rhHGF/cHGF体外抑制SMMC-7721人肝细胞癌细胞生长

目的 :观察重组人肝细胞生长因子 (rhHGF)和天然小牛肝细胞生长因子 (cHGF)对SMMC - 772 1人肝细胞癌细胞株的生长效应。方法 :传代后处于指数生长期的SMMC - 772 1细胞经过 (HGF处理组 )或不经 (对照组 )rhHGF/cHGF处理培养 1 - 4d ,采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测细胞数。并通过流式细胞仪对rhHGF处理细胞作细胞周期分析。结果 :rhHGF(5 - 2 0 μg/L)和cHGF(2 5 - 1 0 0mg/L)对SMMC - 772 1细胞增殖具有类似的剂量依赖性抑制作用。在实验浓度内 ,使用最高浓度时 (rhHGF为 2 0 μg/L、cHGF为 1 0 0mg/L)对细胞增殖抑制作用最强。使用不同浓度 (5μg/L、1 0 μg/L、2 0 μg/L)rhHGF处理 3d的培养细胞均有一半以上停留在G0 /G1 期。结论 :rhHGF和cHGF对SMMC - 772 1人肝细胞癌细胞的体外生长都有强烈的抑制效应。这是由于受HGF的作用细胞生长易于终止在G0

重组人肝细胞生长因子α的纯化与活性测定

目的纯化重组人肝细胞生长因子α(rhHGFα)包涵体,复性并测定其活性。方法大肠杆菌中表达的rhHGF琢以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的25%。离心分离包涵体,用8mol/L尿素溶解,梯度稀释复性。经SephadexG75凝胶过滤和POROSHQ阴离子交换纯化,噻唑蓝法(MTT)测定活性。结果rhHGF琢纯度达到90%以上,其刺激肝细胞生长的活性达到rhHGF标准品的80%。结论建立了纯化rhHGF琢的技术路线,rhHGF琢具有刺激原代培养大鼠肝细胞生长的作用。

肝细胞生长因子对四氯化碳损伤肝细胞的保护作用及相关基因表达

利用无血清原代培养大鼠肝细胞 ,观察重组人肝细胞生长因子 (rhHGF)对CCl4染毒肝细胞的保护作用。结果表明 :( 1)rhHGF ( 5ng/ml)预处理后可显著提高CCl4( 15mmol/L)染毒肝细胞存活率 ,降低细胞内丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、K+的漏出 ;( 2 )表皮生长因子 (EGF ,5 0ng/ml)和rhHGF ( 5ng/ml)合用预处理肝细胞 ,CCl4染毒后细胞内ALT、K+漏出较rhHGF和EGF单独保护组进一步降低 ;( 3 )大鼠肝部分切除和CCl4( 5 0 % ,2 5ml/kgbw)染毒后 ,再生肝内HGF基因及其受体基因 /c met的表达分别较假手术和盐水对照组显著升高。结果提示 ,rhHGF对CCl4染毒大鼠肝细胞具有保护作用 ;EGF和rhHGF有协同保护作用 ;

重组人肝细胞生长因子的纯化及鉴定

目的对重组人肝细胞生长因子（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｏｒ， ｒｈＨＧＦ）进行初步纯化及鉴定。方法 培养上清液经过离心、超滤，在ＦＰＬＣ系统上经肝素亲和层析分离纯化，用ＥＬＩＳＡ法检测、收集ｒｈＨＧＦ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电 泳鉴定纯度和相对分子质量，大鼠原代肝细胞培养法检测ｒｈＨＧＦ的生物学活性。结果ｒｈＨＧＦ主要在０．９～１．３ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ 范围内被洗脱，由约６２ ０００和３４ ０００两个亚基组成，明显促进大鼠肝细胞ＤＮＡ合成。结论 经肝素亲和层析分离，从 表达山ＨＧＦ的ＣＨＯ细胞培养上清液中纯化出有活性的ｒｈＨＧＦ。

重组人造血生长因子对抗白血病药物作用的影响

采用流式细胞仪及ＩＮＴ细胞毒检测，研究造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）对抗白血病药物细胞毒性的影响，并探讨ＨＧＦ与化疗药物联合应用的作用机理。研究结果表明：３种抗白血病药物柔红霉素（ＤＮＲ）、三尖杉酯碱（Ｈ）、足叶乙甙（ＶＰ１６）对白血病细胞敏感性存在较大差异；ＧＭＣＳＦ、ＩＬ３均能增加ＶＰ１６、ＤＮＲ对白血病细胞的杀伤作用；ＧＭＣＳＦ能提高Ｈ的细胞毒性作用，而对正常骨髓细胞。

肝细胞生长因子与多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖的关系

目的研究重组人肝细胞生长因子(rhHGF)对常染色体显性多囊肾病(ADPKD)囊肿衬里上皮细胞增殖的影响及其信号转导途径。方法3H-TdR掺入法研究rhHGF对细胞增殖的影响。Western印迹检测囊肿衬里上皮细胞c-MET酪氨酸激酶磷酸化。结果rhHGF显著促进ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖,以1ng/mlrhHGF作用48h组最强(P<0.01)。抗HGF抗体、genistein显著抑制rhHGF刺激的囊肿衬里上皮细胞增殖(P<0.01),抗TGF-β1抗体不影响rhHGF刺激的囊肿衬里上皮细胞增殖(P>0.05)。rhHGF作用的囊肿衬里上皮细胞c-MET酪氨酸激酶磷酸化呈时间相关性。抗HGF抗体不诱导c-MET酪氨酸激酶磷酸化。结论rhHGF显著刺激囊肿衬里上皮细胞增殖,HGF和c-MET结合激活c-MET酪氨酸激酶磷酸化以及细胞内pp60c-src可能参与了rhHGF促囊肿衬里上皮细胞增殖的信号转导过程。