重组人干扰素-β(rhIFN-β)中试工艺研究

目的 建立适合大规模生产重组人干扰素 β(rhIFN β)的分离纯化工艺。 方法 采用超声破菌、离心分离包涵体、仲丁醇萃取、Sephacryl 10 0、HIC层析等分离纯化步骤。结果 纯化的rhIFN β纯度达 98%以上 ,比活性为 2 .0× 10 7IU/mg,各项质量指标均符合质控标准。结论 此纯化工艺简便 ,可重复性好 ,适于大规模生产。

使用磁性亲和载体纯化rhIFNα

目的：合成可用于分离基因重组干扰素－α的α－ｇａｒｏｓｅ－单克隆抗体磁性微球，并建立一套磁性亲和载体分离蛋白质的方法．方法：使用物理包埋法制备磁性ａｇａｒｏｓｅ载体，使用ＣＮＢｒ法将抗体连接在磁性微球上制备磁性亲和载体．结果：通过优化合成条件，确定单抗的合成条件为ＣＮＢｒ活化用量为２００ｇ／Ｌ磁性载体，单抗的最大偶联量为１５．１ｇ／Ｌ磁性载体．使用磁性单抗载体进行一步纯化，纯化后ＩＦＮ－α的比活性为１．０ｘ１０１１ＩＵ／ｇ，电泳后使用考马斯亮兰染色其纯度为８８％，活性回收率７０％．结论：磁性亲和技术是一个简单、快速分离蛋白质的好方法．

豚鼠及家兔rhIFNα-2b喷雾剂毒性试验与病理检查

目的观察rhIFNα-2b喷雾剂对豚鼠和家兔鼻腔黏膜是否具有刺激作用或伤害反应,同时观察其对上述动物内脏器官的毒性病理损伤。方法将rhIFNα-2b喷雾剂喷入豚鼠和家兔鼻腔进行局部刺激试验、急性毒性试验及长期毒性试验,各试验分别设空白对照组、稀释液对照组及实验组。长期毒性试验实验组按给药浓度不同分低、中、高3个剂量组。每组用4只动物,实验组给予rhIFNα-2b喷雾剂,稀释液对照组喷入喷雾剂稀释液,空白对照组未喷任何物质。临床观察后全部活杀。剖检鼻腔、咽部和喉部黏膜及内脏等器官,10%中性甲醛液固定,常规病理制片,光镜观察。结果鼻腔局部刺激试验、急性毒性试验及长期毒性试验中各实验组与稀释液和空白对照组之间的病理组织学所见相似,均未见明显毒性病理损伤。结论rhIFNα-2b喷雾剂对豚鼠和家兔的鼻腔黏膜及内脏器官均未见明显毒性作用,证实rhIFNα-2b喷雾剂具有可靠的安全性。

PEG-rhIFN-β-1a注射液中聚山梨酯20检测方法研究

目的：建立一种测定聚乙二醇化重组人干扰素β-1a（PEG - rhIFN -β-1a）注射液中聚山梨酯20含量的测定方法。方法供试品经与三氯甲烷、硫氰钴铵溶液反应，室温静置后，取样测定620 nm 波长下的吸光度值。结果供试品中聚山梨酯20的测定含量与添加量基本一致，回收率在98％～102％之间，RSD 小于2.0％。结论本方法简便、准确、可定量测定聚乙二醇化重组人干扰素β-1a 注射液及其他制剂中聚山梨酯20的含量。

“Western Blotting”技术在rhIFNα2a成品冻干制剂中的应用

阐述了基因工程人干扰素α2 a( rh IFNα2 a)在进行成品电泳时 [1 ] ,如何控制样品加样量 ,以便得到清晰的电泳图像及“Western Blotting”图像。

rhIFNα2b雾化吸入联合阿昔洛韦治疗IM患儿的疗效观察

目的 探究rhIFNα2b雾化吸入联合阿昔洛韦治疗传染性单核细胞增多症(IM)患儿的疗效及对症状缓解和外周血异型淋巴细胞的影响。方法 选取2020年1月至2022年8月我院收治的60例IM患儿,按简单随机化法分为观察组和对照组各30例。对照组采用静滴阿昔洛韦进行治疗,观察组在对照组基础上联合采用rhIFNα2b雾化吸入治疗。观察两组临床症状消失时间,记录治疗后两组异常淋巴结细胞、EB病毒抗体恢复正常水平时间及不良反应发生情况,比较治疗前、治疗14天后两组免疫细胞T淋巴细胞含量(Th1、Th2、CD4^(+)、CD8^(+))炎性因子[淀粉样蛋白A(SAA)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]的变化。结果 观察组临床症状消失时间及异常淋巴结细胞、EB病毒抗体恢复正常水平时间均显著低于对照组(P均<0.05);两组不良反应发生率比较,无显著差异(P>0.05);治疗14天后两组Th1、Th2、CD4^(+)水平均明显升高,且观察组显著高于对照组(P均<0.05);治疗后两组CD8^(+)、SAA、hs-CRP水平均明显降低,且观察组显著低于对照组(P均<0.05)。结论 rhIFNα2b雾化吸入联合阿昔洛韦的安全性较好,能迅速缓解IM患儿的临床症状,改善患儿免疫功能、抑制炎症反应,适合于临床推广。

