾离子化质谱(electrospray ionization-massspectroscopy,ESI-MS)对ADS-17大孔树脂纯化的高纯度高粱原花青素(sorghum procyanidins,SPC)的组成进行分析,并通过反相高效液相色谱(reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)-质谱(RP-HPLC-MS/MS)联用对Toyopearl HW-40凝胶色谱分离的SPC-5级分进行分离鉴定。结果显示:SPC为低聚体原花青素,包含有儿茶素/表儿茶素单体、原花青素二～六聚体;SPC-5由8种三聚体和1种二聚体组成。

SPE-RP-HPLC法测定桂圆中嘧菌酯残留量

建立固相萃取-反相高效液相色谱法测定桂圆中残留嘧菌酯的方法.色谱柱Shim-pack VP-ODS 150mm×4.6mm,检测波长为225nm,流动相为V(乙腈)∶V(水)=75∶25,流速为0.6mL/min,进样量为20μL.嘧菌酯在0.03～12.4μg/mL(r=0.999 4)的质量浓度范围内与峰面积成良好线性关系,检测限为0.01μg/mL,嘧菌酯的回收率为98.72%～100.20%,相对标准偏差2.26%～3.88%.该方法操作简便快速,可作为桂圆中嘧菌酯含量监测的控制方法.

RP-HPLC-ESI-MS/MS分离鉴定花生红衣原花青素A型和B型二聚体

以花生红衣为原料,制备A型和B型原花青素低聚体。通过体积分数70%乙醇提取并采用AB-8大孔树脂纯化得到高纯度混合物-花生红衣原花青素(PSP),反相高效液相色谱-质谱联用技术(RP-HPLC-MS/MS)对Toyopearl HW-40(S)凝胶色谱分离的两个级分PSP-3、PSP-5进行分离鉴定。结果表明:PSP的纯度大于98.0%,其得率为9.8%。PSP-3由2种B型原花青素二聚体组成,PSP-5由4种A型原花青素二聚体组成。

RP-HPLC法测定菊苣提取物中秦皮乙素的含量

目的建立测定菊苣提取物中秦皮乙素含量的方法。方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定秦皮乙素含量,色谱柱为ODS-A(250mm×4.6mm,5μm),检测波长为349nm。结果秦皮乙素进样量与峰面积线性关系良好,秦皮乙素的r值为0.999 6,平均回收率为91.68%,RSD为4.59%。结论采用RP-HPLC测定菊苣提取物中秦皮乙素的含量,方法简便、易行,精密度、重复性、稳定性好。

RP-HPLC法测定红花中羟基红花黄色素A的含量

建立了红花中的主要功效成分羟基红花黄色素A含量测定的RP-HPLC方法．色谱柱为Betabasic 18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇和0．5％乙酸水溶液，梯度洗脱，流速1mL／min，柱温30℃，检测波长为402nm，线性范围：0．0432～0．864μg，检测限2．1ng（按信噪比S／N=3计），该方法快速、准确。

RP-HPLC法测定酪蛋白水解物中ACE抑制肽的含量

目的：为了建立定量检测酪蛋白水解物中的血管紧张素转换酶（ACE）抑制肽的反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法。方法：酪蛋白先经过胃蛋白酶水解、再经过胰蛋白酶水解,用风味蛋白酶和离子交换树脂对水解物先后进行脱苦和脱盐处理。建立标准品十肽酪氨酸-谷氨酰胺-赖氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸-谷氨酰胺-酪氨酸-亮氨酸-谷氨酰胺-酪氨酸（YQKFPQYLQY）的RP-HPLC检测方法,运用外标法测定酪蛋白水解物中的ACE抑制肽YQKFPQYLQY的含量。结果：标准品十肽YQKFPQYLQY质量浓度在2.5~4.5mg/m L（R2=0.95496）范围内与峰面积呈良好的线性关系。酪蛋白水解物中所含十肽质量分数为4.96694%±0.00131%。结论：本液相检测方法操作简便、快速,适用于ACE抑制肽YQKFPQYLQY的定量检测分析。

