国产rhGM-CSF预防化疗病人白细胞下降的疗效及不良反应观察

目的：观察国产重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭＣＳＦ）对化疗病人血白细胞下降的防治作用及其不良反应。方法：共７０例癌症病人，包括肺癌、非霍奇金氏淋巴瘤、头颈部癌、乳腺癌、胃癌等病种，按照３：１分别入国产ｒｈＧＭＣＳＦ及进口ｒｈＧＭＣＳＦ组，采取自身交叉对照的方法，每例病人化疗２疗程，其中一疗程加国产或进口ｒｈＧＭＣＳＦ作为治疗组疗程，而另一相同化疗疗程不加ｒｈＧＭＣＳＦ作为对照组疗程，比较治疗组及对照组白细胞（ＷＢＣ）及中性粒细胞（ＡＮＣ）的变化，并观察不良反应。同时与进口品进行初步的比较。结果：治疗组疗程加用国产ｒｈＧＭＣＳＦ，ＷＢＣ下降（＜４０×１０９／Ｌ）、ＡＮＣ下降（＜２０×１０９／Ｌ）持续天数均明显低于对照组疗程（６７天比１０６天，３２５天比６９天），且ＡＮＣ最低点亦高于对照组，因ＡＮＣ下降而延迟下一疗程化疗的发生率明显低于对照组（１１３％ｖｓ４９％），与进口ｒｈＧＭＣＳＦ的临床疗效基本一致。国产ｒｈＧＭＣＳＦ的不良反应多为ＩＩ级的发热、骨骼肌肉疼痛、皮疹、局部硬结，患者能耐受，与进口产品的不良反应无差异。结论：国产ｒｈＧＭＣＳＦ可缩短化疗后ＷＢＣ下降?

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和N端测序鉴定重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的结构

目的 :应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (MALDI -TOF -MS)和N端测序方法鉴定重组人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM -CSF)的结构。方法 :1 用Edman降解法进行N端测序。 2 应用MALDI-TOF -MS测定分子量并鉴定纯度。 3 通过还原、烷基化确定rhGM -CSF分子中二硫键数目。 4 通过蛋白内切酶Glu -C酶切的肽质量指纹谱确证氨基酸序列并确证其中两对二硫键的配对。结果 :1 测定的rhGM -CSFN端 15个氨基酸序列与从cDNA推导的序列一致。 2 测定的rhGM -CSF分子量与理论计算值一致。 3 证明rhGM -CSF没有自由巯基 ,含有两对二硫键 ,与理论值一致。 4 证明rhGM -CSF的氨基酸序列是正确的 ,并确证其中的两对二硫键配对正确。结论 :确证重组人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM -CSF)的结构是正确的 ,没有修饰、变异和氨基酸的丢失。应用的方法灵敏、准确。

rhGM-CSF凝胶与异种皮对深Ⅱ度烧伤创面愈合效果分析

目的探讨重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rh GM-CSF)凝胶与异种皮相对比,对深Ⅱ度烧伤创面愈合效果差异。方法以入院病例号为编号,采用数字表法,将70例深Ⅱ度烧伤患者随机分成两组,每组35例。对照组按照常规治疗方法,同时削痂后给予异种皮(猪皮)覆盖;观察组患者削痂后给予rh GM-CSF凝胶覆盖创面。治疗7天时记录并观察患者换药疼痛程度、创面溶痂率、完全溶痂时间、创面愈合时间以及安全性。结果观察组VAS和TESS分别为2.8±0.7分和5.3±0.8分,均低于对照组(P<0.05);第3、7、10天观察组创面溶痂率34.5%、64.6%、90.6%均优于对照组25.6%、48.7%、78.5%(P<0.05);观察组患者完全溶痂时间和创面愈合时间分别为8.3±3.8天和17.9±4.5天,优于对照组(P<0.05)。结论与异种皮相比,rh GM-CSF凝胶可有效促进深Ⅱ度烧伤创面愈合,提高创面溶痂率,降低患者换药痛苦,安全性高,应用前景良好。