聚乙二醇活性酯对干扰素α_(2b)化学修饰的初步研究

目的 探讨聚乙二醇活性酯（ｍＰＥＧ－ｓｓＭＷ ５０００和ＭＷ ２００００）修饰重组人干扰素α２ｂ（ｒｈＩＦＮ α２ｂ）的 最佳反应条件。方法 在不同反应条件下，用聚乙二醇活性酯修饰ｒｈＩＦＮα２ｂ，采用ＶＳＶ－Ｗｉｓｈ细胞病变抑制法测定 修饰后ｒｈＩＦＮα２ｂ的生物学活性。结果 随着 ＰＥＧ对ｒｈＩＦＮα２ｂ摩尔比的增加或修饰反应时间的延长，ｒｈＩＦＮα２ｂ的修怖产 物相对分子质量和不均一性增加，且随着ｒｈＩＦＮα２ｂ修饰度的提高，其生物学活性逐渐降低。结论 初步确立了ＰＥＧ 修饰ｒｈＩＦＮα２ｂ的反应条件，反应印尔比与聚乙二醇活性酯的相对分子质量是影响反应的关键因素。

聚乙二醇修饰β-干扰素的研究

采用平均分子量为 5kD的已活化的单甲氧基聚乙二醇 (mPEG)对重组人 β 干扰素 (rhIFN β)进行化学修饰。优化修饰条件 ,选择对rhIFN β反应性高的修饰剂 ,制备三种不同修饰程度的修饰物 ,并对修饰物进行初步检定。三种修饰物的修饰率分别为 10 .12 %、2 2 .99%、4 2 .4 7% ;比活性分别保留为原来的 93.5 3%、4 8.6 9%、13.18% ;PEG修饰后的rhIFN

重组人干扰素βser17工程菌发酵培养条件的优化研究

实验对重组人干扰素βser17(rhIFNβser17)工程菌的发酵培养条件进行了研究,通过实验优化确定了适宜rhIFNβser17表达的培养基、诱导剂使用浓度、诱导时期和诱导后的收获时间等,建立了发酵培养工艺,并在50L发酵罐进行了中试发酵,菌体收获量湿重达13.08g/L,rhIFNβser17表达量占菌体总蛋白的20.2%,纯化后比活性达2×107IU/mg蛋白以上,为进一步的下游开发奠定了基础。

重组人干扰素α-2b对硬膜外瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的探讨重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)对体外培养的硬膜外瘢痕来源的成纤维细胞生物学作用的影响。方法制作兔椎板切除模型。利用体外细胞培养技术,通过MTT测定法、流式细胞术等方法观察、分析rhIFNα-2b对硬膜外瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响,数据采用方差分析及SNK-q检验处理。结果与对照组比较,实验组加入rhIFNα-2b后,硬膜外瘢痕成纤维细胞生长趋势及增殖活性被明显抑制,G1期细胞百分数明显增高。结论rhIFNα-2b对硬膜外瘢痕成纤维细胞的生长趋势及增殖活性有明显抑制作用,说明rhIFNα-2b在预防硬膜外瘢痕的形成中有一定的应用价值。

干扰素对腭裂术后裸露骨面瘢痕成纤维细胞生物学影响的实验研究

目的：探讨干扰素（IFN）对体外培养的腭裂术后裸露骨面瘢痕来源的成纤维细胞生物学作用的影响。方法：制作兔腭裂术后裸露骨面瘢痕动物模型,利用体外细胞培养技术,通过MTT法、流式细胞术等方法观察、分析rhIFNα-2b和rhIFN-γ对腭裂术后瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响,数据采用方差分析及q检验处理。结果：与对照组比较,实验组加入干扰素后,腭裂术后瘢痕成纤维细胞的生长趋势及增殖活性及被明显抑制,S-G2-M期细胞百分数明显降低。结论：干扰素对腭裂术后瘢痕成纤维细胞的生长趋势及增殖活性具有明显抑制作用,说明在防治腭裂术后裸露骨面瘢痕的形成中有一定的应用价值。

人干扰素/β肿瘤坏死因子重组杂合蛋白的免疫调节功能

报道了人干扰素／β肿瘤坏死因子（ｒｈＩＦＮ－／ｒｈＴＮＦ－β）杂合蛋白对正常动物免疫反应的影响，结果如下：经ＬＰＳ激活的豚鼠腹腔巨噬细胞，当与适宜剂量的杂合蛋白温育后，其无细胞上清液中的Ｈ２Ｏ２浓度高于对照组。ＤＮＣＢ致敏的大鼠在半抗原攻击前，如在一侧耳翼内注入适宜剂量的ｒｈＩＦＮ－／ｒｈＴＮＦ－β，则由ＤＮＣＢ诱导的迟发超敏（ＤＴＨ）反应大于在另一侧耳翼内注入ＰＢＳ作为对照的反应强度。在抗体形成细胞（ＡＦＣ）反应检测系统中，经异种红细胞致敏的小鼠免疫脾细胞用杂合蛋白做短暂处理后，其ＡＦＣ反应比对照组有所增强。

