rhC5a诱导PBMC产生IL-8与PKC的关系

目的:研究PKC在rhC5a诱导外周血单个核细胞(PBMC)产生IL-8中的作用。方法:将PBMC分别与rhC5a、PMA、Cheleythrine、 Calphostin C、Dequalinium孵育24 h,取上清用法测定IL-8。将PBMC分别与rhC5a、PMA孵育,按一定时间间隔收集细胞测定 PKC活性。用 Cheleythrine、Calphostin C、Dequalinium预处理 PBMC,然后再以rhC5a诱导测定其 PKC活性。结果:PBMC经rhC5a诱导后IL-8产生水平增加,同时PKC活性呈双峰型增高;PBMC经PMA诱导后不仅PKC活性增高,而且IL-8产生水平也增加;Cheleythrine、Calphostin C、Dequalinium能抑制rhC5a介导的PBMC PKC活性和IL-8产生水平增高。结论:PKC参与rhC5a诱导PBMC产生IL-8细胞内信号转导过程。

过敏毒素C5a通过Calpain途径致VEC凋亡损伤

目的探索C5a是否与LPS、毒源性大肠杆菌O157产生的外毒素—V毒素(verotoxin)具有相似的可以导致血管内皮细胞(VEC)凋亡的作用。方法流式细胞仪检测细胞凋亡发生率,首先探讨rhC5a刺激的质量浓度,分别为0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL和1.5μg/mL刺激12 h检测VEC凋亡发生率;在rhC5a质量浓度均为1μg/mL条件下,时间分别为2 h、6 h、12 h、18 h和24 h,检测VEC凋亡发生率。Western blot方法检测凋亡相关蛋白。结果在rhC5a质量浓度为0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL和1.5μg/mL刺激12 h诱导的凋亡发生率分别为4.58%、7.87%、17.94%和19.03%。在确定rhC5a质量浓度1μg/mL的条件下,VEC发生凋亡呈时间依赖关系,在2 h、6 h、12 h、18 h和24 h的时相,细胞凋亡发生率分别为4.58%、12.78%、18.12%、19.08%和19.96%。rhC5a刺激VEC细胞,calpain-2蛋白表达呈时间依赖性,而calpain-1蛋白的表达为浓度依赖性。结论C5a可以导致VEC细胞发生凋亡,calpain参与了这类细胞的凋亡进程。