rhGM-CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成的影响

目的 探讨rhGM CSF促进口腔溃疡愈合的作用机制。方法 取体外培养的胎儿口腔粘膜成纤维细胞 ,用rhGM CSF刺激成纤维细胞后第 2、4、6天用细胞计数及3 H 胸腺嘧啶掺入法 (3 H TdR)测定其增殖情况。结果 rhGM CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成有刺激作用 ,在 80～ 10 0ng/ml时 ,细胞生长达到最佳状态 ,过高浓度rhGM CSF的刺激作用反而下降。结论 rhGM

rhGM-CSF治疗急性再生障碍性贫血的效果

在常规治疗急性再生障碍性贫血 (AAA)基础上用大剂量的rhGM -CSF连续静脉给药 2w(5～ 15 μg kg.d)治疗 8例 ,并与常规治疗方法进行比较 ,研究结果表明 ,观察组较对照组外周血白细胞数增加 5～ 30倍。rhGM-CSF可以缓解AAA的临床症状 ,降低感染机会 ,是辅助治疗AAA的有效方法。

rhIL-3、rhGM-CSF对γ线照射恒致河猴造血损伤的作用

观察了国产白介素３（ｒｈＩＬ－３）和市售粒巨噬系集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）单用和伍用对恒河猴辐射后造血功能的改善作用。结果表明，单用ＩＬ－３２０μｇ／ｋｇ×２８天可提高３．５Ｇｙ照射猴白细胞最低值水平，缩短白细胞低水平的持续时间；减缓血小板的下降趋势。单用ＧＭ－ＣＳＦ使白细胞恢复提前，超常恢复时峰值可达照前的５００％。二者伍用兼有二种因子的效果，白细胞减少幅度小且时间短，恢复提前，回落平稳。两因子单用和伍用可使受照猴骨髓造血祖细胞比对照增多约３～９倍，但停药后迅速下跌。

大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的纯化

对重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）的工程菌表达产物进行纯化，经过超声破碎，包涵体抽提，凝胶层析，复性，离子交换一系列纯化步骤，终产物纯度达９８％，比活性达１０００００００ｕ／ｍｇ。

rhGM—CSF对人骨髓粒单祖细胞集落形成及U937细胞分化的影响

本文应用造血祖细胞体外培养技术研究了重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ—ＣＳＦ）对正常人骨髓粒单祖细胞集落（ＣＦＵ—ＧＭ）形成的影响，结果表明ｒｈＧＭ—ＣＳＦ在体外能促进细胞集落的形成，此种效应在一定范围内呈剂量依赖关系，与ＬＥＵＣＯＭＡＸ各剂量组相比无显著性差异。采用ＮＢＴ还原试验和ＡＰＡＡＰ法观察了ｒｈＧＭ—ＣＳＦ对Ｕ９３７细胞分化的影响，结果显示ｒｈＧＭ—ＣＳＦ能抑制Ｕ９３７细胞的增殖，促进其分化，部分细胞具有ＮＢＴ还原能力，ＣＤ１１６阳性细胞数增加。

rhGM-CSF对VP-16诱导的HL-60细胞凋亡的影响

为探讨rhGM CSF对VP 16诱导的HL 60细胞凋亡的影响 ,我们观察了预先应用rhGM CSF孵育的HL 60细胞由VP 16诱导的凋亡过程及凋亡相关基因bcl 2和fas的表达变化。应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态和超微结构的变化 ,凝胶电泳检测DNA的碎片 ,流式细胞术检测细胞凋亡率、bcl 2和fas的表达。实验结果显示 ,rhGM CSF可抑制VP 16诱导的HL 60细胞的凋亡 ,它加强了VP 16对bcl 2表达的下调作用 ,抑制了VP 16对fas表达的上调作用。由此推测 ,rhGM CSF可能是通过下调fas表达降低HL 60细胞对VP