用地高辛标记探针检测基因工程人β干扰素制品中的外源DNA

基因工程人β干扰素工程菌经发酵培养、纯化后获得纯的制品，采用斑点杂交技术，用非放射性地高辛标记超声裂解的全工程菌ＤＮＡ作为探针，检测基因工程人β干扰素纯品，结果显示：基因工程人β干扰素纯品中的外源ＤＮＡ含量小于１００ｐｇ／剂。

基因工程人β干扰素的旋转等电聚焦电泳分离

采用旋转等电聚焦电泳对基因工程人β型干扰素（ｒｈＩＦＮ－β）部分纯化品进行分离，经４小时聚焦后，活性回收达５６．２５％，纯化倍数为３１．７５。与其它分离方法相比，具有快速、简便的特点。

聚乙二醇修饰重组人干扰素α_(2a)的研究

目的 探讨聚乙二醇(mPEG-ss Mr 5000和Mr 20000)修饰重组人干扰素α2a(rhlFNα2a)的最佳反应条件。方法在不同反应条件下,用聚乙二醇修饰rhIFNα2a,采用VSV-Wish细胞病变抑制法测定修饰后rhIFNα2a的体外抗病毒活性。结果 随着PEG对rhlFNα2a摩尔比增加和修饰反应时间的延长,rhIFNα2a修饰产物相对分子质量和不均一性增加,且随着rhIFNα2a修饰度的提高,其体外抗病毒活性逐渐降低。结论 初步确立了PEG修饰rhIFNα2a的反应条件,表明反应摩尔比与聚乙二醇的相对分子量是影响反应的关键因素。

重组人干扰素βSer^(17)的结构及活性分析

目的分析大肠杆菌表达的重组人干扰素βSer17(rhIFN-Ser17)的分子结构及其生物学活性。方法通过West-ernblot、氨基酸末端测序、质谱及生物学活性分析等,对大肠杆菌表达的rhIFN-Ser17分子进行鉴定。结果大肠杆菌表达的rhIFN-βSer17的N末端20个氨基酸及C端2个氨基酸序列与文献报道一致,产物的相对分子质量为19877·9,比活性超过2×107IU/mg蛋白。结论大肠杆菌表达的rhIFN-βSer17分子结构与理论推测值完全一致。

重组人干扰素α1b辅助治疗闭塞性细支气管炎患儿的效果及对其炎性反应的影响

目的:探讨重组人干扰素α1b(rhIFNα1b)辅助治疗闭塞性细支气管炎(Bo)患儿的效果及对其炎性反应的影响。方法:按照随机数字法将某院2018年10月-2019年11月收治的83例Bo患儿分为对照组41例和观察组42例,对照组采用常规治疗,观察组在对照组的基础上联合rhIFNα1b治疗,观察两组临床疗效、症状消失时间、肺功能及炎性指标。结果:治疗后,观察组临床疗效高于对照组(P<0.05);观察组咳嗽、喘息、气促、呼吸困难消失时间均短于对照组(P<0.05);观察组RR、VPTEF/VE低于对照组,TV、TPTEF/TE高于对照组(P<0.05),观察组血清IFN-γ、IL-17、SP-D水平低于对照组,IL-4高于对照组(P<0.05)。结论:rhIFNα1b辅助治疗小儿Bo,可降低炎症水平、促进症状恢复、改善肺功能,提高临床疗效。

重组人干扰素α-2b对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)在体外对乳腺癌细胞的影响。方法:以成人外周血单个核细胞(PBMNC)为对照,MTT法检测rhIFNα-2b对人乳腺癌MCF-7细胞增殖效果,TRAP-ELISA法检测其端粒酶活性。结果:rhIFNα-2b可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,下调端粒酶活性,二者均呈剂量依赖性及时间依赖性。结论:rhIFNα-2b抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用可能与下调端粒酶活性有关。

丙种球蛋白联合重组人干扰素α-2b对重症手足口病患儿的免疫功能及血清细胞因子水平的影响

目的分析丙种球蛋白联合重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)治疗重症手足口病(HFMD)患儿的效果。方法回顾性选取重症HFMD患儿97例,予以常规治疗,接受rhIFNα-2b治疗的48例为对照组,接受丙种球蛋白联合rhIFNα-2b治疗的49例为研究组,比较两组疗效、治疗前、治疗5d后血清细胞因子[白介素-6(IL-6)、白介素-1(IL-1)、γ-干扰素(IFN-γ)]水平。结果研究组总有效率93.88%高于对照组72.92%(P<0.05);治疗5d后研究组血清IL-6、IL-1、IFN-γ水平低于对照组(P<0.05);治疗5d后研究组CD3+与CD4+水平均较对照组升高(P<0.05)。结论丙种球蛋白联合rhIFNα-2b治疗重症HFMD患儿,疗效确切,可明显改善细胞因子水平,提高免疫功能。