灯笼果中噻菌灵的RP-HPLC-PDA残留分析

目的:建立反相高效液相色谱-二极管阵列检测器测定灯笼果中杀菌剂噻菌灵残留的分析法。方法:色谱柱为Shim-pack VP-ODS(150mm×4.6mm),检测波长为299nm,流动相为pH6.8的乙腈-0.02mol/L磷酸缓冲溶液(70:30,V/V),流速为0.6mL/min,进样量20μL。结果:噻菌灵在0.10～90.0μg/mL范围内与峰面积成良好线性关系(r=0.9995),检测限为0.05μg/mL,噻菌灵的回收率为87.9%～102.6%,相对标准偏差为0.98%～2.79%。结论:该方法操作简便快速,可作为灯笼果中噻菌灵含量监测的控制方法。

RP-HPLC法测定HZ08含量及有关物质

目的：建立HZ08（N-腈基-1-[（3，4-二甲氧基苯基）甲基]-3，4-二氢-6，7-二甲氧基-N-辛基-2（1H）-异喹啉碳酰亚胺）的含量测定及有关物质检查方法。方法：采用Lichrospher—C18（250mm×4．6mm，5μm）柱，以甲醇-磷酸盐缓冲液（磷酸二氢钾2．0g，溶于1000mL水，加磷酸2．0mL，用三乙胺调pH至2．6，摇匀，经0．45pm滤膜过滤）（80：20）为流动相，流速为1．0mL·min^-1，检测波长为225nm。结果：HZ08在1．0～200μg·mL^-1。范围响应线性良好（r=0．9999），最低检测限为20ng·mL^-1，与有关物质分离良好。结论：该法可用于HZ08的含量测定及杂质检查，专属准确。

RP-HPLC法测定卷柏中腺苷的含量

为研究卷柏的质控指标成分 ,选用SHIM -PACKCLC -ODS柱 ,流动相为水 -甲醇 ( 10 0∶2 ) ;检测波长 2 60nm ;室温下 ,建立了卷柏中腺苷含量测定的反相高效液相色谱法 ,并对不同产地卷柏腺苷的含量进行测定。结果 :线性范围为 1～ 8μg ,相关系数r =0 9993,平均回收率为 96 70 % ,RSD为 0 93%。结论 :本法灵敏、简便。

RP-HPLC法测定草麻黄中四种生物碱

目的——用反相高效液相色谱法同时分离测定不同生长年限和不同采收期的草麻黄中四种生物碱.方法——反相高效液相色谱法,即采用WATERS-ODS反相分离柱(4.6mm×250m m),以V(甲醇)∶V(20mmol/L磷酸二氢钾)∶V(三乙胺)=3∶97∶0.25为流动相,紫外检测波长为210nm.结果——草麻黄中四种生物碱得到很好分离;同时试验表明,采摘期对麻黄总碱的含量影响显著,10月份采收的麻黄总碱含量明显高于5月份采摘的麻黄.结论——建立的麻黄碱测定方法具有操作简便、稳定和可重复等特点,可用于麻黄药材及含麻黄复方制剂的质量控制,为麻黄的质量评价提供科学依据.

重组大肠杆菌YK537/pSB┐TK高密度培养过程中有机酸的RP┐HPLC快速分析

采用高压液相色谱法（ＨＰＬＣ），利用Ｃ１８反相柱快速检测重组大肠杆菌ＹＫ５３７／ｐＳＢ－ＴＫ高密度发酵过程中细菌代谢产生的各种有机酸。分析表明，经乙醚和水两次萃取处理后能去除样品中大部分的干扰峰，可获得理想的分离效果，并能定量测出发酵过程中各种有机酸的积累。不同培养方式的结果表明用甘油代替葡萄糖作为细菌生长的碳源可减少乙酸的积累，降低其对细菌生长和外源蛋白表达的抑制作用，从而更易实现重组大肠杆菌的高表达、高密度培养。