分泌型rhGM-CSF中试产品的质量分析

参照 2 0 0 0版《中国生物制品规程》对 3批粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)原液及半成品进行理化及生物学活性检定 ,结果显示 3批rhGM CSF原液及半成品均符合 2 0 0 0版生物制品规程的各项检定标准。对 3批rhGM CSF中试产品质量分析 ,说明rhGM CSF的生产工艺合理 ,产品质量稳定 。

rhGM-CSF对^(60)Co照射小鼠外周血细胞和骨髓细胞动态变化的影响

目的： 探讨重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ） 对受照小鼠外周血和骨髓细胞的影响． 方法：采用６．０ Ｇｙ ６０ Ｃｏγ照射小鼠造成造血功能损伤，采尾静脉血计数外周血白细胞及其分类， 取一侧股骨骨髓计数骨髓有核细胞，取另侧骨髓制片观察骨髓粒系分裂池、存贮池、成熟池骨髓细胞绝对值动态变化． 结果： Ｌｅｕｃｏｍ ａｘ 与ｒｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ不能使受损血细胞恢复常态，但能动员外周造血器官与贮备池血细胞加速释放， 在骨髓严重受抑后，能使骨髓细胞粒系增殖提前，分裂池细胞分化增殖，诱导贮备池不成熟的细胞发育成熟细胞． 结论：ｒｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ对６０ Ｃｏ 辐射小鼠的粒细胞和单核细胞具有增殖和动员作用．

大肠杆菌表达的rhGM—CSF发酵纯化工艺研究

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM－CSF）基因表达产物在大肠杆菌的胞浆中以不溶性包涵体的形式存在、包涵体用超声破菌分离后，经变性、复性，用流水层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等进行纯化。SDS—PAGE表明终产物纯度达97．8％。纯化蛋白的比活性根据MTT法在TF—1细胞测定的结果，可达3×107u／mg蛋白。

白头翁汤保留灌肠联合rhGM-CSF治疗Ⅱ～Ⅲ期宫颈癌盆腔放疗所致急性放射性直肠炎疗效及对患者炎症反应的影响

目的:观察白头翁汤保留灌肠联合rhGM-CSF对Ⅱ~Ⅲ期宫颈癌盆腔放疗所致急性放射性直肠炎的疗效及对炎症反应的影响。方法:将83例Ⅱ~Ⅲ期宫颈癌盆腔放疗所致的急性放射性直肠炎患者随机分为观察组(41例)和对照组(42例),两组均接受消炎止痛止泻等对症治疗,对照组在其基础上给予rhGM-CSF治疗,观察组在对照组基础上加用白头翁汤保留灌肠治疗,两组疗程均为两周。比较两组的临床疗效,记录两组治疗前后中医症状积分、直肠黏膜评分及KPS评分、血清炎性细胞因子的变化。结果:观察组临床总有效率为92.68%(38/41),对照组为71.43%(30/42),观察组显著高于对照组(P<0.05)。与治疗前比较,两组治疗后腹痛、腹泻、腹胀、便血、里急后重、食少、身体困重、身热不扬积分和中医症候总积分均明显降低(P<0.05),治疗后以上积分观察组较对照组改善更明显(P<0.05);与治疗前比较,观察组直肠黏膜评分明显降低,KPS评分则有明显增加(P<0.05),治疗后观察组直肠黏膜评分低于对照组(P<0.05),KPS评分显著高于对照组(P<0.05)。与治疗前比较,两组治疗后血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1(IL-1)水平明显降低(P<0.05);治疗后观察组以上指标均低于对照组(P<0.05)。结论:白头翁汤保留灌肠联合rhGM-CSF治疗Ⅱ~Ⅲ期宫颈癌盆腔放疗所致急性放射性直肠炎的疗效确定,可显著改善患者临床症状及生活质量,抑制肠道黏膜损伤,抑制炎症反应。

rhGM-CSF/IL-3融合蛋白对小鼠造血功能的影响

目的：观察重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-3（rhGMCSF/IL-3）融合蛋白对小鼠造血功能的影响。方法：利用环磷酰胺（CTX）抑制骨髓及辐照致骨髓损伤造模，检测rhGM-CSF/IL-3对CTX所致骨髓抑制小鼠外周血WBC、RBC、血小板、脾重、骨髓有核细胞（BMC）的影响及对脾集落形成单位（CFU-S）的影响和对小鼠生存的保护作用。结果：rhGMC-SF/IL-3对 CTX骨髓抑制小鼠外周血WBC、RBC、血小板及BMC均有明显提升作用（P<0.01），并显著提高生存率（P<0.05）和CFU-S数（P<0.01），而对脾重影响差异无显著性（P>0. 05）。结论：rhGM-CSF/IL.3有减轻骨髓损伤和促进造血干/祖细胞增殖和分化的作用。

rhGM-CSF凝胶联合LEEP治疗CIN的疗效研究

目的研究宫颈电热圈环切术(LEEP)联合外用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子(rhGM-CSF)凝胶治疗宫颈上皮内瘤变(CIN)的疗效。方法选择CIN患者62例,分为治疗组42例和对照组20例,均行LEEP治疗,术后创面分别外敷rhGM-CSF凝胶和无菌纱布,术后随访半年,观察两组疗效及并发症发生率,并进行统计学分析。结果两组有效率分别为100.00%和80.00%,并发症发生率分别为2.38%和25.0%,两者间比较均有显著差异(P<0.05)。结论 ZLEEP联合rhGM-CSF凝胶治疗CIN可提高疗效,减少并发症的发生率。

培养基pH值与提纯方法对大肠杆菌表达rhGM-CSF产率的影响

目的为了提高大肠杆菌表达的重组人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)的产率 ,对影响工程菌生长、产物表达和产物提纯等因素进行探索。方法设计 3种pH值培养基 ,以菌得率、表达率为指标 ,观察 pH对工程菌生长和表达的影响。以包涵体得率、纯度和产品得率、纯度、活性为指标 ,观察表达产物提纯各步对产率的影响。用SDS PAGE薄层扫描法测定包涵体和产品纯度。用TF1细胞MTT法测定产品rhGM CSF活性。结果 pH7.0培养基最好 ,菌得率 2 .2 2g/L ,表达率为 2 3 % ,比其它pH值培养基约高 1倍。菌体不经冻存处理即进行破菌制备包涵体 ,得率可提高 2 .5倍。在rhGM CSF复性步中 ,复性液中加入少量PEG 40 0 0 ,可提高复性率 0 .8倍。采用优化条件制备大肠杆菌rhGM CSF ,可提高产率约 8倍。结论影响大肠杆菌表达rhGM CSF产率的因素较多 ,优化培养、表达、纯化各步的条件 ,均可大幅度提高产率。

rhGM-CSF、纳米银外用对深Ⅱ°烫伤创面愈合的影响研究

目的 :研究外用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rh GM-CSF)和纳米银,对深Ⅱ°烫伤创面愈合的影响。方法 :用Wistar大鼠建立深Ⅱ°烫伤模型,分为A、B、C 3组,A组(30例):凡士林纱布覆盖;B组(30例):纳米银覆盖;C组(30例):rh GM-CSF涂抹创面;伤后第1、4、7、10、14、21天,观察创面愈合情况,计算愈合率,按照酶联免疫吸附法测定血清中血管内皮生长因子(VEGF)及表皮生长因子(EGF)水平。结果:A、B、C 3组均在伤后第10天出现血管化和上皮化;创面愈合率C组>B组>A组,第10天各组之间差异无统计学意义(P>0.05),第14、21天各组之间差异有统计学意义(P<0.05);VEGF水平,A组、B组、C组分别在第21、14天达峰值,伤后第1天各组间差异无统计学意义(P>0.05),第4、7、10、14天各组间及第21天A组和C组之间差异有统计学意义(P<0.05);EGF水平,各组均在第21天达峰值,第1、4天各组间及第7天A组与B组间差异无统计学意义(P>0.05),第7天C组与A组、B组之间及第10、14、21天各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:rh GM-CSF、纳米银外用,均加速深Ⅱ°烫伤创面愈合,并且rh GM-CSF效果优于纳米银。

rhGM-CSF对糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面微循环形成的作用

目的探讨重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子(rhGM-CSF)对糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面微循环形成的作用。方法 42只雄性SD清洁级大鼠用链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病模型,造模成功后稳定2个月,随机分为实验组36只和对照组6只,实验组大鼠背部造成4个直径3cm深II度烫伤创面,分别给予rhGM-CSF凝胶、SD-Ag冷霜、空白凝胶、生理盐水(对照用药),每日换药1次,实验组大鼠根据伤后1、3、7、10、14、21d随机分成6组,每组6只,对照组为非烫伤糖尿病大鼠。测量和计算各时相点创面愈合率。采用ELISA法检测创面组织成纤维细胞生长因子-2(FGF-2);采用免疫组化染色法检测Ⅷ因子,评价微血管密度(MVD)。结果 rhGM-CSF凝胶组(A组)与SD-Ag冷霜组、空白凝胶组和生理盐水组(B组)相比,烫伤后第10、14、21d,创面愈合率显著提高(P<0.05);烫伤后第3、7、10、14、21d,创面组织FGF-2含量显著增加(P<0.05);烫伤后第10、14、21d,创面微血管密度显著增大(P<0.05)。SD-Ag冷霜组、空白凝胶组和生理盐水组间比较,差异无统计学意义。结论 rhGM-CSF凝胶能通过增加糖尿病大鼠深II度烫伤创面组织FGF-2含量,增加创面微血管形成,促进创面愈合。

rhG-CSF与rhGM-CSF动员人外周血单核细胞后DC疫苗数量及功能变化的比较

目的探讨利用人外周血单核细胞制备树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗过程中,使用重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)和重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte/macrophage colony-stimulating factor,rhGM-CSF)进行动员的临床应用可行性,并比较两者作为动员试剂的优劣。方法对2011年8月至2013年12月中国人民解放军第81医院肿瘤生物治疗科进行DC疫苗治疗的恶性肿瘤患者134例进行随机分组,其中rhG-CSF动员者69例,rhGM-CSF动员者65例。rhG-CSF动员组在血细胞分离机采集前1天行rhG-CSF皮下注射3μg/(kg·d),rhGM-CSF动员组在血细胞分离机采集前1天行rhGMCSF皮下注射3μg/(kg·d)。比较两组动员前后血常规变化的差异;分析两组采集终产品中单个核细胞(mononuclear cell,MC)数量及表型,检测体外培养所得DC的数量、表型及细胞因子的表达。结果动员后rhGM-CSF动员组单核细胞增高值高于rhG-CSF动员组(P≤0.001),但中性粒细胞计数增高值低于rhG-CSF动员组(P≤0.001),其余血常规项目两者差异无统计学意义。rhGMCSF动员组采集终产品中单个核细胞数量高于rhG-CSF动员组(P=0.046),而CD14+单核细胞的比例两组差异无统计学意义。rhGM-CSF动员组最终诱导所得DC数量高于rh GCSF动员组(P=0.011),且DC细胞表面分子HLA-DR的表达高于rhG-CSF动员组(P=0.001),其余CD80、CD86,CD83、CD11C、CD54表达两组差异无统计学意义。两组DC细胞Th1型和Th2型细胞因子的表达差异都无统计学意义。结论在用人外周血单核细胞制备DC疫苗的过程中,使用rhGM-CSF动员比rhG-CSF更有优势。